吳敏

(臨川區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 臨川344100)

α地中海貧血（α-地貧）主要是由于α-珠蛋白基因缺失（缺失型）或點(diǎn)突變（非缺失型）導(dǎo)致珠蛋白肽鏈合成減少或缺失而引起的一種溶血性貧血，呈常染色體隱性遺傳[1，2]。重型α地貧可致死胎、死產(chǎn)、孕高征及產(chǎn)后大出血等；輕型α地貧常無(wú)臨床癥狀，血常規(guī)檢查MCV輕度下降；靜止型α地貧無(wú)臨床癥狀，MCV可正?；蜉p度下降。我省是地貧的較高發(fā)區(qū)，做好婚前醫(yī)學(xué)檢查，實(shí)行地貧篩查，更是我市婚檢的主要任務(wù)。為此本醫(yī)院從2009年2月開始使用血液分析儀測(cè)定平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白濃度（MCH）及采用血紅蛋白電泳分析對(duì)婚檢人群進(jìn)行地貧篩查，現(xiàn)本文就平均紅細(xì)胞體積回顧性探討其在篩查輕型α地貧中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年1月至2015年5月來(lái)本院進(jìn)行產(chǎn)檢、婚檢或體檢，年齡20~40歲之間的人群進(jìn)行地貧篩查，對(duì)其中具有α地貧高風(fēng)險(xiǎn)的97例進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，回顧分析血液平均紅細(xì)胞體積檢查和血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果。

1.2 方法

1.2.1 血細(xì)胞分析 采用日本Sysmex XT-200i全自動(dòng)五分類血液分析儀測(cè)定，以平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜82fl作為 α-地貧初篩的標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2.2 血紅蛋白電泳測(cè)定 采用法國(guó)Sebia公司生產(chǎn)的Minicap全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀及其配套血紅蛋白電泳試劑盒，以血紅蛋白HbA2＜2.0作為α-地貧初篩的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3全血DNA提取 采用離心柱法，試劑盒采用深圳亞能生物有限公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按操作說(shuō)明進(jìn)行DNA基因組的提取。

1.2.4 α-地貧基因診斷 ⑴缺失型α-地貧基因診斷： 采用 gap-PCR法檢測(cè)-SEA/aa、aa/-a3，7及-a4，2/aa 3種α珠蛋白基因常見缺失型[4]；⑵非缺失型α-地貧基因診斷：采用PCR結(jié)合膜反向點(diǎn)雜交RDB法診斷3種點(diǎn)突變。試劑均采用深圳亞能生物有限公司生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 靈敏度(sensitivity，Se)=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%；特異度(specificity，Sp)=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))×100%；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(+PV)：在診斷試驗(yàn)陽(yáng)性的受試者中，標(biāo)準(zhǔn)診斷有病的病例(真陽(yáng)性)所占的比例；陰性預(yù)測(cè)值(-PV)：在診斷試驗(yàn)為陰性的受試者中，標(biāo)準(zhǔn)診斷證實(shí)無(wú)病的受試者(真陰性)所占的比例。

2 結(jié)果

2.1 平均紅細(xì)胞體積（MCV）在α地中海貧血篩查中的作用 地中海貧血是一種小細(xì)胞低色素性貧血，臨床上血細(xì)胞檢測(cè)常出現(xiàn)RBC升高時(shí)伴有MCV下降。從表1可以看出，MCV降低的75人最終通過(guò)基因分析確診為α地中海貧血的共計(jì)68人，篩查試驗(yàn)陰性的22人基因確診后有22人為陰性，實(shí)驗(yàn)敏感度和實(shí)驗(yàn)特異度分別為100%和75.86%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為90.67%和100%。

2.2 血紅蛋白電泳分析在α地中海貧血篩查中的作用 從表2可見采用血紅蛋白電泳進(jìn)行α地中海貧血篩查，實(shí)驗(yàn)敏感度和實(shí)驗(yàn)特異度分別為86.76%和65.52%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為85.51%和67.86%，這四項(xiàng)指標(biāo)均低于平均紅細(xì)胞體積的檢測(cè)效果。

表1 MCV降低在α地中海貧血篩查中的檢測(cè)效能

表2 血紅蛋白電泳分析在α地中海貧血篩查中的檢測(cè)效能

3 討論

地貧在我國(guó)南方地區(qū)發(fā)病率很高，其中廣西、廣東、江西、四川發(fā)病率分別高達(dá)14.95%、4.11%、2.60%、1.92%。α-地中海貧血是一種單基因遺傳病，臨床表現(xiàn)為遺傳性溶血性貧血，是我國(guó)長(zhǎng)江以南發(fā)病率最高、影響最大的遺傳病之一[5，6]。目前無(wú)根治方法，重型地貧患兒常給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力，盡早發(fā)現(xiàn)和及時(shí)終止妊娠是唯一途徑[7]。隨著流動(dòng)人口的不斷增加，醫(yī)務(wù)人員對(duì)地貧的逐漸認(rèn)識(shí)和重視，地貧的檢出率也逐年上升[8]。但大部分患者屬于輕型地中海貧血，因無(wú)明顯臨床癥狀，所以這些人在婚檢前根本就不知道自己是地中海貧血基因攜帶者，也不知道會(huì)將此病遺傳給下一代。當(dāng)夫妻雙方都為東南亞型缺失(--SEA/aa)地貧，對(duì)子代則不論妊娠次數(shù)和胎兒性別，每次妊娠均有25%的可能性是重型α-地貧患兒和50%的可能性是輕型α-地貧患兒，只有25%的可能是正?；純篬9]，對(duì)人口質(zhì)量構(gòu)成嚴(yán)重威脅。

