孟 霞,王學(xué)叢,豐 平,盧 靜,王學(xué)江

（1.首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，北京 100069；2.首都醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室，北京 100069）

瘦素對(duì)大鼠肝纖維化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控及槲寄生堿的干預(yù)作用

孟 霞1,王學(xué)叢2,豐 平2,盧 靜1,王學(xué)江2

（1.首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，北京 100069；2.首都醫(yī)科大學(xué)病理生理教研室，北京 100069）

目的 探討瘦素調(diào)控大鼠肝纖維化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制及槲寄生堿的干預(yù)作用。方法 以CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型為研究對(duì)象，45只大鼠隨機(jī)分為三組，分別為對(duì)照組、模型組、藥物干預(yù)組。對(duì)照組不做任何處理，自由飲食、飲水；模型組和槲寄生堿治療組分別腹腔注射40％CCl4-植物油溶液2mL/kg，每周2次，共8周。實(shí)驗(yàn)第9周，治療組經(jīng)灌胃給予大鼠槲寄生堿8g/（kg·d），模型組灌胃給予等劑量的生理鹽水，共8周。實(shí)驗(yàn)第17周頸椎脫臼法處死所有動(dòng)物，取出肝臟左前葉。采用HE染色、MASSON染色方法觀察槲寄生堿對(duì)肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響；免疫組織化學(xué)的方法觀察槲寄生堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞瘦素及瘦素受體的影響。Western Blot法檢測(cè)大鼠肝臟組織JAK2、STAT3蛋白水平以及JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平。結(jié)果 肝臟大體、HE染色以及Masson膠原染色結(jié)果提示：大鼠肝纖維化模型復(fù)制成功，槲寄生堿具有阻斷逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用。免疫組織化學(xué)染色顯示，與模型組比較，槲寄生堿明顯抑制模型大鼠肝組織瘦素、瘦素受體的表達(dá)。Western Blot顯示，正常對(duì)照組JAK2、STAT3蛋白表達(dá)量最少；模型組JAK2、STAT3蛋白高表達(dá)；而藥物處理組的JAK2、STAT3蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論 槲寄生堿可有效逆轉(zhuǎn)大鼠肝臟纖維化，其作用機(jī)制可能是通過下調(diào)大鼠肝組織瘦素、瘦素受體的表達(dá)，進(jìn)而影響JAK2/STAT3信號(hào)通路來完成的。

槲寄生堿；肝纖維化；肝星狀細(xì)胞；瘦素；瘦素受體；JAK2/STAT3信號(hào)通路

肝纖維化是由于肝損傷引起纖維增生和纖維分解不平衡，導(dǎo)致肝臟纖維結(jié)締組織的過度沉積所致。細(xì)胞、細(xì)胞因子及基質(zhì)之間相互作用，使肝臟細(xì)胞外基質(zhì)代謝紊亂，在竇周間隙過度沉積，繼之肝竇毛細(xì)血管纖維化，造成纖維在肝臟內(nèi)沉積過多，最后導(dǎo)致肝纖維化。目前認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞激活、增殖并大量生成細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的過程是肝纖維化病理機(jī)制的中心環(huán)節(jié)［1]，而瘦素（leptin）與受體結(jié)合后，激活 JAK/STAT信號(hào)通路，引起下游的轉(zhuǎn)錄因子STAT3活化后發(fā)揮效應(yīng)［2]，從而促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的形成，促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。肝纖維化目前是公認(rèn)的肝癌前病變，由于肝纖維化過程是可逆的，因此對(duì)肝纖維化的治療研究已成為當(dāng)今我國肝病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)課題。

方劑槲芪散（HQS）是國家級(jí)名老中醫(yī)錢英教授在臨床應(yīng)用多年的經(jīng)驗(yàn)方。前期臨床觀察研究表明該方在治療慢性乙型病毒性肝炎療效顯著［3]。槲芪散的君藥是槲寄生，我們前期實(shí)驗(yàn)證明，槲寄生提取物槲寄生堿具有明顯的阻斷肝癌前病變的作用［4]，而肝纖維化已明確是肝癌前病變，因此我們認(rèn)為槲寄生堿可以阻斷肝癌前病變，因而對(duì)于肝纖維化也具有很好的治療效果，為觀察其作用及探討作用機(jī)制，我們進(jìn)行槲寄生堿對(duì)肝纖維化發(fā)生發(fā)展干預(yù)作用的研究。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供【SCXK（京）2011-0011】。選用6周齡，健康、雄性SD大鼠45只，體重150～165g；動(dòng)物飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部屏障環(huán)境動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室【SYXK（京）2010-0020】。

