林俊填 ，余晉林 ，伍偉健 ，陳展?jié)?，龔道元

(1、佛山市中心血站，廣東 佛山 528000；2、佛山市第一人民醫(yī)院；3、佛山科學技術(shù)學院醫(yī)學院)

丙型肝炎是由HCV病毒感染所致，據(jù)WHO統(tǒng)計，全球感染率高達3%，我國一般人群HCV-Ab陽性率為3.2%[1]。丙型肝炎癥狀較輕，發(fā)展慢，不易引起重視，但易可發(fā)展為慢性肝炎、肝硬化和肝癌，已成為嚴重的公共衛(wèi)生安全問題。目前尚無有效疫苗預(yù)防，臨床上也尚無特效的藥物和治療措施[2]。HCV能通過輸血傳播，因此，對獻血者嚴格篩查和臨床上早期檢出HCV感染是防止丙型肝炎傳播的有效措施。目前，絕大多數(shù)血站是通過檢測HCV-Ab來對血液進行篩查，醫(yī)院尤其中小醫(yī)院也主要通過檢測HCV-Ab來進行診斷，但對早期感染者HCV-Ab檢測容易漏診[3]。本文對門診和住院患者血液標本進行HCV-cAg、HCV-Ab及HCV-RNA聯(lián)合檢測，探討其對HCV感染的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

1.1.1 丙型肝炎患者 選取佛山市第一人民醫(yī)院2013年9月至2014年9月間門診及住院患者121例，所有患者均通過HCV-RNA檢測確診，并排除其他病毒型肝炎病毒感染，符合中華醫(yī)學會肝病學會、中華醫(yī)學會傳染病學與寄生蟲學會制定的《丙型肝炎防治指南》確診標準[4]。

1.1.2 對照組 隨機選擇2014年5-7月HCV-RNA檢測陰性的120例體檢者作為對照組，且在半年后隨訪，HCV-RNA檢測均為陰性。

1.2主要儀器與試劑

1.2.1 儀器 全自動酶標分析儀型號為MLFAME24/20（瑞士哈美頓公司）；PCR熒光定量分析儀型號為ABI-7500（美國ABI公司）。

1.2.2 試劑 ⑴HCV-Ab檢測試劑：采用上?？迫A公司的ELISA檢測試劑盒；⑵HCV-cAg檢測試劑：采用山東萊博生物科技有限公司生產(chǎn)試劑盒；⑶HCV-RNA檢測試劑：中山大學達安基因股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標本采集及處理 靜脈采血、離心分離血清，-70℃冰凍保存。

1.3.2 HCV-RNA檢測 采用實時熒光定量法檢測，所有操作嚴格按說明書進行。以HCV-RNA為金標準，確診患者121例血清用于后續(xù)實驗。

1.3.3 HCV-cAg檢測 設(shè)空白對照1孔，陰性、陽性對照各2孔?？瞻讓φ占尤?00μl樣本稀釋液，其他各孔加入100μl樣本稀釋液，陰性、陽性對照及待測標本 100μl，37℃孵育 90min，洗板 6 次，加酶結(jié)合物 200μl，37℃孵育 30min。再洗板 6次，加顯色劑200μl。 37℃避光 10min，加終止液 50μl終止顯色，10min內(nèi)450nm(參考波長630nm)讀板，Cut off=NCx（陰性均值）+0.06。

1.3.4 HCV-Ab檢測 ELISA法，嚴格按試劑說明書操作。

1.3.5 統(tǒng)計學分析 應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，配對資料采用χ2檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HCV標志物檢測結(jié)果 對121例HCV陽性患者和對照組120例體檢者分別進行HCV-Ab、HCV-cAg檢測，結(jié)果如表1、表2。

2.2 HCV-Ab和HCV-cAg的相關(guān)檢測參數(shù)計算和兩者間的檢測一致性檢驗 經(jīng)計算HCV-Ab和HCV-cAg的檢測特異度分別為99.17%和100%，均具有良好的檢測特異度；HCV-Ab的檢測靈敏度為90.91%，而HCV-cAg的靈敏度為70.25%，但聯(lián)合檢測可使靈敏度得以提高 （具體見表3）；HCV-Ab和HCV-cAg的檢測敏感度存在顯著性差異（表4），而特異性兩者間無顯著性差異。另外，HCV-Ab和HCV-cAg兩指標間檢驗結(jié)果一致性經(jīng)統(tǒng)計分析，其Kappa系數(shù)為-0.013，說明兩者之間的檢測結(jié)果無一致性。