婚前、孕前產(chǎn)前篩查和診斷是預(yù)防重癥α-地貧患兒出生的有效措施，目前用于明確α地貧診斷的方法主要是gap-PCR結(jié)合其他分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)α地貧基因?？煞肿由飳W(xué)技術(shù)檢測(cè)條件要求較高，方法繁瑣，所需時(shí)間也較長(zhǎng)，價(jià)格昂貴，不適宜廣泛應(yīng)用于各基層醫(yī)院[10]。隨著血細(xì)胞分析儀的普遍應(yīng)用，血液學(xué)常規(guī)檢測(cè)所提供的MCV及MCH等紅細(xì)胞參數(shù)在地貧中的變化已日益受到重視。國(guó)內(nèi)許多基層醫(yī)院已在使用常規(guī)血細(xì)胞分析儀的多項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行地貧篩查。我院也自2009年2月開始使用血液學(xué)常規(guī)檢測(cè)的平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均血紅蛋白濃度（MCH）及血紅蛋白電泳分析對(duì)婚檢人群進(jìn)行地貧篩查。本研究通過(guò)回顧性分析97例α地貧篩查試驗(yàn)陽(yáng)性者的血液平均紅細(xì)胞體積和血紅蛋白電泳結(jié)果發(fā)現(xiàn)α地中海貧血患者M(jìn)CV明顯低于正常人，以平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜82fl作為α-地貧初篩的標(biāo)準(zhǔn)，從表1可以看出，MCV降低的75例最終通過(guò)基因分析確診為α地中海貧血的共計(jì)68例，篩查試驗(yàn)陰性的22例基因確診后有22例為陰性，實(shí)驗(yàn)敏感度和實(shí)驗(yàn)特異度分別為100%和75.86%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為90.67%和100%。而以血紅蛋白電泳分析HbA2＜2.0進(jìn)行α-地貧基因確診，從表2可見實(shí)驗(yàn)敏感度和特異度分別為86.76%和65.52%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為85.51%和67.86%，比較這兩種篩查方法的檢測(cè)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，我們采用紅細(xì)胞平均體積MCV檢測(cè)α地中海貧血具有的靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均較高。此外，Hb電泳對(duì)靜止型α-地貧和標(biāo)準(zhǔn)型--SEA/aa不能進(jìn)行有效診斷，單純--SEA/aa攜帶者主要表現(xiàn)為MCV值降低，但Hb電泳結(jié)果正常，因此僅檢測(cè)Hb電泳易造成漏檢。若采用紅細(xì)胞平均體積MCV聯(lián)合血紅蛋白電泳、紅細(xì)胞脆性等方法雖可提高特異性和敏感性，但需多個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)聯(lián)合分析，增加了患者負(fù)擔(dān)，且需時(shí)較長(zhǎng)。

目前，在MCV、血紅蛋白電泳及紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)法三種地貧的篩查方法中，MCV法相對(duì)敏感性和特異性較高，以上資料顯示，以平均紅細(xì)胞體積（MCV）＜82fl作為α-地貧篩查標(biāo)準(zhǔn)未出現(xiàn)漏篩，即假陰性為零。目前大部分市、縣級(jí)醫(yī)院都配有血液自動(dòng)分析儀，MCV測(cè)定均由儀器完成，人為誤差也減少，比較適合醫(yī)療設(shè)備較缺乏的各級(jí)基層醫(yī)院進(jìn)行地貧篩查。因此建議對(duì)地中海貧血高發(fā)區(qū)人群在進(jìn)行血細(xì)胞分析時(shí)如有MCV＜82fl時(shí)，在排出缺鐵性貧血和寄生蟲感染引起的貧血時(shí)，應(yīng)高度懷疑為地中海貧血。如果夫妻雙方中有一方僅為α地中海貧血攜帶者時(shí)，那么另外一方只需檢測(cè)平均紅細(xì)胞體積（MCV）即可，必要時(shí)進(jìn)行地貧基因檢測(cè)，避免重癥α地中海貧血患兒的出生，提高出生人口素質(zhì)，減少出生缺陷。

[1]Ip HW，So CC.Diagnosis and prevention of thalassemia[J].Crit Rev Clin Lab Sci，2013，50(6)：125-141.

[2]Martin A，Thompson AA.Thalassemias[J].Pediatr Clin North Am，2013，60(6)：1383-1391.

[3]毛錦芳.MCV、MCH聯(lián)合Hb電泳在地中海貧血篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（14）：3649-3650.

[4]張春麗，張寧.1665例2～14歲兒童地中海貧血篩查分析[J].中國(guó)婦幼保健，2012，27(5)：706-707.

[5]劉紅宇，王繁，甘建玲，等.萍鄉(xiāng)地區(qū)孕婦產(chǎn)前地中海貧血篩查及基因診斷[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，32（5）：526-527.

[6]徐湘民.地中海貧血預(yù)防控制操作指南[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2011：11-33.

[7]Liu RR，Wang MY，Lai YR.Analysis of Gg-158(CRT)polymorphism in hemoglobin E/b-thalassemia major in Southern China[J].JHematol Oncol，2010， 3(1)：29-30.

[8]游雪云，劉艷秋，吳敏.毛細(xì)管電泳在β地中海貧血中的應(yīng)用研究[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，32（5）：517-519.

[9]藍(lán)柳燕，王君，林漫燕.822例地中海貧血患者基因檢測(cè)結(jié)果分析[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（3）：212-214.

[10]鄭萍，張琳，張魯芳.巨幼細(xì)胞性貧血骨髓和外周血檢查38例臨床分析[J].實(shí)用診斷與治療雜志，2006，20(1)：66-67.