胡麗霞 程 璐 張 耕 張 紅

武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022

HPLC法測定前列回春丸中虎杖苷的含量

胡麗霞 程 璐 張 耕 張 紅*

武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022

目的：建立前列回春丸中虎杖苷含量測定的方法。方法：Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；檢測波長：306nm；流動(dòng)相：乙腈－水（19∶81）；柱溫：30℃；流速：1ml／min條件下，采用高效液相色譜法測定虎杖苷的含量。結(jié)果：虎杖苷進(jìn)樣量在0.0394～0.4334μg／ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9998，n＝6），平均回收率為98.85%（RSD＝1.08%，n＝6）。結(jié)論：該方法簡便易行、重現(xiàn)性好，可作為前列回春丸質(zhì)量控制方法。

前列回春丸；虎杖苷；高效液相色譜法

前列回春丸 （濃縮丸）是在前列回春膠囊［1］的基礎(chǔ)上進(jìn)行劑型改革而進(jìn)一步開發(fā)的新制劑，配方主要由虎杖、淫羊藿、炮山甲等十九味中藥組成，具有益腎回春、活血通淋、清熱解毒的功效。虎杖苷又名白藜蘆醇苷，為虎杖的主要有效成分，具有抗癌、抗菌消炎、抗氧化等生物活性。原膠囊劑標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定項(xiàng)目，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定前列回春丸中虎杖苷的含量，為該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC－10AT，檢測器SPD－10A，浙大N2000軟件）；數(shù)控超聲波清洗器（KQ－300DE型，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料 前列回春丸（規(guī)格：每8丸相當(dāng)于原生藥3g，本院制劑中心制備）；虎杖苷對照品（批號：111575－200301，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純；水為重蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；檢測波長：306nm；流動(dòng)相：乙腈－水（19∶81）；柱溫：30℃；流速：1ml／min；靈敏度為0.08 AUFS；理論板數(shù)按虎杖苷峰計(jì)算不低于3000。避光操作。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取經(jīng)五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h的虎杖苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成17.39μg／ml的溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 取本品20丸，研細(xì)，取細(xì)粉約1.5g，精密稱定，置50ml具塞棕色錐形瓶中，精密加入稀乙醇25m l，密塞，精密稱定，超聲處理（300W，40kHz）30min，放至室溫，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液 按照處方量稱取除虎杖外的所有組分制備虎杖陰性對照樣品，余同“2.2.2”操作，即得。

2.3 專屬性考察 分別取“2.2”項(xiàng)下的對照品、供試品、陰性對照溶液各20μl，在“2.1”項(xiàng)之色譜條件下進(jìn)樣，記錄色譜圖。從圖1可見，虎杖苷色譜峰峰形對稱，供試品色譜圖中虎杖苷峰能與其它成分很好地分離，陰性對照溶液在虎杖苷峰處基本無干擾。

2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取經(jīng)五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h虎杖苷對照品7.88mg置20m l棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取10m l置100ml棕色量瓶中加稀乙醇至刻度并搖勻，精密吸取1、3、5、7、9、11ml分別置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度并搖勻，精密吸取6種質(zhì)量濃度的對照品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以注入的虎杖苷對照品量為橫坐標(biāo) （μg，X）、峰面積為縱坐標(biāo) （Y），作圖得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y＝517999X－568.85，r＝0.9998（n＝6）。結(jié)果，虎杖苷對照品進(jìn)樣量在0.0394～0.4334μg／ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液及供試品溶液分別連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20μl，峰面積RSD分別為0.98%、1.79%。表明儀器的精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品（批號：121101）溶液20μl，分別在0、2、4、8、12、14h測定虎杖苷的峰面積。RSD值為1.91%，表明供試品溶液在14h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取前列回春丸（批號：121101）6份，按“2.2”制備溶液，精密吸取溶液20μl注入色譜儀，測定，含量平均值128.00μg／g，RSD值1.30%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 稱取前列回春丸（批號：121101）6份，每份20丸，研細(xì)，取細(xì)粉約0.75g，精密稱定，精密加入同一濃度的虎杖苷對照品溶液1ml，余按“2.2”制備成供試品溶液，測定并計(jì)算供試品中虎杖苷的回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.9 供試品含量測定 取3批供試品（批號：121101、121102、121103），分別按“2.2”制備供試品溶液，分別精密吸取各供試品溶液20μl，注入色譜儀，測定，結(jié)果虎杖苷含量分別為128.00、128.92、127.17μg／g。

3 討論

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［2－5］，供試液制備中所用的溶劑有甲醇與稀乙醇，雖然用甲醇時(shí)其他峰相對小及少些，但從環(huán)?？紤]，在分離度能達(dá)到要求的前提下選取稀乙醇為佳。檢測波長及流動(dòng)相的選擇參考文獻(xiàn) ［2，4］選定檢測波長：306nm，流動(dòng)相：乙腈－水。本制劑為復(fù)方制劑，化學(xué)成分較多，通過調(diào)整，采用乙腈－水（19∶81）為流動(dòng)相時(shí)，虎杖苷與其他成分能達(dá)到有效分離，分離度較好，色譜系統(tǒng)穩(wěn)定。方法學(xué)研究表明，用HPLC法測定前列回春濃縮丸中虎杖苷的含量，操作方便，專屬性強(qiáng)，可作為前列回春濃縮丸的質(zhì)量控制方法。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部.衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第17冊 ［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1998：175.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中國藥典 （一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：194－195.

［3］柯長青，蔣永海.高效液相色譜法測定金膽片中虎杖苷含量 ［J］.中國藥業(yè)，2006，15（13）：33－34.

［4］彭紹沖，李耿，蔡大可，等.高效液相色譜法測定痹痛消膏中虎杖苷的含量［J］.藥物分析雜志，2007，27（11）：1725－1727.

［5］楊海燕，張成.高效液相法測定朱砂七中虎杖苷含量 ［J］.中國藥業(yè)，2011，20（10）：29－30.

Determ ination of Polydatin in Qianlie Huichun Pills by HPLC

HU Lixia CHENG Lu ZHANG Geng ZHANG Hong
Wuhan Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine，Wuhan，430022，China

Objective To establish amethod of determination polydatin content in Qianlie Huichun Pills.M ethod Uses the high performance liquid chromatography to determine content of polydatin.Result The sample size of polydatin in the range of 0.039 4－0.4334μg／m l showed the good linear relation with the peak area.The average recovery was98.85%（RSD＝1.08%，n＝6）.Conclusiou Themethod is simple，accurate and reproducible.Can be used as the indicators to control the quality of Qianlie Huichun Pills.

Qianlie Huichun Pills；Polydatin；HPLC

R284.1

A

1007－8517（2015）12－0003－02

2015.04.19）

胡麗霞，女，碩士研究生，主要從事中藥新制劑研究。E-mail：huli－23＠163.com。

張紅，女，主任中藥師，主要從事中西藥新制劑的研究與開發(fā)工作。E-mail：wyzh688＠126.com