1.2 主要試劑、藥物和儀器

DMEM高糖培養(yǎng)基（美國Gibco公司），APES （中杉金橋），DAB（中杉金橋），DMSO（美國Sigma公司），PBS（中杉金橋），SDS（美國Sigma公司），標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清（美國 Gibco公司），蛋白預(yù)染 Marker （美國Sigma公司），蛋白預(yù)染Marker（美國Sigma公司），其他試劑為國產(chǎn)分析純。中藥槲寄生（北京同仁堂），槲寄生堿由北京中醫(yī)研究所提取。

自動(dòng)脫水機(jī)（LEICA ASP 300），包埋機(jī)（LEICA EG 1160），石蠟切片機(jī)（LEICA RM2125），圖象分析處理系統(tǒng)（Leica Qwin）。電泳裝置（美國Bio-Rad公司），電轉(zhuǎn)裝置（美國Bio-Rad公司），凝膠成像儀（美國Bio-Rad公司），二氧化碳培養(yǎng)箱（美國Revco公司），超速低溫離心機(jī)（美國Sigma公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 大鼠肝纖維化模型復(fù)制及藥物干預(yù)

雄性SD大鼠45只，自由進(jìn)食一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動(dòng)物隨機(jī)分成三組，分別為正常對(duì)照組、模型組、藥物干預(yù)組。正常對(duì)照組不做任何處理，常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲食、飲水；模型組和藥物干預(yù)組分別進(jìn)行腹腔注射40％CCl4-植物油溶液2mL/kg，每周2次，共8周，構(gòu)建肝纖維化模型。8周末取一只模型組大鼠進(jìn)行模型復(fù)制是否成功的鑒定。第9周開始，藥物干預(yù)組用槲寄生堿灌胃8g/（kg·d），模型對(duì)照組灌等劑量的生理鹽水，共8周。

1.3.2 肝臟標(biāo)本采集

末次給藥24 h后，大鼠稱重，戊巴比妥鈉麻醉，打開腹腔；肉眼觀察新鮮肝臟的外形、色澤、質(zhì)地等大體形態(tài)；分別在大鼠肝臟左前葉固定部位，取兩塊肝組織約（1×1×1）cm3大小，分別固定于10％中性福爾馬林溶液和苦味酸固定液，做光鏡觀察和免疫組化用。

1.3.3 病理切片的的制作及 MASSON染色、HE染色

病理切片的制作：按照常規(guī)方法，從動(dòng)物體內(nèi)取下新鮮肝臟，置入 Bouin氏液（飽和苦味酸 85 mL，甲醛10 mL，冰醋酸5 mL）中固定24 h后，換成70％酒精，24 h后用LEICA ASP 300自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水。完成后用自動(dòng)包埋機(jī)LEICA EG 1160包埋入石蠟并切成5μm厚度的連續(xù)切片。

Masson染色：切片脫蠟（烤箱55℃），水化（二甲苯兩遍，各15 min，無水乙醇兩遍，95％乙醇，80％乙醇各5 min）。放入 Bouin氏液作用一晚（4℃）或37℃烤箱1～2 h，然后流水沖洗切片至黃色消失再進(jìn)行染色；蘇木精浸染3 min，自來水洗3×3 min，氨水（自來水）返藍(lán)3 min，1％鹽酸酒精分化1～2 s，大量自來水洗10min（顯微鏡下觀察）；麗春紅酸性品紅染色7 min；蒸餾水沖洗3遍至浮色脫去；1％磷鉬酸水溶液處理3 min；不用水洗，直接用1％亮綠液復(fù)染7 min；蒸餾水沖洗3遍至浮色脫去；0.2％冰醋酸處理3遍，每遍約5 s；無水乙醇快速脫水（兩遍，共2 min），二甲苯透明（兩遍，各15 min）；中性樹膠封片。

HE染色：石蠟切片，37℃烤片2～3 h。脫蠟、蒸餾水洗滌5 min。進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，用中性樹脂，蓋玻片封片，置通風(fēng)柜內(nèi)晾干。顯微鏡觀察，拍照分析。

