時(shí)正媛，曾蔚欣，楊 麗，貝 雷，孫路路*

HPLC梯度洗脫法同時(shí)測(cè)定地麻滴鼻液中2種組分的含量

時(shí)正媛1，曾蔚欣1，楊 麗2，貝 雷2，孫路路1*

目的 建立測(cè)定地麻滴鼻液中地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的高效液相色譜法。方法 色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為磷酸二氫鉀緩沖液-甲醇-乙腈，梯度洗脫，流速1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)242 nm。結(jié)果 地塞米松磷酸鈉在5.2～52.0 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.999 9)，鹽酸麻黃堿在0.501～5.01 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.999 5)。地塞米松磷酸鈉平均回收率為99.13%，RSD為1.46%；鹽酸麻黃堿平均回收率為99.19%，RSD為1.04%。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確并且重現(xiàn)性好，可用于地麻滴鼻液中地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的質(zhì)量控制。

地麻滴鼻液；地塞米松磷酸鈉；鹽酸麻黃堿；高效液相色譜法

0 引言

地麻滴鼻液的主要成分為地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿，為北京同仁醫(yī)院自行研制的復(fù)方制劑，用于過(guò)敏性鼻炎、鼻竇炎。地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定方法分別有酸堿滴定法、紫外分光光度法和高效液相色譜法[1-8]。本試驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定地麻滴鼻液中2種成分含量的HPLC方法。該方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，為有效控制地麻滴鼻液的質(zhì)量、更好地保證其臨床療效提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1260液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)；AG285型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限責(zé)任公司)；Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；甲醇與乙腈均為色譜純，磷酸二氫鉀、三乙胺均為分析純，水為超純水。地塞米松磷酸鈉對(duì)照品(批號(hào)：100016-201216)、鹽酸麻黃堿對(duì)照品(批號(hào)：171241-201007)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定研究院；地麻滴鼻液[批號(hào)：20140328、20140426、20140504，規(guī)格：本品含鹽酸麻黃堿1%、地塞米松磷酸鈉0.01%(g/mL)]為本院制劑室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相：A相為磷酸鹽緩沖溶液(取磷酸二氫鉀6.8 g，用純化水溶解并稀釋至1 000 mL，再加三乙胺5 mL，混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)，B相為甲醇，C相為乙腈，梯度洗脫(梯度洗脫程序見(jiàn)表1)；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：242 nm。在該色譜條件下，在鹽酸麻黃堿和地塞米松磷酸鈉保留時(shí)間處，樣品中的輔料與溶劑無(wú)干擾，色譜圖見(jiàn)圖1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用水溶解并稀釋?zhuān)渲瞥擅? mL約含地塞米松磷酸鈉50 μg、鹽酸麻黃堿5 mg的混合溶液作為儲(chǔ)備液；精密量取適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含地塞米松磷酸鈉20 μg、鹽酸麻黃堿2 mg的混合溶液，采用0.25 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液備用。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取地麻滴鼻液2 mL，置于10 mL量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，采用0.25 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液備用。

圖1 地麻滴鼻液高效液相色譜圖

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液 按地麻滴鼻液處方比例制備缺少鹽酸麻黃堿和地塞米松磷酸鈉的陰性樣品，并按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密量取儲(chǔ)備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，配成系列濃度的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度C為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。地塞米松磷酸鈉在5.2～52.0 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為：A=0.396 C+10.55(r=0.999 9，n=6)；鹽酸麻黃堿在0.501～5.01 mg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，回歸方程為：A=36.20 C-6.33(r=0.999 5，n=6)。

2.4 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的峰面積平均值分別為707.9和805.8，RSD分別為0.82%和0.53%，表明儀器精密度良好。

2.5 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液1份，于室溫下放置，分別放置0、2、4、6、8 h后，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算含量結(jié)果，地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的RSD分別為0.96%和0.27%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)測(cè)定，其含量保持穩(wěn)定。

2.6 回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的地麻滴鼻液(批號(hào)：20140504)9份，精密量取，每份1 mL，分別置10 mL量瓶中，分別精密添加鹽酸麻黃堿原料4.0、5.0、6.0 mg，地塞米松磷酸鈉原料0.04、0.05、0.06 mg，各3份，混合均勻后加入流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，按照“2.1”項(xiàng)下液相方法進(jìn)行測(cè)定，外標(biāo)法計(jì)算其含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按照“2.2.2”項(xiàng)下方法處理同一批號(hào)(20140426)樣品6份，依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果地塞米松磷酸鈉和鹽酸麻黃堿的含量分別為標(biāo)示量的99.7%和98.3%，RSD分別為1.2%和0.88%(n=6)。

