李敬萍，凌 敏 (新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)二科，新疆 烏魯木齊 830002)

慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)是具有不完全可逆氣流受限特征的疾病，呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對(duì)有害氣體或有害顆粒的異常炎性反應(yīng)有關(guān)［1］。是臨床上常見疾病，且近年來該病患病率和病死率呈上升趨勢，但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。主要認(rèn)為中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和其他炎性反應(yīng)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、炎性反應(yīng)介質(zhì)參與疾病過程。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，越來越多研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞因子在COPD 氣道炎性反應(yīng)中起著重要作用［2］。

研究表明COPD 患者在支氣管肺泡灌洗液中干擾素－r(INF－r)顯著增加，提示INF－r 存在激活或增強(qiáng)巨噬細(xì)胞功能［3］。本文旨在通過對(duì)COPD 患者的血清及痰中IL－16、INF－r 水平，以探討其在COPD 發(fā)病中的作用及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2010 年9 月～2013 年1 月在新疆自治區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院的COPD 患者60 例，其中男35 例，女25例;年齡65 ～88 歲，平均(70.23±4.36)歲。均通過臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、肺部CT、肺功能等相關(guān)檢查符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)會(huì)2002 年頒布的《慢性阻塞性肺疾病診治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)。COPD 組納入標(biāo)準(zhǔn):符合指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡＞65 歲。按病情分為急性加重期及穩(wěn)定期組;急性加重期組:指患者咳嗽、咯痰、呼吸困難等癥狀加重，需要改變?nèi)粘Ｖ委?穩(wěn)定期:指患者咳嗽、咯痰氣喘等癥狀穩(wěn)定或輕微，不需要改變?nèi)粘Ｖ委?，并維持8 周以上。排除標(biāo)準(zhǔn):年齡＜65 歲;合并支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、有嚴(yán)重心血管系統(tǒng)疾病、肝膽系統(tǒng)疾病、機(jī)體其他疾病感染及近2 周內(nèi)有抗病毒及非甾體類藥物用藥史。對(duì)照組選擇年齡相匹配的同期入院體檢者30 例，男18 例，女12 例;年齡67 ～85 歲，平均(68.23±3.52)歲，納入標(biāo)準(zhǔn):近1 個(gè)月無呼吸系統(tǒng)相關(guān)疾病，有吸煙史的研究對(duì)象需已戒煙5 年以上，且經(jīng)過仔細(xì)病史采集、體格檢查、胸部X 線、肺功能檢查均未發(fā)現(xiàn)異常。

1.2 標(biāo)本處理:痰液標(biāo)本收集和處理 受試者清晨用溫水漱口，在室溫條件下0.9%生理鹽水4 ml 吸入，30 min 后深咳留取5ml 痰標(biāo)本置于帶刻度的干燥杯，將收集的痰液與等量生理鹽水混合，然后加入等體積的二硫蘇糖醇混勻后，漩渦震蕩30s，使痰液成完全均勻狀態(tài)，4℃450 g/min 離心10 min，留取上清液標(biāo)本置－80℃冰箱中凍存，待測IL－16 及INF－r 濃度。

外周血標(biāo)本獲取 受試者在早晨空腹?fàn)顟B(tài)下采靜脈血5 ml，以3 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心10 min 后取血清，置于－80℃冰箱凍存待檢。采用雙抗體夾心酶聯(lián)吸附試驗(yàn)測定血清中IL－16、干擾素－r 水平濃度。IL－16 試劑盒為美國PIERCE 原裝試劑盒，IFN－r 試劑盒由北京晶美生物技術(shù)公司生產(chǎn)。采用ELx－800 型全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀以490 nm 波長讀盤。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS17.0 軟件處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用方差齊性檢驗(yàn)、LSD 法，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL－16 與IFN－r 相關(guān)性分析采用Spearman 相關(guān)分析，P ＜0.01 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COPD 患者與健康對(duì)照組血清IL－16、INF－r 水平比較:見表1。COPD 患者血清IL－16 水平急性加重期(2445.86±145.39 ng/L)高于穩(wěn)定期(1 401.67±90.52 ng/L)，而穩(wěn)定期患者高于健康對(duì)照組(129.35±15.48ng/L)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05);血清INF－r 水平COPD 急性發(fā)作期(22.86±3.38 pg/ml)較穩(wěn)定期(16.55±2.82 pg/ml)，對(duì)照組(15.73±2.85 pg/ml)高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。

表1 COPD 患者急性加重期、穩(wěn)定期和健康對(duì)照組血清IL－16、INF－r水平比較

表1 COPD 患者急性加重期、穩(wěn)定期和健康對(duì)照組血清IL－16、INF－r水平比較

注:與穩(wěn)定期和健康對(duì)照組相比，①P ＜0.01;與健康對(duì)照組，②P ＜0.01

組別 例數(shù) IL－16(ng/L) IFN－r(pg/ml)急性加重期 30 2 445.86±145.39① 22.86±3.38①穩(wěn)定期 30 1 401.67±90.52② 16.55±2.82健康對(duì)照組 30 129.35±15.48 15.73±2.85 F 值 4 096.024 49.8111 P 值 ＜0.01 ＜0.01

2.2 COPD 患者與健康對(duì)照組痰液IL－16、INF－r 水平比較:見表2，急性加重期組誘導(dǎo)痰液中IL－16(1431.16±264.26 ng/L)水平明顯高于穩(wěn)定期組和正常對(duì)照組水平(914.93±233.34 ng/L、858.63±144.70 ng/L)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。急性加重期痰液中IFN－r 較穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.01)。且穩(wěn)定期組和健康對(duì)照組IL－16、IFN－r 水平無明顯差異。

