張熒 朱慧 梁倩 趙立平 黃海榮 黃娟 孫照剛

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·論著·

色氨酸-犬尿氨酸代謝中間產(chǎn)物對結(jié)核病患者T細(xì)胞免疫的影響

張熒 朱慧 梁倩 趙立平 黃海榮 黃娟 孫照剛

結(jié)核/免疫學(xué)； T淋巴細(xì)胞亞群； 色氨酸； 犬尿氨酸

色氨酸(TRP)是人體必需氨基酸。TRP-犬尿氨酸(KYN)代謝途徑會因?yàn)槟承┘膊〉陌l(fā)生而改變，從而影響機(jī)體免疫作用的發(fā)揮。機(jī)體免疫狀態(tài)是決定結(jié)核病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的決定性因素，而TRP代謝中間產(chǎn)物，如KYN、喹啉酸(QA)、吡啶酸(PA)、鄰氨基苯甲酸(AA)等，對機(jī)體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生全面而又深遠(yuǎn)的影響，如細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡和炎性反應(yīng)等[1-2]。因此，研究TRP-KYN代謝途徑有助于闡明結(jié)核分枝桿菌感染與發(fā)病的生物學(xué)機(jī)制。本研究在明確結(jié)核病患者體內(nèi)TRP-KYN代謝中間產(chǎn)物含量的基礎(chǔ)上[3],進(jìn)一步通過體外試驗(yàn)分析代謝中間產(chǎn)物對免疫細(xì)胞凋亡和分化的影響。

材料和方法

一、研究對象

試驗(yàn)組來源于我院2012年9—12月期間經(jīng)細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)和影像學(xué)檢查明確診斷為肺結(jié)核且無腫瘤、艾滋病、糖尿病等合并疾病的結(jié)核病患者，共104例；其中男76例，女28例；經(jīng)數(shù)字表法隨機(jī)抽樣選取45例作為試驗(yàn)組，年齡20～65歲，平均(47.32±14.13)歲。所有患者HIV檢測均為陰性，均無免疫抑制劑和免疫增強(qiáng)劑使用史。健康對照組為同期北京市昌平區(qū)結(jié)核病防治所的健康體檢志愿者，經(jīng)細(xì)菌學(xué)、病理學(xué)和影像學(xué)檢查明確無結(jié)核病，且無結(jié)核病病史，無慢性病病史，無呼吸疾病，共100名；其中男63名，女37名；經(jīng)數(shù)字表法隨機(jī)選取其中39例作為健康對照組，年齡16～60歲，平均(39±18.62)歲。本研究經(jīng)首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院倫理委員會審核并通過[批件號：(2012)年KY臨審第(11)號]，征得受試對象同意，簽署了知情同意書。

二、試驗(yàn)儀器和試劑

血細(xì)胞的流式細(xì)胞分析主要采用美國BD公司FACSCalibur型流式細(xì)胞儀。除細(xì)胞凋亡試劑盒購自美國BioVision公司外，其余所用熒光標(biāo)記抗體、含抗凝劑的采血管和淋巴細(xì)胞分離液均購自美國BD公司。

三、試驗(yàn)方法

1. 全血中人淋巴細(xì)胞的分離、抗體染色與流式分析：用抗凝采血管取5 ml全血后，采用人淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMCs)；調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106個/ml，用于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)和T輔助細(xì)胞17(Th17)及代謝中間產(chǎn)物的刺激試驗(yàn)。Th17和Treg細(xì)胞的染色參考文獻(xiàn)[4]的方法。BD公司FACSCalibur型流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，結(jié)果用WinMDI 2.9軟件分析。本試驗(yàn)以CD4+IL-17A+標(biāo)記Th17細(xì)胞，以CD4+CDhigh 25FoxP3+標(biāo)記Treg細(xì)胞，并設(shè)立空白對照(未染色)、FITC單色對照、PE單色對照、APC單色對照、Alexa Flour647單色對照、Alexa Flour647-IgG同型對照、PE-IgG同型對照，以便進(jìn)行熒光標(biāo)記效果的質(zhì)量控制。上述熒光標(biāo)記抗體均購自BD公司。

