涂娟，何華慶，尤榕，韓玲，黃麗紅，張凱，葉美霞，龔甜

(江西省血液中心，江西 南昌330077)

冷沉淀因富含凝血因子Ⅷ(FⅧ)、纖維蛋白原(Fbg)等有效成分，被廣泛用于血友病、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥等患者的治療,也是局部止血藥纖維蛋白膠的重要成分。用病毒滅活新鮮冰凍血漿為原料提取冷沉淀凝血因子，可進(jìn)一步減少因輸血傳播疾病的發(fā)生率[1-7]。我中心自2009年開始采用亞甲藍(lán)(MB)/光化學(xué)法對血漿進(jìn)行病毒滅活。本課題通過比較同源新鮮冰凍血漿在滅活前后制備冷沉淀的質(zhì)量評價分析血漿滅活后制備冷沉淀的可行性，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 cryofuge6000i型大容量低溫離心機(德國賀利氏公司),MBF21型低溫血漿速凍機 (深圳愛康醫(yī)療設(shè)備有限公司),HDME-1A型醫(yī)用病毒滅活箱(上海輸血技術(shù)有限公司),CA-500型血凝儀(日本希森美康公司)。

1.1.2 試劑與耗材 FⅧ、Fg含量測定試劑盒 (德國SIEMENS公司),MBPF-B型一次性使用病毒滅活輸血過濾器(上海輸血技術(shù)有限公司)。所有試劑與耗材均在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法1.2.1冷沉淀原料血漿的制備 隨機抽取400ml/袋全血制備的新鮮冰凍血漿48袋(200ml/袋)，每袋無菌操作均分為兩袋(100ml/袋)，分別作為對照組組、實驗組。對照組立即置于-50℃速凍機中速凍，-30℃保存?zhèn)溆茫葱迈r冰凍血漿組；實驗組用MB/光化學(xué)法進(jìn)行病毒滅活后，采用與對照組相同的方式速凍并保存?zhèn)溆?，即病毒滅活冰凍血漿組。整個過程于采血后4~6h內(nèi)完成。

1.2.2 冷沉淀的制備 將上述對照、實驗組冰凍血漿分批取出，在完全相同的條件下制備兩組冷沉淀，快速置于-50℃速凍機中速凍，-30℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 留樣與檢測 將上述對照、實驗組冷沉淀置37℃水浴箱中融化并稱重，混勻后無菌留樣2ml，快速在血凝儀上檢測FⅧ和Fg的含量。操作過程嚴(yán)格按儀器及試劑說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，采用t檢驗對兩樣本均數(shù)進(jìn)行比較，P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)亞甲藍(lán)滅活的新鮮冰凍血漿制備的冷沉淀FⅧ和Fbg含量均明顯減少，保留率分別為69.5%和65.48%。見表1。

表1 兩組冷沉淀中FⅧ和Fg含量的測定結(jié)果(±s，n＝48)

表1 兩組冷沉淀中FⅧ和Fg含量的測定結(jié)果(±s，n＝48)

成分 對照組 實驗組 t P FⅧ含量(IU/袋)Fg 含量(mg/袋)54.85±18.96 87.28±23.58 38.12±13.34 57.15±17.16 5.14 5.72<0.05<0.05

3 討論

有研究表明輸注冷沉淀傳染病毒的風(fēng)險高于其它血液產(chǎn)品如血漿、紅細(xì)胞和血小板[8]。因此，用亞甲藍(lán)病毒滅活FFP制備冷沉淀，是進(jìn)一步降低輸注冷沉淀傳染病毒危險性的必要措施。大量實驗證實亞甲藍(lán)光化學(xué)法滅活血漿病毒是一種最安全、有效的血漿病毒滅活的方法。目前，亞甲藍(lán)對血漿進(jìn)行病毒滅活已經(jīng)被國內(nèi)采供血機構(gòu)普遍采用，效果良好無不良反應(yīng)報道。