免疫組織化學(xué)染色：將肝組織切片置于60℃烤箱中烤1 h，然后二甲苯脫蠟透明2次，各10 min，100％乙醇2次，各5 min，90％ ～70％乙醇每次3 min；PBS洗3次，每次5min。進(jìn)行）抗原修復(fù)（微波修復(fù)），用3％H2O2，室溫封閉5～10 min，用PBS洗3次，每次5 min，胎牛血清白蛋白封閉液，室溫20 min，加一抗50μL，4度過夜，加二抗，PBS洗滌后，DAB顯色5～8 min，鏡下控制中止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染，中性樹脂封片，鏡檢。

1.3.4 Western blot免疫印記實(shí)驗(yàn)

Western blot免疫印記分析聚丙烯酰胺凝膠電泳采用40 g/L濃縮膠、120g/L分離膠，上樣量30 μg，電壓80 V待蛋白跑出濃縮膠后調(diào)致100 V，電泳結(jié)束后取出凝膠，用夾心方法把濾紙，凝膠，硝酸纖維素薄膜，濾紙依順序放好，然后用海綿布、篩孔板固定好，插入電轉(zhuǎn)移槽中，并加入電轉(zhuǎn)移緩沖液，保證凝膠在陰極，硝酸纖維素薄膜在陽極方向。放入 Bio-Rad半干電轉(zhuǎn)儀中，15V電壓轉(zhuǎn)50 min左右，根據(jù)分子量的大小進(jìn)行調(diào)整。用5％奶粉室溫封閉3 h以上，孵育結(jié)束后，用PBST洗膜液在搖床上劇烈搖動(dòng)漂洗，3×15 min。分別加入一抗1：1000稀釋（用抗體稀釋），4℃過夜，孵育結(jié)束后，用PBS洗膜液在搖床上劇烈搖動(dòng)漂洗，3×15 min。二抗1：2000稀釋（用抗體稀釋），室溫孵育1 h，孵育結(jié)束后，用PBST洗膜液在搖床上劇烈搖動(dòng)漂洗，3 ×15 min。加Santa Crus發(fā)光試劑，暗室顯影并沖洗膠片，用ImageJ對(duì)條帶進(jìn)行定量析。測(cè)定目的條帶的平均吸光度值，并將5次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值作為蛋白含量的相對(duì)值。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)值以mean±SEM表示，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，采用t檢驗(yàn)，P ＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝纖維化模型復(fù)制及藥物干預(yù)

2.1.1 肉眼觀察結(jié)果：正常對(duì)照組大鼠肝臟表面光滑，邊緣銳利，質(zhì)地較軟，色暗紅，有光澤。模型組大鼠肝臟表面較正常組欠光滑，顏色均較正常組淺，邊緣鈍，質(zhì)地硬，部分標(biāo)本表面凹凸不平，呈小結(jié)節(jié)狀，黃褐色。藥物干預(yù)組大鼠肝臟表面較光滑，顏色較紅，無顆粒狀結(jié)節(jié)（封2圖1）。

2.1.2 光鏡下形態(tài)學(xué)變化：正常對(duì)照組肝小葉和匯管區(qū)結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞呈索狀分布，無明顯肝細(xì)胞壞死，間質(zhì)無擴(kuò)增，膠原纖維主要分布于匯管區(qū)和中央靜脈周圍。模型組正常肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝索排列紊亂，可見肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞空泡變性散在分布，間質(zhì)增生明顯，膠原纖維構(gòu)成的纖維間隔形成，其破壞界板，分割、包繞肝小葉，部分動(dòng)物形成較多完整的假小葉。藥物干預(yù)組肝小葉結(jié)構(gòu)明顯改善，膠原纖維間隔較少，肝細(xì)胞壞死、炎性細(xì)胞浸潤少見，匯管區(qū)結(jié)締組織增生不明顯，但個(gè)別大鼠仍有不完全性假小葉（封2圖2、彩插1圖3）。

2.2 槲寄生堿對(duì)肝纖維化大鼠肝組織瘦素（leptin﹞及瘦素受體（OB-Rb﹞的影響

2.2.1 leptin的表達(dá)

正常組肝細(xì)胞內(nèi)無表達(dá)，肝竇間隙、匯管區(qū)基質(zhì)及間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)有極少量表達(dá)。模型組肝內(nèi)leptin的表達(dá)明顯增強(qiáng)，主要見于肝星狀細(xì)胞中。纖維間隔有弱陽性表達(dá)。陽性物質(zhì)主要集中在胞質(zhì)內(nèi)，胞膜上有少量表達(dá)。藥物治療組陽性染色程度較模型組明顯減輕，主要表達(dá)集中在肝星狀細(xì)胞中（彩插1圖4）。