2. TRP及其代謝中間產(chǎn)物對CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞的體外刺激：住院次日凌晨空腹抽靜脈血5 ml，肝素抗凝，用標(biāo)準(zhǔn)的Ficoll-Hypaque密度梯度離心方法分離得到PBMCs，經(jīng)磷酸鹽緩沖液洗滌后，用含10%胎牛血清(FBS)的杜爾伯科極限必需培養(yǎng)基(DMEM)培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×106個/ml，并以每孔500 μl接種細(xì)胞于24孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h；試驗(yàn)組分別單獨(dú)加入TRP、KYN、QA 3種化合物，終濃度分別為0.2 mmol/L和2 mmol/L，每種化合物的每個濃度分別設(shè)立3個重復(fù)試驗(yàn)；空白對照加入同體積的DMEM培養(yǎng)基，共培養(yǎng)24 h。之后進(jìn)行細(xì)胞的染色和流式分析。本實(shí)驗(yàn)采用隨機(jī)數(shù)字表法選取其中的6例患者作為試驗(yàn)組進(jìn)行了PBMCs的分離和化合物體外刺激實(shí)驗(yàn)。其中5例患者獲得的5 ml全血分離的PBMCs數(shù)量達(dá)到107左右，而且流式細(xì)胞分析方法的染色效果符合流式標(biāo)準(zhǔn)，滿足本研究需要；另外1例因PBMCs總數(shù)不足而未滿足實(shí)驗(yàn)要求。試驗(yàn)組是化合物刺激組，空白組未加化合物刺激。

3. 細(xì)胞凋亡的檢測：采用Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit試劑盒(美國BioVision公司)進(jìn)行細(xì)胞凋亡的染色分析。按試劑盒說明書進(jìn)行檢測及結(jié)果判定。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、 外周血Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞與年齡、性別的相關(guān)性分析

健康對照組和試驗(yàn)組的組間性別構(gòu)成經(jīng)卡方檢驗(yàn)(χ2=0.163,P=0.330)，結(jié)果顯示差異無統(tǒng)計學(xué)意義；采用方差檢驗(yàn)分析兩組之間平均年齡(t=2.001，P=0.152)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。多因素相關(guān)性分析的結(jié)果顯示，本研究所測定Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞與性別、年齡兩因素并無相關(guān)性(表1)。因此，組間性別、年齡因素差異對試驗(yàn)結(jié)果不造成偏倚影響。

二、試驗(yàn)組和健康對照組外周血Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞水平的比較

試驗(yàn)組PBMCs中Treg細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比率為(1.49±0.82)%，健康對照組為(0.41±0.26)%，兩組間相比較，試驗(yàn)組外周血中Treg細(xì)胞含量顯著高于健康對照組(t=33.64，P=0.000)；試驗(yàn)組外周血PBMCs中Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比率為(1.04±0.72)%，而健康對照組的Th17細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比率為(0.73±0.43)%(圖1，2)，兩者之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=44.46，P=0.071)(表2)。

表1 入組人群年齡、性別與外周血中Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的相關(guān)性分析

表2 試驗(yàn)組外周血和健康對照組外周血Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞水平

Treg細(xì)胞具有免疫抑制的功能，而Th17細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-17是促進(jìn)炎癥反應(yīng)的細(xì)胞，研究兩者的比例在結(jié)核病免疫學(xué)中具有潛在意義。本研究中試驗(yàn)組外周血PBMCs中Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的比值為2.39±2.241，健康對照組的比值為0.77±0.767，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=34.25，P=0.001)。

三、TRP、KYN和QA對T細(xì)胞的影響

結(jié)核病患者體內(nèi)TRP、KYN和QA的含量顯著增加提示：TRP及其代謝中間產(chǎn)物可能會對免疫細(xì)胞的含量產(chǎn)生影響，從而影響機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)；為此筆者在體外條件下對CD4+T和CD8+T細(xì)胞用這3種化合物進(jìn)行了體外刺激試驗(yàn)?？瞻讓φ战M表示未加化合物刺激。

1. TRP、KYN和QA對CD4+T細(xì)胞凋亡的影響：流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，KYN刺激試驗(yàn)組外周血中經(jīng)植物血凝素(PHA)活化的CD4+T細(xì)胞，共培養(yǎng)24 h后細(xì)胞凋亡率增高，在0.2 mmol/L和2.0 mmol/L濃度的刺激下其凋亡率分別為(14.47±0.18)%和(30.07±7.37)%；而空白對照組為(8.40±3.28)%。體外2.0 mmol/L的KYN刺激結(jié)核病患者CD4+T細(xì)胞平均凋亡率[(30.07±7.37)%]顯著高于空白對照組[(8.40±3.28)%]的CD4+T細(xì)胞凋亡率，兩組之間CD4+T細(xì)胞凋亡率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.49，P=0.000)，甚至在0.2 mmol/L低濃度的KYN環(huán)境中CD4+T細(xì)胞凋亡率[(14.47±0.18)%]和空白對照組[(8.40±3.28)%]之間也顯示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.16，P=0.045)。0.2 mmol/L和2.0 mmol/L的QA刺激CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡率分別為(6.83±1.66)%和(6.85±0.43)%，兩種濃度的QA對CD4+T細(xì)胞的凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.13，P=0.112；t=8.21，P=0.107)。0.2 mmol/L和2.0 mmol/L的TRP刺激CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡率分別為(6.93±0.52)%和(6.66±0.96)%，兩種濃度的QA對CD4+T細(xì)胞的凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.32，P=0.102；t=6.42，P=0.189)(表3)。

