葉遠(yuǎn)飛

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·論著·

肺結(jié)核患者血清中白細(xì)胞介素-2含量檢測及其與呼吸功能的相關(guān)性分析

葉遠(yuǎn)飛

目的 研究肺結(jié)核患者血清中白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)含量及其與呼吸功能的相關(guān)性。方法 將2011年8月至2013年8月期間我院收治的90例肺結(jié)核患者納入研究的觀察組，將同期在我院體檢的90名健康者納入研究的對照組，采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA )檢測血清中IL-2的含量，同時(shí)評價(jià)呼吸功能指標(biāo)最大呼氣流速、呼氣一秒率、呼吸困難評分、6 min步行距離、步行后心率及呼吸頻率。采用SPSS 18.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果 (1)觀察組患者高于對照組血清中IL-2含量分別為(185.8±29.5) pg/ml和(45.3±6.3)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.392、P<0.05)。觀察組最大呼氣流速(54.81±7.34 )ml/s、呼氣一秒率(51.36±5.58)%、呼吸困難評分(3.23±0.41)分、6 min步行距離(318.46±35.23) m均低于對照組(74.23±9.26 )ml/s、(57.85±6.32)%、(4.68±0.53)分、( 424.27±49.35)m，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為5.283、4.894、5.896、6.905，P值均<0.05)；觀察組步行后心率(103.31±13.95)次/min 及步行后呼吸頻率分別為(32.66±4.21) 次/min，均高于對照組( 89.48±9.59)次/min、(23.45±2.94)次/min；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為4.985、6.475、P值均<0.05)(2)IL-2含量與最大呼氣流速、呼氣一秒率、呼吸困難評分、6 min步行距離呈負(fù)相關(guān)，與步行后心率及呼吸頻率呈正相關(guān)，回歸系數(shù)分別為-1.768、-1.650、-2.112、-1.932、2.342、1.904，P值均<0.05。結(jié)論 肺結(jié)核患者血清中IL-2含量顯著升高，且與呼吸功能密切相關(guān)，可作為判斷患者呼吸功能的客觀指標(biāo)。

結(jié)核, 肺/血液； 白細(xì)胞介素2； 呼吸功能試驗(yàn)

肺結(jié)核是我國常見的呼吸道傳染病，通過化療藥物的應(yīng)用能夠取得確切的療效。在臨床實(shí)踐中，通過輔助檢查判斷結(jié)核病患者的呼吸功能有助于制定化療方案、保證治療效果。常規(guī)的呼吸功能檢查方法多容易受到患者主觀意識的影響，且檢查過程較為復(fù)雜，會在一定程度上影響病情的判斷。因此，探尋更為準(zhǔn)確、客觀的輔助檢查方法和指標(biāo)具有積極的應(yīng)用前景。在肺結(jié)核的發(fā)生過程中，T細(xì)胞亞群Th1和Th2比例失衡發(fā)揮了重要作用，由Th1亞群分泌的白細(xì)胞介素-2(Interleukin，IL-2)是在肺結(jié)核發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用的一類炎癥因子，參與肺部感染的控制及結(jié)核分枝桿菌的殺滅過程。在下列研究中，為了探尋能夠客觀反映肺結(jié)核病情的血清學(xué)指標(biāo)，筆者分析了肺結(jié)核患者血清IL-2含量及其與呼吸功能的相關(guān)性，現(xiàn)匯報(bào)如下。