表1 患者與對照組HCV標志物檢查結(jié)果

表2 確診患者HCV標志物檢查結(jié)果

表3 HCV-Ab、HCV-cAg單獨和聯(lián)合檢測對HCV感染的診斷價值

表4 HCV-Ab與HCV-c Ag的敏感度與特異度比較的統(tǒng)計學結(jié)果

3 討論

RNA是HCV感染的直接證據(jù)，RNA在HCV感染后的16～15d即可出現(xiàn)，RNA檢測可使窗口期大大縮短到13d，HCV-RNA檢測具有早期、敏感和特異等優(yōu)點，但HCV感染后病毒血癥有持續(xù)、一過和間歇3種模式[5]，此時HCV-RNA檢測結(jié)果為陰性，一些晚期肝病患者的表達載量太少也無法檢出[6，7]；如患者曾用干擾素治療，干擾抑制HCV-RNA復(fù)制，HCV-RNA檢測結(jié)果陰性也不排除HCV感染的可能[8-10]，因此，HCV-RNA檢測也存在一定的漏診率[11，12]。還有，熒光定量PCR法檢測HCV-RNA，影響因素較多，如RNA酶污染或RNA降解等[13]，在樣品采集、儲存和檢測方面都有嚴格要求，技術(shù)上操作要求高，實驗條件嚴格，成本高、設(shè)備貴，所以，難以在常規(guī)實驗室或基層醫(yī)院推廣、普及和應(yīng)用[14]。

目前，中心血站與中小醫(yī)院主要通過檢測HCV-Ab來對血液進行篩查[15-17]。HCV-Ab是HCV感染的間接依據(jù)，第3代試劑檢測HCV-Ab窗口期為66d，窗口期長，故HCV-Ab檢測時間需在感染大約70d后[18]，容易漏診早期感染患者，此外，如免疫缺陷患者、血液透析、免疫抑制劑以及其他嚴重疾病導致體內(nèi)免疫低下患者，均可致體內(nèi)HCV-Ab無法檢出，導致假陰性。還有，不同廠家包被的HCV抗原組成、來源和用量等不同，導致各廠家試劑靈敏度和特異度存在差異，導致檢查結(jié)果不一致，結(jié)果可能出現(xiàn)假陽性和假陰性，單憑HCV-Ab檢測容易漏檢。同時，HCV-Ab陽性也無法分清是既往感染還是新近感染，無法說明體內(nèi)HCV病毒復(fù)制的情況，給疾病的診斷和病情判斷帶來一定的困難。因此，HCV-Ab單獨作為診斷指標還有較大的局限性。

HCV-cAg也是HCV早期感染或持續(xù)性感染的指標，一般情況下，患者HCV-cAg陽性僅比HCV-RNA在檢出時間上晚1~2d，且檢測方法易掌握，操作簡便，不需要特殊設(shè)備，可常規(guī)檢測。由于HCV-cAg檢測可明顯縮短窗口期，可為HCV早期診斷提供依據(jù)。在血站對獻血者進行HCV-cAg檢測，可增加HCV的陽性檢出率和減少HCV的傳播風險。

本文的研究結(jié)果顯示，單獨進行HCV-Ab和HCV-cAg檢測時，121例 HCV-RNA確診患者HCV-Ab和HCV-cAg兩指標的檢出陽性標本數(shù)分別為110例和85例，檢測靈敏性分別為90.91%和70.25%，HCV-cAg的靈敏性要低于HCV-Ab，兩者間存在顯著性差異；兩指標的檢測特異度分別為99.17%和100%，兩者的特異度相近，經(jīng)統(tǒng)計學分析兩者間無顯著性統(tǒng)計學差異。HCV感染機體產(chǎn)生HCV-Ab后，發(fā)生相對應(yīng)的抗原抗體結(jié)合，可使HCV-cAg檢出率降低，本文研究結(jié)果也說明HCV-cAg的檢出敏感度要低一些。因此，臨床上不可將HCV-cAg檢測完全取代HCV-Ab的檢測，將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標結(jié)合起來檢測，對臨床上提高HCV感染的篩查和診斷具有重要的價值。

本文的研究結(jié)果顯示HCV-Ab和HCV-cAg兩檢驗結(jié)果之間存在一定的交叉，說明兩種實驗方法之間無法相互替代。兩者聯(lián)合檢測時，敏感度和陰性預(yù)測值等指標較任一單項指標都有了一定程度的提升，而特異度無顯著性改變。

綜上所述，我們認為，對于患者進行HCV的篩查，最好是將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標結(jié)合起來檢測，這對臨床上診斷和預(yù)防HCV感染具有重要的價值。

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