注 KYN：犬尿氨酸；TRP：色氨酸； QA：喹啉酸。左側(cè)表示各代謝中間產(chǎn)物所用的濃度，低濃度為0.2 mmol/L，高濃度為2.0 mmol/L，0.0 mmol/L表示不加入任何代謝中間產(chǎn)物。KYN、TRP、QA在0.2 mmol/L與0.0 mmol/L濃度刺激下的凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，t值分別為5.16、6.32、4.13；P值分別為0.045、0.102、0.112；在2.0 mmol/L與0.0 mmol/L濃度刺激下的凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，t值分別為7.49、6.42、8.21；P值分別為0.000、0.189、0.107

2. TRP、KYN和QA對CD8+T細(xì)胞凋亡的影響：流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示，0.2 mmol/L和2.0 mmol/L的KYN刺激T細(xì)胞后引起CD8+T細(xì)胞亞群的細(xì)胞凋亡率分別為(19.41±2.94)%和(26.36±1.09)%，高于未添加任何化合物的空白對照組產(chǎn)生的凋亡率[(15.31±1.88)%](t=5.42，P=0.041；t=4.89，P=0.003)；低濃度(0.2 mmol/L)和高濃度(2.0 mmol/L)的QA誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡率分別是(14.94±3.24)%和(17.18±2.07)%，與未添加任何化合物的空白對照組[(15.31±1.88)%]比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.13，P=0.214；t=8.02，P=0.121)。低濃度(0.2 mmol/L)和高濃度(2.0 mmol/L)的TRP誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡率分別是(16.28±2.28)%和(16.48±4.75)%，與未添加任何化合物的空白對照組[(15.31±1.88)%]比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.33，P=0.411；t=7.41，P=0.238)(表4)。

表4 不同濃度KYN、TRP和QA化合物刺激結(jié)核病患者致CD8+ T細(xì)胞凋亡情況分析

注 KYN：犬尿氨酸；TRP：色氨酸； QA：喹啉酸。左側(cè)表示各代謝中間產(chǎn)物所用的濃度，低濃度為0.2 mmol/L，高濃度為2.0 mmol/L，0.0 mmol/L表示不加入任何代謝中間產(chǎn)物。KYN、TRP、QA在0.2 mmol/L與0.0 mmol/L濃度刺激下的凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，t值分別為5.42、5.33、8.13；P值分別為0.041、0.411、0.214；在2.0 mmol/L與0.0 mmol/L濃度刺激下的凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，t值分別為4.89、7.41、8.02；P值分別為0.003、0.238、0.121

討 論

一、TRP-KYN代謝中間產(chǎn)物參與結(jié)核病免疫

目前，對結(jié)核病患者代謝的研究主要集中在抗結(jié)核藥物的影響方面[5-6]。TRP-KYN代謝路徑中吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)是關(guān)鍵限速酶，KYN、QA等中間代謝產(chǎn)物具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用。表達(dá)IDO的細(xì)胞在體內(nèi)、外均能抑制T細(xì)胞的增殖[1-2,7]，主要的機(jī)制在于TRP的被降解，造成局部蛋白合成受阻；或者代謝產(chǎn)物抑制免疫細(xì)胞的增殖或促進(jìn)凋亡[8]。這其中Th17和Treg 細(xì)胞起了重要作用[9-10]。結(jié)核病患者體內(nèi)的TRP-KYN代謝途徑被活化提高，提示TRP代謝途徑會因?yàn)榻Y(jié)核分枝桿菌的感染而增強(qiáng)，其代謝中間產(chǎn)物含量變化的生物學(xué)意義需要進(jìn)一步認(rèn)識。