2.8 樣品含量測(cè)定 取地麻滴鼻液，按“2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下測(cè)定，計(jì)算樣品含量，結(jié)果地麻滴鼻液中地塞米松磷酸鈉的含量分別為標(biāo)示量的98.6%、99.7%和100.7%，RSD分別為1.3%、0.67%和0.94%(n=3)；地麻滴鼻液中鹽酸麻黃堿的含量分別為標(biāo)示量的101.2%、99.6%和100.6%，RSD分別為0.89%、1.5%和0.86%(n=3)。根據(jù)本品的質(zhì)量研究結(jié)果，參照中國(guó)藥典2010版，將鹽酸麻黃堿和地塞米松磷酸鈉的含量限度定為標(biāo)示量的90.0%～110.0%。

表2 鹽酸麻黃堿回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

表3 地塞米松磷酸鈉回收率測(cè)定結(jié)果(n=9)

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 經(jīng)二極管陣列檢測(cè)器考察，鹽酸麻黃堿和地塞米松磷酸鈉的最大吸收波長(zhǎng)分別為210 nm和242 nm，由于處方中鹽酸麻黃堿的量約為地塞米松磷酸鈉的100倍，為使兩種成分色譜峰相當(dāng)，本試驗(yàn)選用含量較少的地塞米松磷酸鈉的最大吸收波長(zhǎng)242 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，以?xún)?yōu)化兩種成分的響應(yīng)值，可很好地實(shí)現(xiàn)兩種成分的同時(shí)測(cè)定。

3.2 流動(dòng)相的選擇 參照《中國(guó)藥典》2010年版二部中“地塞米松磷酸鈉”和“鹽酸麻黃堿”的含量測(cè)定條件[1]及文獻(xiàn)[4-8]，采用磷酸鹽緩沖溶液-甲醇-乙腈系統(tǒng)。用三乙胺調(diào)節(jié)緩沖液的pH值，不同pH值對(duì)鹽酸麻黃堿的峰型有較大影響，采用pH值為3.0的緩沖液時(shí)，鹽酸麻黃堿的峰型好，具有較高的理論塔板數(shù)。選用不同比例的流動(dòng)相進(jìn)行洗脫，結(jié)果地塞米松磷酸鈉保留時(shí)間較長(zhǎng)，與鹽酸麻黃堿的色譜行為相差較大，短時(shí)間內(nèi)無(wú)法完成兩種成分的測(cè)定。本研究采用梯度洗脫后，兩種成分色譜峰峰型較好，保留時(shí)間合適，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:250-251,777-778.

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Simultaneous determination of two components in dexamethasone-ephedrine nasal drops by HPLC gradient elution

SHI Zheng-yuan1，ZENG Wei-xin1，YANG Li2，BEI Lei2，SUN Lu-lu1*

(1.Department of Pharmacy，Beijing Shijitan Hospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100038，China；2.Beijing Food and Drug Administration，Beijing 100038，China)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of dexamethasone sodium phosphate and ephedrine hydrochloride in dexamethasone-ephedrine nasal drops.Methods The Agilent ZORBAX SB-C18column(150 mm×4.6 mm，5 μm)was used.The mobile phase was composed of gradient potassium dihydrogen phosphate solution-methanol-acetonitrile at the flow rate of 1.0 mL/min.The UV detection wavelength was 242 nm.Results The linear ranges for dexamethasone sodium phosphate and ephedrine hydrochloride were respectively 5.2～52.0 μg/mL(r=0.999 9) and 0.501～5.01 mg/mL(r=0.999 5).The mean recoveries of them were respectively 99.13%and 99.19%with theRSDat 1.46%and 1.04%.Conclusion This method is simple,accurate and reliable,and can be used for the quality control of dexamethasone-ephedrine nasal drops.

Dexamethasone-ephedrine nasal drops;Dexamethasone sodium phosphate;Ephedrine hydrochloride;HPLC

2014-08-12

1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院藥劑科，北京 100038；2.北京市食品藥品監(jiān)督管理局，北京 100038

首都衛(wèi)生發(fā)展科研專(zhuān)項(xiàng)-重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(首發(fā)2011-2008-01)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503018

*通信作者