資料和方法

一、研究對象來源

將2011年8月至2013年8月期間我院病房收治的肺結(jié)核患者納入研究的觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)參照文獻(xiàn)[1]中肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷；(2)具有咳嗽、咯痰、發(fā)熱的臨床癥狀；(3)痰標(biāo)本抗酸染色陽性、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性；(4)結(jié)合胸部X線檢查確診為肺結(jié)核；(5)首次診斷為肺結(jié)核；(6)取得患者知情同意。共納入115例患者，排除未能取得知情同意、失訪的患者25例，最終入組90例患者，其中男55例、女35例，年齡范圍43～64歲、平均(55.8±6.2)歲。參照觀察組患者的年齡和性別，按照1:1的比例，選擇同期在我院體檢的健康者納入研究的對照組，年齡和性別與觀察組相應(yīng)編號的病例相同。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)接受健康體檢；(2)身體健康，肝腎功能各項(xiàng)檢測指標(biāo)均正常；(3)無慢性阻塞性肺疾病、慢性支氣管炎等慢性疾病；(4)取得知情同意，共90名。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。兩組受試者基線資料的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具體資料見表1。

二、 試劑與儀器

IL-2 ELISA檢測試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；DG5033A型酶聯(lián)免疫檢測儀(南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司)；洗板機(jī)(北京昕宇飛通信設(shè)備有限公司)；MS-IOS型肺功能檢測儀(德國Jaeger公司)。

三、兩組受試者的一般資料

兩組受試者性別、年齡、心功能、腎功能指標(biāo)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具體情況見表1。

四、 檢測值和方法

(一)受試者血清IL-2含量的檢測

1.標(biāo)本的采集：觀察組患者于肺結(jié)核確診當(dāng)天采集外周血5 ml，對照組健康者于體檢當(dāng)天采集外周血5 ml，EDTA抗凝后靜置15 min后3000×g離心 10 min，收集上清檢測IL-2含量。

2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-2含量：檢測步驟：(1)配置濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品(稀釋血清的濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品IL-2溶液，用buffer溶液作為稀釋液，pH值為7，濃度梯度的起止為10～100 μg/ml)，作為待測樣本；(2)加樣：反應(yīng)板上每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 μl，待測樣本做復(fù)孔，將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃120 min；(3)洗板：用磷酸鹽緩沖液洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4～6次，向?yàn)V紙上印干；(4)每孔中加入第一抗體工作液100 μl。將反應(yīng)板充分混勻后置37 ℃ 60 min，洗板4～6次；(5)每孔加酶標(biāo)抗體工作液100 μl，將反應(yīng)板置37 ℃30 min，洗板4～6次；(6)每孔加入底物工作液100 μl，置37 ℃暗處反應(yīng)15 min。每孔加入100 μl終止液混勻；(7)30 min內(nèi)用酶標(biāo)儀在450 nm處測吸光度A值；(8)每次測定均按照試劑盒說明書分別設(shè)置陰性，陽性及空白對照，每個(gè)標(biāo)本設(shè)復(fù)孔，取其均值做為測定值。繪制以吸光值為橫坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)品蛋白濃度為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，代入待測樣本的吸光度A值求出濃度。

表1 兩組受試者一般資料的比較

注 LVEDD(left ventricular end-diastolic diameter)：左室舒張末期直徑；LVEF(Left ventricular ejection fractions)：左室射血分?jǐn)?shù)；Ccr(Endogenous creatinine clearance rate)：內(nèi)生肌酐清除率

(二)受試者呼吸功能的檢測

觀察組患者于肺結(jié)核確診當(dāng)天測定呼吸功能，對照組健康體檢者于體檢時(shí)測定呼吸功能。測定時(shí)采用德國Jaeger公司生產(chǎn)的肺功能檢測儀，測定指標(biāo)包括最大呼氣流速(peak expiratory flow,PEF)、一秒用力呼氣容積(forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1)、用力肺活量(forced vital capacity，F(xiàn)VC)，并計(jì)算呼氣一秒率(FEV1/FVC)；采用改良MRC(medical research council)呼吸困難評分(modified british medical research council，MMRC)評價(jià)患者的呼吸困難情況，測定6 min步行距離(6 MWD)以及步行后心率、呼吸頻率來反應(yīng)呼吸功能。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)和分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)分析，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)Pearson分析；采用單因素回歸分析相關(guān)性；檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)：以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、兩組血清中IL-2含量