二、TRP-KYN代謝中間產(chǎn)物促進(jìn)了T細(xì)胞的分化

先前的研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，結(jié)核病患者體內(nèi)KYN和QA的含量會增加，而TRP的含量降低，而PA和AA的含量不變[3]。KYN不僅抑制T細(xì)胞分化和功能[11]，還能通過活性氧(ROS)作用誘導(dǎo)NK細(xì)胞的凋亡[12]。TRP的減少及KYN的增加促進(jìn)了結(jié)核病患者體內(nèi)Treg細(xì)胞比例的增加[13]。而Treg細(xì)胞的增加促進(jìn)了TRP的利用，從而使T細(xì)胞的增殖因TRP的缺乏受到抑制。T細(xì)胞增殖受抑制的原因也與Treg細(xì)胞表面的CD25分子與效應(yīng)T細(xì)胞的白細(xì)胞介素2競爭結(jié)合，使效應(yīng)T細(xì)胞因無法獲得生長信號而受抑制有關(guān)[1-2, 7-8]。高濃度的QA刺激能夠促進(jìn)產(chǎn)生促炎細(xì)胞分子和趨化因子，提高趨化因子受體表達(dá)水平[14]。由此推測結(jié)核分枝桿菌感染機(jī)體后，血清或血漿中的QA含量升高可能增強(qiáng)炎癥反應(yīng)、促進(jìn)免疫反應(yīng)，從而消除感染細(xì)菌，但是這一過程受Treg細(xì)胞的調(diào)節(jié)。筆者的研究結(jié)果證明，結(jié)核病患者體內(nèi)Treg細(xì)胞明顯增加(t=33.64，P=0.000)，Th17細(xì)胞雖有增加但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=44.46，P=0.071)。試驗(yàn)組PBMCs中Treg細(xì)胞和Th17細(xì)胞的比值與健康對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=34.25，P=0.001)，揭示結(jié)核病患者存在重要的免疫再平衡過程。為了避免免疫病理損傷，結(jié)核病患者發(fā)病時其免疫系統(tǒng)處于一定程度的抑制狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果中Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞比值的標(biāo)準(zhǔn)差與比值的均值接近，顯示了利用比值來反應(yīng)結(jié)核病患者的免疫學(xué)狀態(tài)的可行性存在較大的不確定性，Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞比值的臨床意義需要進(jìn)一步驗(yàn)證。

三、TRP-KYN代謝中間產(chǎn)物影響T細(xì)胞的凋亡

已有的研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者的CD4+T和CD8+T細(xì)胞較健康對照組明顯下降[15]，除了細(xì)胞增殖受到抑制的因素外，細(xì)胞凋亡的誘發(fā)和中樞免疫器官功能受損等成為解釋該現(xiàn)象的主要原因[15]。細(xì)胞凋亡機(jī)制是細(xì)胞產(chǎn)生分化的一種途徑方式。本研究發(fā)現(xiàn)：在結(jié)核病患者CD4+T細(xì)胞亞群中，Treg和Th17的比例上升[試驗(yàn)組和健康對照組分別為：(1.49±0.83)%和(0.42±0.27)%；(1.04±0.77)%和(0.73±0.43)%]。通過體外實(shí)驗(yàn)，本研究發(fā)現(xiàn)KYN對CD4+和CD8+T細(xì)胞都具有顯著的凋亡誘導(dǎo)作用[分別由(8.40±3.28)%上升至(30.07±7.37)%和由(15.31±1.88)%上升至(26.36±1.09)%]。Frumento等[16]認(rèn)為QA能選擇性地抑制CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞的增殖并且激活NK細(xì)胞，在TRP缺乏的情況下這種現(xiàn)象會更加顯著。本研究沒有觀察到QA刺激結(jié)核病患者外周血中CD4+或者CD8+T細(xì)胞而產(chǎn)生的凋亡現(xiàn)象(P值分別為0.107、0.121)，由此推測QA僅具有抑制CD4+和CD8+T細(xì)胞增殖的作用，但是并沒有激活其凋亡機(jī)制的作用。

總之，結(jié)核病患者體內(nèi)高水平的KYN、QA及低水平的TRP在結(jié)核病免疫中起了重要作用，這主要表現(xiàn)在Treg細(xì)胞的比例增加。KYN在誘導(dǎo)T細(xì)胞分化和產(chǎn)生Treg細(xì)胞中起了重要作用，該作用的發(fā)揮主要靠細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)。QA在結(jié)核病免疫中的作用可能與炎癥反應(yīng)和抑制增殖有關(guān)，而與細(xì)胞分化無關(guān)。

志謝 中國疾病預(yù)防控制中心結(jié)核病防治臨床中心姜曉穎博士在統(tǒng)計學(xué)方面給予了極大的幫助！

[1] Terness P, Bauer TM, R?se L, et al. Inhibition of allogeneic T cell proliferation by indoleamine 2,3-dioxygenase-expressing dendritic cells: mediation of suppression by tryptophan meta-bolites. J Exp Med, 2002, 196 (4): 447-457.

[2] Mellor AL, Munn D, Chandler P, et al. Tryptophan catabolism and T cell responses. Adv Exp Med Biol, 2003, 527: 27-35.

