孔連委等

摘要：目的 探討雙黃消痤丸治療痤瘡的作用機(jī)制。方法 取雄性日本大耳白兔48只，采用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為空白組、模型組、陽性藥組和雙黃消痤丸高、中、低劑量組。除空白組外，建立兔耳痤瘡模型，成模后各組給予相應(yīng)藥物灌胃，每日1次，連續(xù)14 d。給藥結(jié)束后采血，采用放射免疫法測(cè)定血清中白細(xì)胞介素-8 （IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量。結(jié)果 與空白組比較，模型組IL-8、TNF-α含量明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，除雙黃消痤丸低劑量組外，各給藥組IL-8、TNF-α含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)論 雙黃消痤丸通過降低兔血清IL-8、TNF-α含量起到治療痤瘡的作用。

關(guān)鍵詞：雙黃消痤丸；痤瘡；白細(xì)胞介素-8；腫瘤壞死因子-α；兔

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2015）06-0072-03

痤瘡是一種最為常見的皮膚病，多發(fā)于面部、背部、胸等富含皮脂腺的部位。痤瘡的形成與雄激素水平過高、痤瘡丙酸桿菌、皮脂腺導(dǎo)管異常角化、免疫因素、環(huán)境與遺傳等因素有關(guān)[1-6]。雙黃消痤丸為黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院自主研發(fā)的中成藥，臨床用于治療痤瘡效果顯著[7]。本研究通過觀察雙黃消痤丸對(duì)兔血清白細(xì)胞介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量的影響，探討其對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

12周齡健康雄性日本大耳白兔48只，體質(zhì)量（1.5±0.2）kg，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，哈爾濱市松北區(qū)華宇養(yǎng)殖場(chǎng)提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK-（黑）2008001。

1.2 藥物

雙黃消痤丸，黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院制劑室提供，批號(hào)131101；丹參酮膠囊，河北興隆希力藥業(yè)有限公司，批號(hào)20130822。

1.3 主要試劑與儀器

煤焦油（營(yíng)口華源石化有限公司），IL-8、TNF-α試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所），痤瘡丙酸桿菌（黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院）。AP280-123型包埋機(jī)（德國(guó)MICROM公司），HM335E型切片機(jī)（德國(guó)MICROM公司），MDF-382E型超低溫冰箱（日本三洋公司），恒溫高速離心機(jī)（德國(guó)BACKMAN公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性藥組及雙黃消痤丸高、中、低劑量組，每組8只。

2.2 造模

按文獻(xiàn)[8]方法建立并判定兔耳痤瘡模型。除空白組外，在每只家兔左右耳內(nèi)側(cè)耳管開口處2 cm×2 cm范圍，每日用玻璃棒均勻涂抹濃度為50%煤焦油（煤焦油和液體石蠟體積按1∶1混合），每次0.5 mL連續(xù)2周。自建模第7日開始后，于涂煤焦油處皮內(nèi)注射痤瘡丙酸桿菌液（痤瘡丙酸桿菌菌株1株，在腦心浸液培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)種活化并增殖，搜集菌落后洗滌并過濾，調(diào)整痤瘡丙酸桿菌濃度為6×107/mL，于95 ℃水浴滅活5 min）50 ?L/耳。

建模第14日，在空白組與造模動(dòng)物中隨機(jī)選取10只動(dòng)物，在其左耳相同位置處用記號(hào)筆做標(biāo)記，在該處以1 cm的打孔器進(jìn)行兔耳皮膚病理活檢，顯微鏡下觀察標(biāo)本的病理結(jié)構(gòu)，驗(yàn)證痤瘡模型復(fù)制情況。光鏡下可見：角化過度，表皮和毛囊上皮的顆粒層增厚，棘層肥厚，相鄰擴(kuò)張的毛囊互相融合，毛囊口及漏斗部都充滿角化物質(zhì)，并向皮脂腺延伸，毛囊口角栓堵塞，毛囊漏斗部充滿角化物質(zhì)并擴(kuò)大成壺狀；真皮上層毛細(xì)血管擴(kuò)張明顯，毛囊周圍彌漫散在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，以小圓形細(xì)胞為主，還有少量中性粒細(xì)胞。

