范紅平，忽勝和

(大理學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南 大理 671000)

全血細(xì)胞分析是臨床上使用廣泛的常規(guī)檢驗(yàn)，因此準(zhǔn)確的血細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果為臨床提供了重要的依據(jù)。標(biāo)本的狀態(tài)直接影響到測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。如何提升實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量成為廣大檢驗(yàn)工作者面臨的日益突出的問(wèn)題[1]。標(biāo)本的正確性是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。標(biāo)本的狀態(tài)除了護(hù)士采血的正確操作，還與標(biāo)本自身的一些異常情況相關(guān)。這些異常情況就需要檢驗(yàn)人員來(lái)發(fā)現(xiàn)。血細(xì)胞分析檢測(cè)中紅細(xì)胞冷凝集是影響血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確的因素之一，在檢驗(yàn)工作中時(shí)有發(fā)生。因此，我們篩選了一部分紅細(xì)胞冷凝集標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，再將這些標(biāo)本37°C水浴后重新檢測(cè)，將兩次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較分析，了解紅細(xì)胞冷凝集對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 收集我院2014年9月至2015年2月有紅細(xì)胞冷凝集的血細(xì)胞分析標(biāo)本46例，男29例，女17例，年齡8~75歲。標(biāo)本紅細(xì)胞冷凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)：平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）超過(guò)參考上限20g/L[2]，排除標(biāo)本脂血，溶血，及球形紅細(xì)胞等情況，并且肉眼觀察有紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象。

1.2 標(biāo)本采集 用EDTA-K2抗凝采血管采靜脈血2.0ml混勻。采血順暢，壓脈帶壓迫時(shí)間<1min。

1.3 儀器與試劑 日本Sysmex公司生產(chǎn)的XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀。質(zhì)控品及試劑均為Sysmex配套原裝試劑。

1.4 檢測(cè)方法 每日先進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，在控后再進(jìn)行標(biāo)本的檢測(cè)，按紅細(xì)胞冷凝集判斷標(biāo)準(zhǔn)篩選出冷凝集的標(biāo)本。將標(biāo)本置于37°C水浴箱30min，取出觀察試管內(nèi)抗凝血，未發(fā)現(xiàn)管壁內(nèi)有凝集顆粒，混勻后立即上機(jī)再次測(cè)定[3]，如管壁仍然有凝集顆粒則延長(zhǎng)水浴時(shí)間至50min，再進(jìn)行檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)處理 結(jié)果用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS12.0處理，采用配對(duì)t檢驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

冷凝集標(biāo)本在水浴前后檢測(cè)結(jié)果WBC，RBC，Hct，MCV，MCH，MCHC 六個(gè)項(xiàng)目的結(jié)果水浴前后比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而Hb和PLT水浴前后結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。細(xì)胞冷凝集標(biāo)本在水浴前后的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 紅細(xì)胞冷凝集標(biāo)本水浴前后結(jié)果比較

3 討論

檢驗(yàn)質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)室永恒的主題，為臨床提供準(zhǔn)確可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是檢驗(yàn)科工作的目標(biāo)和責(zé)任。檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確，包括了實(shí)驗(yàn)前標(biāo)本準(zhǔn)確的采集，檢測(cè)儀器的狀態(tài)，試劑的質(zhì)量，檢驗(yàn)結(jié)果的審核分析等方面。其中檢驗(yàn)結(jié)果的審核分析是實(shí)驗(yàn)室工作中重要的環(huán)節(jié)。通過(guò)結(jié)果的審核分析可以發(fā)現(xiàn)標(biāo)本的異常情況，及時(shí)予以糾正則可以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。紅細(xì)胞冷凝集是導(dǎo)致血細(xì)胞計(jì)數(shù)錯(cuò)誤結(jié)果的因素之一，在日常檢驗(yàn)工作中時(shí)有發(fā)生。紅細(xì)胞冷凝集是一種現(xiàn)象，當(dāng)血液離體后，在低于體溫環(huán)境的試管內(nèi)發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，當(dāng)恢復(fù)至體溫條件時(shí)（37°C），冷凝集現(xiàn)象可解除。血液標(biāo)本出現(xiàn)紅細(xì)胞冷凝集現(xiàn)象明顯影響到全血細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果。從本次的數(shù)據(jù)結(jié)果顯示W(wǎng)BC，RBC，Hct水浴后結(jié)果升高，MCV，MCH，MCHC結(jié)果在水浴后檢測(cè)結(jié)果