觀察組患者血清中IL-2含量(185.8±29.5) pg/ml，高于對照組健康者的(45.3±6.3)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.392，P<0.05)。

二、 兩組呼吸功能

觀察組患者的PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD低于對照組，步行后心率及步行后呼吸頻率高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05)，具體情況見表2。

三、血清中IL-2含量與呼吸功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

血清中IL-2含量與PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD呈負(fù)相關(guān)，與步行后心率及呼吸頻率呈正相關(guān)(P<0.05)，具體情況見表3。根據(jù)每一個(gè)病例的IL-2含量、PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD做散點(diǎn)圖，而后進(jìn)行一元線性回歸分析得出相關(guān)性的結(jié)論。

討 論

近幾年來，肺結(jié)核發(fā)病率的升高引起全世界的廣泛關(guān)注。全球目前結(jié)核病患者共2000萬例，中國結(jié)核病患者600萬例，每年死于結(jié)核病者20余萬例[1]。化學(xué)療法的出現(xiàn)在結(jié)核病的控制和治療上發(fā)揮了巨大的作用[2]。在臨床實(shí)踐中，準(zhǔn)確判斷患者的呼吸功能有助于判斷肺結(jié)核患者的整體病情，并根據(jù)患者的個(gè)體情況調(diào)整化療方案[3]。常規(guī)的呼吸功能檢測指標(biāo)包括PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD[4]。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，觀察組患者的PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD均低于對照組。這就說明肺結(jié)核患者的確存在不同程度的呼吸功能損傷。但是，以上呼吸功能指標(biāo)的檢測過程較為繁瑣、部分患者無法配合完成，且在一定程度上受到患者主觀能動性的影響，不利于對病情客觀準(zhǔn)確的判斷[5]。

表2 兩組受試者的呼吸功能比較

注 PEF：最大呼氣流速；FEV1：一秒用力呼氣容積；FVC：用力肺活量；FEV1/FVC：呼氣一秒率；MMRC改良MRC(medical research council)呼吸困難評分；6 MWD： 6 min步行距離

表3 血清IL-2含量與呼吸功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

注 PEF：最大呼氣流速；FEV1：一秒用力呼氣容積；FVC：用力肺活量；FEV1/FVC：呼氣一秒率；MMRC改良MRC(medical research council)呼吸困難評分；6 MWD： 6 min步行距離

近年來，臨床學(xué)者也致力于探尋更為準(zhǔn)確、客觀的輔助檢查指標(biāo)來判斷患者的呼吸功能，并期望能夠?yàn)榕R床診療方案的制定提供客觀依據(jù)[6]。已有研究發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核的發(fā)生既屬于炎癥性疾病，也包含了復(fù)雜的免疫機(jī)制[7]?；颊唧w內(nèi)存在細(xì)胞免疫功能失衡、Th1/Th2細(xì)胞比例失調(diào)，白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子大量分泌[8]。Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在結(jié)核病的發(fā)病過程中發(fā)揮對機(jī)體的免疫性保護(hù)，通過分泌IFN-γ、IL-2來控制肺部感染、殺滅結(jié)核分枝桿菌[9]。在結(jié)核病發(fā)病初期，通過Th1型免疫反應(yīng)的激活來發(fā)揮殺滅病原菌、控制感染的作用[10]。本研究通過分析IL-2的含量可知，觀察組患者血清中IL-2含量較對照組顯著升高。這就提示IL-2可能參與了肺結(jié)核的發(fā)病過程。