[3] 張熒，朱慧，任衛(wèi)聰，等. 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時定量檢測結(jié)核病患者中多種色氨酸代謝產(chǎn)物及其臨床意義. 中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2013，7(9):3866-3870.

[4] Lim HW, Lee J, Hillsamer P, et al. Human Th17 cells share major trafficking receptors with both polarized effector T cells and FoxP3+regulatory T cells. J Immunol, 2008, 180(1): 122-129.

[5] 肖和平，唐神結(jié). 二線抗結(jié)核藥物的臨床應(yīng)用. 中國防癆雜志，2009,31(10): 612-616.

[6] 閆世明，孫秀娟，鄒志艷，等. 吡嗪酰胺對老年肺結(jié)核病人血尿酸代謝的影響. 中國防癆雜志，1993，15(1):96-99.

[7] Takikawa O. Biochemical and medical aspects of the indolea-mine 2,3-dioxygenase-initiated L-tryptophan metabolism. Biochem Biophys Res Commun, 2005, 338(1): 12-19.

[8] Hwu P, Du MX, Lapointe R, et al. Indoleamine 2,3-dioxygenase production by human dendritic cells results in the inhibition of T cell proliferation. J Immunol, 2000, 164(7): 3596-3599.

[9] Sojka DK, Huang YH, Fowell DJ. Mechanisms of regulatory T-cell suppression—a diverse arsenal for a moving target. Immunology, 2008, 124(1): 13-22.

[10] McGovern JL, Nguyen DX, Notley CA, et al. Th17 cells are restrained by Treg cells via the inhibition of interleukin-6 in patients with rheumatoid arthritis responding to anti-tumor necrosis factor antibody therapy. Arthritis Rheum, 2012, 64(10): 3129-3138.

[11] Kwidzinski E, Bechmann I. IDO expression in the brain: a double-edged sword. J Mol Med (Berl), 2007, 85(12): 1351-1359.

[12] Song H, Park H, Kim YS, et al. L-kynurenine-induced apoptosis in human NK cells is mediated by reactive oxygen species. Int Immunopharmacol, 2011, 11(8): 932-938.

[13] Kaper T, Looger LL, Takanaga H, et al. Nanosensor detection of an immunoregulatory tryptophan influx/kynurenine efflux cycle. PLoS Biol, 2007, 5(10): e257.

[14] 石蓮，張麗華，孟萍，等.肺結(jié)核患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群測定的臨床研究. 中國防癆雜志，2009，31(11)：673-675.

[15] Rodrigues DS, Medeiros EA, Weckx LY, et al. Immunophenotypic characterization of peripheral T lymphocytes inMycobacteriumtuberculosisinfection and disease. Clin Exp Immunol, 2002, 128(1): 149-154.

[16] Frumento G, Rotondo R, Tonetti M, et al. Tryptophan-derived catabolites are responsible for inhibition of T and natural killer cell proliferation induced by indoleamine 2,3-dioxyge-nase. J Exp Med, 2002, 196(4): 459-468.

(本文編輯：郭萌)

Effect of the metabolites in the tryptophan-kynurinine pathway on T-cell immunity among patients with tuberculosis

ZHANGYing,ZHUHui,LIANGQian,ZHAOLi-ping,HUANGHai-rong,HUANGJuan,SUNZhao-gang.

NationalTuberculosisClinicalLaboratory,BeijingChestHospital,CapitalMedicalUniversity,BeijingkeyLaboratoryinDrugResistantTuberculosisResearch,BeijingTuberculosis&ThoracicTumorResearchInstitute,Beijing101149,China

SUNZhao-gang，Email:sunzg75@hotmail.com;HUANGJuan,Email：happyhj888@163.com

Tuberculosis/immunology； T-lymphocyte subsets； Tryptophan； Kynurenine

10.3969/j.issn.1000-6621.2015.04.001

“十二五”國家科技重大專項(xiàng)(2013ZX10003009)；北京市高層次衛(wèi)生技術(shù)人才培養(yǎng)項(xiàng)目(2011-3-069)；北京市醫(yī)院管理局臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展專項(xiàng)(ZYLX201304)

101149 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院 國家結(jié)核病臨床實(shí)驗(yàn)室 北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所 耐藥結(jié)核病研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[張熒(研究生)、梁倩、趙立平、黃海榮、孫照剛]，藥物研究室(朱慧)；青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 山東省預(yù)防獸醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[張熒、黃娟]

孫照剛，Email：sunzg75@hotmail.com；黃娟，Email：happyhj888@163.com

2014-11-03)