降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Hb，PLT的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。紅細(xì)胞凝集使得紅細(xì)胞凝集成團(tuán)，體積增大，這部分紅細(xì)胞未能計(jì)數(shù)在紅細(xì)胞內(nèi)，導(dǎo)致紅細(xì)胞計(jì)數(shù)假性降低，多個(gè)紅細(xì)胞聚集后形成的紅細(xì)胞團(tuán)在通過(guò)計(jì)數(shù)孔時(shí)引起脈沖增大，引起MCV假性升高，凝集的RBC使MCV增高，同時(shí)RBC計(jì)數(shù)減低，但二者以RBC計(jì)數(shù)減少為主，因此Hct隨之也降低，并造成了由 RBC，Hb，HCT 計(jì)算得到的 MCH，MCHC結(jié)果異常升高。冷凝集素除對(duì)紅細(xì)胞有作用外，也可凝集淋巴細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和血小板，使WBC，PLT的結(jié)果也假性減低[4]，當(dāng)紅細(xì)胞凝集體中包含白細(xì)胞時(shí)，其體積擴(kuò)大，其體積超出血細(xì)胞分析儀在白細(xì)胞測(cè)定的閾值范圍，超出白細(xì)胞散點(diǎn)圖分布區(qū)域，從而將其排除在外，造成漏檢而導(dǎo)致數(shù)量下降[5]。本次數(shù)據(jù)顯示PLT在水浴前后結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其原因?yàn)槔淠匾鸬募t細(xì)胞凝集有別于啟動(dòng)正常凝血途徑而發(fā)生的血液凝固[6]，紅細(xì)胞冷凝集是一個(gè)可逆的過(guò)程，不消耗凝血因子及血小板。RBC與PLT雖然在相同的計(jì)數(shù)池內(nèi)計(jì)數(shù)，二者計(jì)數(shù)體積相差較大，檢測(cè)體積范圍差別較大，因此凝集的紅細(xì)胞對(duì)于PLT的計(jì)數(shù)無(wú)明顯干擾，XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析檢測(cè)PLT采用的是鞘流計(jì)數(shù)方法，鞘流技術(shù)一定程度上降低了細(xì)胞凝集的干擾，避免了異常血細(xì)胞脈沖的發(fā)生，降低了細(xì)胞凝集的干擾，因此水浴前后PLT計(jì)數(shù)結(jié)果無(wú)顯著差異性。Hb檢測(cè)是通過(guò)加入SLS溶血素溶解紅細(xì)胞，采用比濁法測(cè)定，紅細(xì)胞凝集對(duì)該方法無(wú)干擾，因此水浴前后結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，血液標(biāo)本出現(xiàn)紅細(xì)胞冷凝集現(xiàn)象可以明顯影響全血細(xì)胞分析的結(jié)果，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)本的真實(shí)結(jié)果存在較大的差異。冷凝集素抗體可為多克隆或單克隆自身抗體，絕大多數(shù)單克隆冷凝集抗體發(fā)現(xiàn)于淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞瘤患者，而多克隆冷凝集抗體則是由于感染引起[7]。冷凝集素對(duì)人紅細(xì)胞I類抗原有特異性，30°C以下可使紅細(xì)胞凝集，溫度提高后凝集消失，健康人的血清中冷凝集素效價(jià)不高，一般在16°C以下可發(fā)生凝集，30°C以上不發(fā)生凝集[8]，所以實(shí)驗(yàn)室溫度是避免血液標(biāo)本冷凝集的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。為了防止可能出現(xiàn)的RBC冷凝集現(xiàn)象對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果的影響，必需使實(shí)驗(yàn)室保持在合適的溫度（18~22°C），低于 15℃或高于30°C均對(duì)血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果有影響[9]。除了保證實(shí)驗(yàn)室溫度，檢測(cè)人員應(yīng)該仔細(xì)審閱檢驗(yàn)結(jié)果（如Hb與RBC的不符合）和直方圖的改變[10]。實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)該建立復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦的復(fù)檢規(guī)則第13條規(guī)定，平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)超過(guò)正常上限20g/L時(shí)，要求檢查標(biāo)本是否有脂血，溶血，凝集及球形紅細(xì)胞。根據(jù)這條規(guī)則可發(fā)現(xiàn)標(biāo)本冷凝集現(xiàn)象或其他的一些異常標(biāo)本。因此保證實(shí)驗(yàn)室在適宜的溫度可一定程度避免紅細(xì)胞冷凝集，實(shí)驗(yàn)室制定恰當(dāng)?shù)膹?fù)檢規(guī)則對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果審核分析，則可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞冷凝集標(biāo)本，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行相應(yīng)處理后重新測(cè)定，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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