姜紅濤 富曉麗

撫順市疾病預(yù)防控制中心，遼寧 撫順 113006

腎綜合征出血熱 (hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS)是由漢坦病毒(hantavirus，HV)引起的自然疫源性傳染病，漢坦病毒(hantavirus，HV)屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬，是分節(jié)段的單股負(fù)鏈RNA病毒。主要由嚙齒動(dòng)物傳播[1]，主要導(dǎo)致腎綜合征出血熱(HFRS)，目前已發(fā)現(xiàn)的HV至少可分為 40種血清型或基因型[2]，鼠類(lèi)是其致病的主要傳染源。撫順地處長(zhǎng)白山的余脈，鼠種類(lèi)多，是國(guó)家最早開(kāi)展出血熱監(jiān)測(cè)的哨點(diǎn)之一，多年來(lái)一直未間斷春秋兩季的鼠類(lèi)監(jiān)測(cè)。

1 資料與方法

1.1 鼠間監(jiān)測(cè)

1.1.1 監(jiān)測(cè)地點(diǎn)和時(shí)間 撫順市的遼寧省監(jiān)測(cè)點(diǎn)清原縣，市監(jiān)測(cè)點(diǎn)撫順縣、新賓縣。監(jiān)測(cè)時(shí)間為鼠密度高的春秋兩季，即2013年的4月和10月。

1.1.2 監(jiān)測(cè)方法 采用夾夜法，在每個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的村內(nèi)、野外布夾，無(wú)菌剖取鼠肺，并用濾紙條沾取鼠血，液氮凍存待檢。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

1.2.1 鼠肺HFRS抗原檢測(cè) 將鼠肺進(jìn)行冷凍切片，冷丙酮固定7min。用間接免疫熒光 (indirectfluorescentantibodytest，IFAT)方法檢測(cè)HFRS抗原。HFRS病人恢復(fù)期血清適當(dāng)稀釋后作為一抗，加于切片標(biāo)本上，每孔20 μL，同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照，置濕盒內(nèi)37℃孵育 30min，于 0.01 mol／L PBS(pH7.2)震洗 3 次，蒸餾水輕洗脫鹽，室溫吹干；滴加羊抗人IgG熒光抗體，每孔20 μL，置濕盒內(nèi)37℃孵育30min，按上述方法洗滌、吹干；90%甘油封片，熒光顯微鏡下檢測(cè)。鏡下組織細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)典型的黃綠色熒光為陽(yáng)性。

1.2.2 鼠血清用ELISA法檢測(cè) 漢坦病毒(HV)特異性IgG抗體，按照ELISA試劑盒說(shuō)明操作。ELISA試劑盒，由中國(guó)CDC病毒病預(yù)防控制所提供

表1 監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠種構(gòu)成及帶毒率

1.3 主要儀器

冷凍切片機(jī)；熒光顯微鏡；2010酶標(biāo)儀。

2 結(jié)果

2.1 不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠種構(gòu)成以及鼠攜帶HFRS病毒情況

2013年間共捕鼠421只，鼠種以褐家鼠、黑線姬鼠和大林鼠為主，且以褐家鼠、黑線姬鼠為優(yōu)勢(shì)鼠種，撫順縣湯圖鄉(xiāng)湯圖村在春季監(jiān)測(cè)以黑線姬鼠為優(yōu)勢(shì)，高于褐家鼠(表1)。檢出IFAT陽(yáng)性17份，平均帶毒率為4.04%HFRS抗原。秋季鼠帶毒率高于春季。

2.2 不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠血清HFRS抗體水平情況

秋季鼠血清HFRS抗體水平高于秋季。見(jiàn)表2。

表2 不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠血清HFRS抗體水平情況

2.3 不同鼠種攜帶HFRS病毒情況

在監(jiān)測(cè)的褐家鼠、黑線姬鼠和大林鼠等鼠種中，褐家鼠鼠肺數(shù)為186，檢出HFRS抗原陽(yáng)性數(shù)為8，帶毒率為4.3%；黑線姬鼠鼠肺數(shù)為180，檢出HFRS抗原陽(yáng)性數(shù)為8，帶毒率為4.44%；大林鼠鼠肺數(shù)為29，檢出HFRS抗原陽(yáng)性數(shù)為1，帶毒率為3.45%，帶毒率無(wú)顯著差別 。

2.4 2013年撫順市監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠帶毒率和抗體陽(yáng)性率

見(jiàn)表3。

表3 2013年撫順市監(jiān)測(cè)點(diǎn)鼠帶毒率和抗體陽(yáng)性率

3 討論

通過(guò)對(duì)撫順市鼠密度較高的春秋兩季的四個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)結(jié)果為鼠帶病毒率為4.04%，鼠血清抗體陽(yáng)性率為12.59%，其潛在危險(xiǎn)是客觀存在的，不容忽視。撫順的清原縣監(jiān)測(cè)點(diǎn)曾經(jīng)在棕背平鼠中發(fā)現(xiàn)普馬拉型漢坦病毒[3]，但是這幾年監(jiān)測(cè)非常關(guān)注棕背平鼠，但是從未在棕背平鼠中監(jiān)測(cè)出漢坦病毒毒株。經(jīng)瀏覽疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)，撫順市近幾年的人群發(fā)病數(shù)與遼寧省人群發(fā)病基本一致。陽(yáng)性毒株P(guān)CR分型結(jié)果為以SEO型漢坦病毒為主，也與遼寧省是以SEO型漢坦病毒為主的SEO和HTN混合型疫區(qū)的結(jié)論相吻合[4]。HFRS為自然疫源性疾病，嚙齒類(lèi)動(dòng)物及小型哺乳動(dòng)物均易感染此病，在感染后一定時(shí)間內(nèi)體內(nèi)攜帶病毒，并從排泄物排泄病毒而成為該病動(dòng)物源性傳播的基礎(chǔ)，HFRS呈高度散發(fā)，撫順地區(qū)全年均有病例發(fā)生，其中遼寧省的疫情尤為嚴(yán)重，最高年發(fā)病數(shù)達(dá)5431例[5]。因此，進(jìn)行宿主動(dòng)物定期監(jiān)測(cè)，為腎綜合征出血熱疫情的預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)及制定防制預(yù)案提供科學(xué)的依據(jù)具有重要意義。

[1]Yu XJ，Liang MF，Zhang SY，et al.Fever with thrombocytopenia associated with a novel Bunyavirus in China[J].N Engl J Med，2011，364（16）：1523-1532.

[2]Jonsson CB，F(xiàn)igueiredo LT，Vapalahti O，et al.A global perspective on hantavirus ecology，epidemiology，and disease[J].Clin Microbiol Rev，2010，23(2):412-441.

[3]劉剛，李川，扈光偉，等.在中國(guó)發(fā)現(xiàn)普馬拉型漢坦病毒[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2003,17(1)：55-57.

[4]耿英芝，田疆，劉蕓，等.遼寧省漢城型漢坦病毒基因亞型分析[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2012，28（12）：1594-1596.

[5]秦彩明，劉蕓，姚文清.遼寧省鼠類(lèi)感染腎綜合征出血熱的病原學(xué)及分子生物學(xué)檢測(cè)比較[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào)，2010,26(6)：528-531.