2.2.2 0B-Rb表達(dá)

正常肝組織不表達(dá)或僅微弱表達(dá)于門靜脈、小葉中央靜脈周圍細(xì)胞及匯管區(qū)的結(jié)締組織，著色淺淡；模型組匯管區(qū)周圍細(xì)胞、門靜脈及中央靜脈周圍細(xì)胞和纖維間隔內(nèi)均見OB-Rb陽性著色細(xì)胞，且著色明顯增強(qiáng)，主要見于非實(shí)質(zhì)細(xì)胞（包括肝星狀細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞、枯否細(xì)胞等）胞質(zhì)及胞膜上，部分可定位于胞核；藥物治療組陽性染色程度較模型組明顯減輕，主要表達(dá)集中在肝星狀細(xì)胞中（彩插2圖5）。

2.3 槲寄生堿對(duì)肝纖維化大鼠肝組織 JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響

用Western Blot法檢測(cè)肝臟組織內(nèi) JAK2、STAT3表達(dá)情況，兩種總蛋白三組之間表達(dá)比較均一；檢測(cè)肝臟組織內(nèi)P-JAK2、P-STAT3表達(dá)情況，正常組蛋白表達(dá)量最少，各藥物處理組蛋白條帶顏色均較淺，模型組條帶顏色最深。與正常組比較，模型組P-JAK2、P-STAT3蛋白程度均增高，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）；與模型組相比，藥物治療組的P-JAK2、P-STAT3蛋白表達(dá)顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）（圖6）。

圖6 大鼠肝臟組織內(nèi)JAK2和STAT3Western blot結(jié)果Note：A.Normal group，B.Model group，C.Therapeutic group.Data are presented asmean±SEM of three independent experiments.***P＜0.01 vs.normal group；###P＜0.01 vs.model group.Fig.6 Expression of JAK2/STAT3 protein in liver tissue detected by western blot

3 討論

肝纖維化發(fā)生的機(jī)制至今尚未完全清楚。目前認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）激活、增殖并大量生成ECM的過程是肝纖維化病理機(jī)制的中心環(huán)節(jié)［5]。肝纖維化過程中，啟動(dòng)HSC增殖及使其持續(xù)的因素尚未完全闡明。最近有文獻(xiàn)［1]報(bào)導(dǎo)枯否細(xì)胞也與肝纖維化有密切的關(guān)系。己知HSC的激活和增殖受多種細(xì)胞因子（cytokines，CK）的調(diào)控［6-7]。

瘦素（leptin）是新發(fā)現(xiàn)的促肝纖維化的細(xì)胞因子，大量的臨床與實(shí)驗(yàn)研究顯示，瘦素與肝纖維化的形成之間有著密切聯(lián)系。在慢性病毒性肝炎、酒精性肝硬化、原發(fā)性膽汁性肝硬化等患者中均可見血清瘦素水平明顯升高［8]。瘦素與OB-Rb相結(jié)合激活HSC內(nèi)相應(yīng)的信號(hào)分子，在某些轉(zhuǎn)錄因子的作用下，轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)入核，促進(jìn)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而進(jìn)一步活化HSC，使其增殖、并轉(zhuǎn)化為肌樣成纖維細(xì)胞（myofibrosblast，MFB），合成、分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）［9]。有研究表明，HSC內(nèi)瘦素受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能涉及到JAK-STAT途徑，另外，活化的JAK激酶可激活Ras-Raf-MEK-MAPK、PI3K/AKT等其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。而在肝纖維化中，瘦素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制主要與 JAK2［10]與STAT3［11]磷酸化有關(guān)，但不完全依賴該通路。