表2 COPD 患者急性加重期、穩(wěn)定期和健康對(duì)照組痰液中IL－16、INF－r 水平比較

表2 COPD 患者急性加重期、穩(wěn)定期和健康對(duì)照組痰液中IL－16、INF－r 水平比較

注:與穩(wěn)定期組、健康對(duì)照組比較，①P ＜0.01

組別 例數(shù) IL－16(ng/L) IFN－r(pg/ml)急性加重期 30 1 431.16±264.26① 10.60±3.18①穩(wěn)定期 30 914.93±233.34 6.51±2.77健康組 30 858.63±144.70 6.38±2.87 F 值 61.715 19.959 P 值 ＜0.01 ＜0.01

2.3 IL－16 水平與IFN－r 的相關(guān)性分析:結(jié)果顯示血液及痰液中IL－16 水平與IFN－r 含量呈顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.630、0.594，P ＜0.01)。

3 討論

COPD 是種氣流受限疾病，持續(xù)性炎性反應(yīng)和氣道重塑是氣流阻塞的病理生理基礎(chǔ)?，F(xiàn)研究表明其發(fā)病過程主要有大量細(xì)胞因子和炎性蛋白參與。細(xì)胞因子是調(diào)節(jié)和決定免疫反應(yīng)性質(zhì)的分泌性蛋白，白介素作為細(xì)胞因子家族成員，發(fā)揮著免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)作用。在對(duì)支氣管哮喘患者研究中表明氣道上皮中IL－16 高水平表達(dá)，提示淋巴細(xì)胞具有合成IL－16 的作用，并將其儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)［4］，反之IL－16 具有促進(jìn)細(xì)胞、單核細(xì)胞的聚集功能，也可作為細(xì)胞生長因子并且促進(jìn)二者的激活和增生［5］。同時(shí)這理論在對(duì)COPD 的研究中也得以體現(xiàn)，IL－16 參與了COPD氣道炎性反應(yīng)的發(fā)病過程，其機(jī)制可能與T 淋巴細(xì)胞活化有關(guān)［6］。

IL－16 主要由活化的T 細(xì)胞產(chǎn)生，與其受體結(jié)合后導(dǎo)致多種炎性細(xì)胞的浸潤和活化。有研究表明單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞在炎癥早期受到炎性反應(yīng)刺激時(shí)分泌IL－16，同時(shí)受到趨化因子影響，使巨噬細(xì)胞，中性粒細(xì)胞向氣道定向移動(dòng)，引起聚集［7－8］。同時(shí)IL－16 可刺激外周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌IL－6、IFN－r 等炎癥因子，促進(jìn)COPD 炎性反應(yīng)的發(fā)生，發(fā)展。這一觀點(diǎn)與在本試驗(yàn)對(duì)IL－16 和IFN－r 相關(guān)性分析中，兩者存在正相關(guān)性相一致。故認(rèn)為共同參與COPD 炎性反應(yīng)過程。

本試驗(yàn)表明血清中IL－16 水平在急性發(fā)作期較穩(wěn)定期和健康對(duì)照組明顯升高，結(jié)果與顧瀏櫻、肖丹［9］，張曉軍、何韶衡［10］等對(duì)IL－16 與COPD 的研究相一致。提示了可能在COPD 發(fā)生發(fā)展過程中，活化的T 細(xì)胞，中性粒細(xì)胞等分泌大量的IL－16，而IL－16 同時(shí)具有促進(jìn)上述細(xì)胞因子分泌作用。同時(shí)穩(wěn)定期含量較健康對(duì)照組高，表明IL－16 參與氣道炎性反應(yīng)，且水平高低與疾病所處分期有關(guān)，可反映氣道炎癥程度。而誘導(dǎo)痰中IL－16 在急性發(fā)作期和穩(wěn)定期水平雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均較正常組明顯升高。從而從誘導(dǎo)痰層面間接反映其參與炎性反應(yīng)過程。同時(shí)通過對(duì)血清和痰液中IL－16 水平相比，血清IL－16 較痰中更能反映COPD 的炎性反應(yīng)程度。

IFN－r 主要由活化的T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞產(chǎn)生，可激活巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和NK 細(xì)胞。IFN－r 介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，具有促進(jìn)Th1 細(xì)胞增殖和活化的能力［11－13］。研究顯示COPD 中產(chǎn)生IFN－r 的T 細(xì)胞亞群占優(yōu)勢，在COPD 中升高，且具有協(xié)同清除病原體的作用。本試驗(yàn)通過對(duì)血液和誘導(dǎo)痰中檢測IFNr 水平，表明在急性加重期中IFN－r 水平含量較穩(wěn)定期和健康對(duì)照組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)，但穩(wěn)定期和健康對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。無法單一通過檢測IFN－r 水平來反應(yīng)COPD 患者炎性反應(yīng)程度。

本試驗(yàn)表明聯(lián)合測定血清中IL－16、IFN－r 水平對(duì)COPD患者病情程度判斷有一定意義?？傊?，筆者需要不斷從分子生物學(xué)水平對(duì)COPD 的病理生理改變探索，才能對(duì)其發(fā)病機(jī)制有更深入的理解，更好地為臨床工作服務(wù)。

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