目前的研究認(rèn)為，IL-2是參與全身炎癥反應(yīng)極為重要的一類細(xì)胞因子，也能夠參與T淋巴細(xì)胞的激活、其他炎癥因子的募集等[11]，也可以刺激T淋巴細(xì)胞的增殖、激活自然殺傷(NK)細(xì)胞的活性、誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，進(jìn)而參與結(jié)核病的免疫反應(yīng)[12]。在結(jié)核病初治患者中，IL-2的合成和分泌發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，也有研究報(bào)道IL-2水平檢測可以作為判斷肺結(jié)核患者整體病情的客觀指標(biāo)[13]。在臨床實(shí)踐中，理想的客觀檢查指標(biāo)應(yīng)當(dāng)具有檢測便捷、一致性良好且能夠準(zhǔn)確反映呼吸功能的特點(diǎn)。在本研究中，為了進(jìn)一步明確IL-2作為客觀檢查指標(biāo)的價(jià)值，筆者分析了IL-2含量與呼吸功能的相關(guān)性，由結(jié)果可知，血清IL-2含量與PEF、FEV1/FVC、MMRC評分、6 MWD呈負(fù)相關(guān)，與步行后心率及呼吸頻率呈正相關(guān)。說明IL-2含量可準(zhǔn)確反應(yīng)肺結(jié)核患者的呼吸功能，可以作為一種可供選擇的可靠的客觀檢查指標(biāo)。

綜上所述，肺結(jié)核患者血清IL-2含量顯著升高，且與呼吸功能密切相關(guān)，可作為判斷患者呼吸功能的客觀指標(biāo)。但是，單一通過IL-2含量對病情進(jìn)行評估仍具有一定的局限性，應(yīng)當(dāng)在下一步的研究中選擇更多的血清學(xué)指標(biāo)來對病情進(jìn)行全面的判斷。

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(本文編輯：王然 薛愛華)

Level of serum IL-2 in patients with pulmonary tuberculosis and its correlation with respiratory function

YE Yuan-fei.

Department of Tuberculosis, the Fifth People’s Hospital of Ganzhou,Jiangxi Ganzhou 341000,China

YE Yuan-fei, Email: 21235586@qq.com

Objective To investigate the level of serum IL-2 in patients with pulmonary tuberculosis and its correlation with respiratory function. Methods Ninety cases of pulmonary tuberculosis patients and 90 cases of healthy subjects received physical examination in our hospital from August of 2011-August of 2013 were enrolled Then serum interleukin-2 content were detected by Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,meanwhile, respiratory function were evaluated including peak expiratory flow, one second rate, MMRC score, 6 minutes walking distance, heart rate and respiration rate after walking. The statistic analyses were performed using SPSS 18.0, measurement data usingttest analysis,P<0.05 was considered to be significantly different. Results (1) serum IL-2 content of observation group (185.8±29.5) pg/ml were higher than that of control group (45.3±6.3) pg/ml; peak expiratory flow (54.81±7.34 vs 74.23±9.26) ml one second rate (51.36±5.58 vs 57.85±6.32)%, MMRC score (3.23±0.41 vs 4.68±0.53), 6 minutes walking distance (318.46±35.23 vs 424.27±49.35) m of observation group were lower than those of control group, heart rate (103.31±13.95 vs 89.48±9.59) per min and respiration rate after walking (32.66±4.21 vs 23.45±2.94) per min in observation group were higher than those in control group; (2) the content of serum IL-2 were negatively correlated with peak expiratory flow, one second rate, MMRC score, 6 minutes walking distance, positively correlated with heart rate and respiration rate after walking, regression coefficient were -1.768, -1.650, -2.112, -1.932, 2.342, 1.904,P<0.05. Conclusion Serum interleukin-2 content is significantly increased in patients with pulmonary tuberculosis and closely correlated with respiratory function; serum IL-2 level can be used to evaluate a patient’s respiratory function.

Tuberculosis, pulmonary/Blood； Interleukin-2； Respiratory function tests

10.3969/j.issn.1000-6621.2015.12.010

341000 江西， 贛州市第五人民醫(yī)院結(jié)核科

葉遠(yuǎn)飛，Email: 21235586@qq.com

2015-09-23)