目前推測(cè)leptin介導(dǎo)的JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑可能是：leptin與其受體結(jié)合后則可誘導(dǎo)受體形成同源或異源二聚體，吸引非受體型酪氨酸激酶JAK2。JAK2能磷酸化OB-Rb上的酪氨酸位點(diǎn)（即酪氨酸Tyr殘基磷酸化，Tyr-P），使OB-Rb上產(chǎn)生了與STAT3結(jié)合的區(qū)域。STAT3在沒有特異性的刺激時(shí)定位于胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí)，STAT3上的SH2結(jié)構(gòu)域與OB-Rb上被磷酸化的酪氨酸殘基結(jié)合，同時(shí)自身被 JAK2磷酸化。兩個(gè)磷酸化的STAT3分子可通過Tyr-P和SH2域形成二聚體，結(jié)合在靶基因上游的反向重復(fù)序列上，啟動(dòng)特定基因的表達(dá)、轉(zhuǎn)錄并翻譯特定蛋白質(zhì)，迅速提高目的基因的轉(zhuǎn)錄效率，活化HSC促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展等疾病發(fā)生［12]，從而發(fā)揮leptin的生物學(xué)功能。此外有人證明leptin可從其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮其生物學(xué)功能［13]。

本實(shí)驗(yàn)首先通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討瘦素和肝纖維化的關(guān)系，免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠瘦素和瘦素受體的表達(dá)量明顯增高，而且其下游的信號(hào)通路JAK2/STAT3蛋白磷酸化的水平明顯提高，這說明瘦素確實(shí)與肝纖維化密切相關(guān)，并且是通過與功能受體結(jié)合，從而激活下游JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白磷酸化而發(fā)揮致纖維化作用的。

我們實(shí)驗(yàn)室前期的實(shí)驗(yàn)證明槲芪散在治療肝纖維化，使調(diào)節(jié)能量代謝的酶類基本維持在正常水平，保護(hù)實(shí)驗(yàn)性肝損傷，抑制/逆轉(zhuǎn)肝癌前病變方面療效顯著［14]，并可干預(yù)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。其君藥槲寄生性平、味苦，具有強(qiáng)筋骨、安胎、祛風(fēng)濕、益血、補(bǔ)肝腎等功能。近年來，槲寄生的抗癌作用受到國內(nèi)外醫(yī)藥學(xué)界的廣泛重視［15-16]，并且已從多種槲寄生植物中提取到具有抗癌活性的凝集素，毒肽，植物糖蛋白和生物堿。我們前期研究證實(shí)，槲寄生堿具有明顯阻斷肝癌前病變的作用，而肝纖維化已明確是肝癌前病變，因此我們認(rèn)為槲寄生堿可以阻斷肝癌前病變，因而對(duì)于肝纖維化也具有很好的治療效果，為探討其發(fā)生機(jī)制，我們進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，槲寄生堿治療組肝臟大體和光鏡下結(jié)果都明顯好于模型組，治療組免疫組化和Western Blot結(jié)果顯示，瘦素，瘦素受體，JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白磷酸化水平都較模型組低，這都說明槲寄生堿對(duì)肝纖維化有很好的治療效果，且是通過抑制瘦素，瘦素受體，JAK2/STAT3信號(hào)通路蛋白磷酸化這一機(jī)制而實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述，CCl4引起肝損傷發(fā)生時(shí)，觸發(fā)HSC活化并大量表達(dá)瘦素，其后瘦素作用于OB-Rb，激活其JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，促進(jìn)竇內(nèi)皮細(xì)胞等表達(dá)TGF-pl，并在其介導(dǎo)下進(jìn)一步誘導(dǎo)HSC的增殖、活化，進(jìn)而促進(jìn)膠原（尤其是I型膠原）等ECM的合成和分泌，如此循環(huán)反復(fù)，最終促進(jìn)了肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展。槲寄生堿可有效逆轉(zhuǎn)大鼠肝臟纖維化，其作用機(jī)制可能是通過下調(diào)大鼠肝組織瘦素、瘦素受體的表達(dá)，進(jìn)而影響JAK2/STAT3信號(hào)通路來完成的。槲寄生堿能干預(yù)瘦素在肝星狀細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，致肝星狀細(xì)胞JAK2、STAT3蛋白低表達(dá)，這可能是其抗肝纖維化的機(jī)制之一。