從本次實驗結(jié)果顯示，實驗組(病毒滅活FFP為原料)制備的冷沉淀，F(xiàn)Ⅷ和Fg含量均有顯著降低，F(xiàn)g的降低程度較FⅧ更大。Fg的損失量達(dá)35%左右，F(xiàn)Ⅷ的損失量在30%左右，與國內(nèi)報道相似[9-12](見表1)。亞甲藍(lán)病毒滅活對于制備冷沉淀的FFP制備前進(jìn)行病毒滅活,會影響其凝血因子中不穩(wěn)定因子FⅧ等的療效。分析原因是病毒滅活濾除亞甲藍(lán)時過濾器可能對凝血因子和蛋白有一定的吸附作用,造成血漿中Fg和FⅧ因子的損失。此外延遲血漿速凍時間也會對影響FⅧ活性，因為凝血因子在體外受溫度及時間的影響較大,環(huán)境溫度越高,時間越長,活性下降越明顯。

病毒滅活技術(shù)除應(yīng)能有效的滅活血液成分中的病毒外,而且應(yīng)對血液產(chǎn)品成分的功能無顯著性影響,從而保證血液產(chǎn)品的臨床療效。雖然目前我國的國標(biāo)中尚未收錄病毒滅活冷沉淀這一制品[13]，但病毒滅活冷沉淀凝血因子作為一種新的血液成分，可降低輸血傳染的風(fēng)險。采用亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活技術(shù)對血漿進(jìn)行病毒滅活處理后制備冷沉淀，會對冷沉淀產(chǎn)品有效成分FⅧ和Fg的含量有顯著影響，從而影響冷沉淀臨床療效，因此，盡管亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活血漿大大降低了輸血風(fēng)險，利用亞甲藍(lán)病毒滅活新鮮冰凍血漿制備滅活冷沉淀產(chǎn)品需進(jìn)一步深入研究，盡快尋找一種安全、有效、實用的適合冷沉淀病毒滅活方法是關(guān)鍵。

[1]Kim IS,Choi YW,Kang Y,et al.Dry-heat treatment process forenhancing viral safety of an antihemophilic factor VIII concentrateprepared from human plasma[J].World JMicrobiol Biotechnol,2008,20(1):81-83.

[2]Pelletier JP,Transue S,Snyder EL,et al.Pathogen inactivation techniques[J].Best Pract Res Clin Haematol,2006,19(1):205-242.

[3]Busch MP, Kleinman SH, Jackson B,et al.Nucleic acid amplification testing of blo od donors for transfusion-transmited infectious diseases: Report of interorganizational task for ceonnucleic acid amplificatio n testing of blood donors[J].Transfusion,2000,40(2):143-159.

[4]Schreiber GB,Busch M P,Kleinman SH,et al.The risk of transfusion-transmitted viral infections.The retroviurs epidemiology donor study[J].EnglJMed,1996,334(26):1685-1690.

[5]何子毅,田兆嵩.新鮮冰凍血漿的病毒滅活方法及其應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2008,21(7):560-563．

[6]馬靜瑤,徐元宏.亞甲藍(lán)光化學(xué)法病毒滅活血漿技術(shù)及應(yīng)用[J].臨床輸血與檢,2012,14(3):282-284.

[7]劉仁強,秦艷紅.亞甲藍(lán)光化學(xué)法對FFP中凝血因子及總蛋白含量的影響[J],中國輸血雜志,2010,23(6):436-438．

[8]曹鎖春,張力超,劉息平,等.病毒滅活冷沉淀的制備及初步評價[J].臨床輸血與檢,2006,8(3):67-68.

[9]李雪英,邱玉霞.病毒滅活冰凍血漿制備冷沉淀的質(zhì)量變化[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)2009,(12):73．

[10]宋雪梅,孫庶麗,王明靜.亞甲藍(lán)病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀的有效成分分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2012,50(36):101-102.

[11]孫庶麗,李杰,于建華.亞甲藍(lán)病毒滅活新鮮冰凍血漿制備冷沉淀的可行性研究[J].中國實用醫(yī)藥2012,7(22):247-248.

[12]邱穎婕,徐忠,徐蓓.病毒滅活冷沉淀制備過程中濾除亞甲藍(lán)對凝血因子的影響[J].臨床輸血與檢驗,2014,16(4):413-415.

[13]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局．GB18469-2012.全血及成分血質(zhì)量要求[S].2012.