2.3 給藥

造模成功后開始給藥，雙黃消痤丸高、中、低劑量組給予雙黃消痤丸1.68、0.84、0.42 g/kg，陽性藥組給予丹參酮膠囊0.187 g/kg，給藥體積10 mL/kg，空白組和模型組給予等體積生理鹽水，每日1次，連續(xù)14 d。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)

分別于動(dòng)物末次給藥20 h后，一次性5 mL注射器進(jìn)行兔的立位心臟采血，采用放射免疫法測(cè)定血清中IL-8、TNF-α含量，按試劑盒說明書操作。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用—x±s表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 雙黃消痤丸對(duì)模型兔血清白細(xì)胞介素-8含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清IL-8含量明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，雙黃消痤丸高、中劑量組及陽性藥組大鼠血清IL-8含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)果見表1。

4.2 雙黃消痤丸對(duì)模型兔血清腫瘤壞死因子-α含量的影響

與空白組比較，模型組大鼠血清TNF-α含量明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，雙黃消痤丸高、中劑量組及陽性藥組大鼠血清TNF-α含量明顯降低（P<0.01）。結(jié)果見表2。

5 討論

痤瘡是毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚疾病。研究表明，機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫均參與痤瘡的發(fā)病過程[9]。人類Th細(xì)胞存在Th1和Th2兩個(gè)不同功能的亞群，Th1細(xì)胞主要分泌IL-2和TNF-α等特征性細(xì)胞因子，介導(dǎo)細(xì)胞免疫；Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-8及IL-10等細(xì)胞因子，介導(dǎo)體液免疫。尤其Th2細(xì)胞分泌的IL-8在免疫和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，參與了痤瘡的病理生理過程。研究發(fā)現(xiàn)，痤瘡患者血清中的IL-8、IL-6及TNF-α水平高于正常對(duì)照，提示這3種炎癥遞質(zhì)參與了痤瘡的發(fā)病過程[10]。

雙黃消痤丸由金銀花、野菊花、黃連、黃柏、黃芩、梔子、赤芍、牡丹皮、玄參、甘草等組成。方中金銀花能清熱解毒、消癰散結(jié)，為外科之瘡瘍圣藥，為君藥；野菊花、紫花地丁皆能清熱解毒，黃芩、黃柏、黃連、梔子四藥合用取自《外臺(tái)秘要》“黃連解毒湯”熱毒壅盛直折之意，可清上、中、下三焦之火毒熱盛，共為臣藥；赤芍可清熱涼血、散瘀止痛，牡丹皮可涼血活血，玄參養(yǎng)陰涼血兼可解毒散結(jié)，諸藥配伍可有清熱涼血、消瘀散結(jié)之功，共為佐藥；一味甘草調(diào)和諸藥、護(hù)胃和中，為使藥。諸藥合用，共奏清熱解毒、消瘀散結(jié)之功。

研究顯示，雙黃消痤丸方中黃連、黃柏、黃柏、梔子（黃連解毒湯）對(duì)大鼠TNF-α、TNF-γ、IL-2具有顯著的抑制作用[11]。野菊花提取液（7 mL/只）給發(fā)生變態(tài)反應(yīng)的家兔連續(xù)灌胃25 d，可抑制兔血清中可溶性IL-2、IL-6、TNF-α的升高，但不能下降至造模前水平[12]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，雙黃消痤丸可明顯降低兔耳痤瘡模型血清中IL-8、TNF-α含量，同時(shí)參與體液免疫與細(xì)胞免疫，且效果明顯。表明雙黃消痤丸對(duì)于痤瘡的治療作用與免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)有密切關(guān)系。

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（收稿日期：2014-09-18；編輯：華強(qiáng)）