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學(xué)術(shù)不端行為是指違反學(xué)術(shù)規(guī)范、學(xué)術(shù)道德的行為，國際上一般用來指捏造數(shù)據(jù)（fabrication）、竄改數(shù)據(jù)（falsification）和剽竊（plagiarism）三種行為。但是一稿多投、侵占學(xué)術(shù)成果、偽造學(xué)術(shù)履歷等行為也可包括進(jìn)去。學(xué)術(shù)不端行為在世界各國、各個(gè)歷史時(shí)期都曾經(jīng)發(fā)生過，但是像中國當(dāng)前這樣如此泛濫，嚴(yán)重到被稱為學(xué)術(shù)腐敗的地步，卻是罕見的。這不僅表現(xiàn)在違反者眾多、發(fā)生頻繁，各個(gè)科研機(jī)構(gòu)都時(shí)有發(fā)現(xiàn)，而且表現(xiàn)在涉及了從院士、教授、副教授、講師到研究生、本科生的各個(gè)層面。由于目前中國缺乏學(xué)術(shù)規(guī)范、學(xué)術(shù)道德方面的教育，科技工作者在學(xué)習(xí)、研究過程中發(fā)生不端行為，經(jīng)常是由于對(duì)學(xué)術(shù)規(guī)范、學(xué)術(shù)道德缺乏了解，認(rèn)識(shí)不足造成的。因此，對(duì)科技工作者進(jìn)行學(xué)術(shù)規(guī)范、學(xué)術(shù)道德教育，防患于未然，是遏制學(xué)術(shù)腐敗、保證中國學(xué)術(shù)研究能夠健康發(fā)展的一個(gè)重要措施。

早在2007年，中國科協(xié)就發(fā)布了科技工作者科學(xué)道德規(guī)范，本刊重溫此規(guī)范，以期在我刊營造一種健康的學(xué)術(shù)研究氛圍，由于版面限制，我刊陸續(xù)將規(guī)范全文刊出。

The signal transduction pathway of rats w ith liver fibrosis regulated by leptin and interfering effects ofm istletoe alkali

MENG Xia1，WANG Xue-cong2，F(xiàn)ENG Ping2，LU Jing1，WANG Xue-jiang2
（1.Department of experimental animals，Capital Medical University，Beijing 100069，China；
2.Department of pathophysiology，Capital Medical University，Beijing 100069，China）

Objective To investigate the signal transduction pathway mechanisms of rats with liver fibrosis regulated by leptin and interfering effects ofmistletoe alkali.Methods The hepatic fibrosis in ratsmodelwas established by injecting carbon tetrachloride.Forty-five SD ratswere randomly divided into normal group，model group and therapeutic group.All rats except rats in normal group were intraperitoneally injected with 40％carbon tetrachloride in peanut oilwith a dose of 2.0 mL/100g according to the body weight twice a week for 8 weeks.Then，the therapeutic group was givenmistletoe alkali（8g/（kg·d））for 8 weeks via gastrogavage.Rats in normal and model group were served with distilled water at the same time.At the end of the 16th week，blood and tissue specimens were taken from all the rats.The influence ofmistletoe alkalion livermorphology in liver fibrosis ratmodel was reviewed by HE and Masson staining.The effects of mistletoe alkali on the expression of Leptin and its receptor（OB-Rb）in HSC in fibrosis rat model were determined by immunohistochemistry（IH）.The expression of JAK2，STAT3 and the activity of phospho-JAK2，phospho -STAT3 were detected by Western blotting analysis.Results The degree of fibrosis of themodel group wasmore severe than the normal group and the treatment group，which suggested thatmistletoe alkali can reverse liver fibrosis in rats.Immunohistochemical staining showed thatmistletoe alkali reduced the hepatic expression of leptin and OB-Rb in ratswith liver fibrosis in comparison with their expression in themodel group.Compared with the normal group，the expression of JAK2 and STAT3 increased in themodel group.However，the expression of JAK2 and STAT3 decreased in themedication groups compared with the model group.Conclusion Mistletoe alkali can effectively ameliorate liver fibrosis in rats possibly through inhibiting hepatic leptin and its receptor expressions，which through inhibiting hepatic leptin and its receptor expressions，thus inhibit the JAK2/STAT3 signaling pathway.

Mistletoe alkali；Liver fibrosis；Hepatic stellate cells；Leptin；OB-Rb；JAK2/STAT3 signaling pathway

R-332

A

1671-7856（2015﹞10-0001-06

10.3969.j.issn.1671.7856.2015.010.001

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81272757）；北京市屬高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)與教師職業(yè)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（IDHT20150502）。

孟霞（1973-），女，主管技師，研究方向：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理，E-mail：mengxia@ccmu.edu.cn。

盧 靜（1969-），女，副教授，研究方向：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型研究，E-mail：lijing@ccmu.edu.cn；王學(xué)江（1957-），女，教授，研究方向：病理生理學(xué)研究，E-mail：xjwang@ccmu.edu.cn。

﹞2015-08-19