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        IL-17與IL-4基因遺傳多態(tài)性與兒童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的關(guān)系

        2015-05-10 02:28:12關(guān)宇鳳鄭貴浪
        中國實用醫(yī)藥 2015年15期
        關(guān)鍵詞:易感性介素多態(tài)性

        關(guān)宇鳳 鄭貴浪

        ·臨床醫(yī)學·

        IL-17與IL-4基因遺傳多態(tài)性與兒童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的關(guān)系

        關(guān)宇鳳 鄭貴浪

        目的 探討白細胞介素-17(L-17)與白細胞介素-4(IL-4)基因遺傳多態(tài)性與兒童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的關(guān)系。方法 通過采用PCR-RFLP技術(shù)檢測分析60例哮喘兒童(哮喘組)和72例體檢正常兒童(對照組)的IL-17以及IL-4基因的多態(tài)性, 以及采用免疫組化ELISA方法檢測血清中IL-17、IL-4以及總IgE的含量, 對兩組患兒的檢測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計比較。結(jié)果 在單個基因位點多態(tài)性分析時, 發(fā)現(xiàn)兩組兒童的IL-17基因rs763780(TT, TC, cc)位點以及IL-4基因-33C/T位點的基因型和等位基因頻率分布, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);哮喘組患兒血清中IL-17含量為(3576.00±271.38) ng/L, IL-4含量為(4923.00±328.70)ng/L, 總IgE含量為(159.32±19.49)μg/mL, 對照組IL-17含量為(1045.31±73.35)ng/L;IL-4含量為(897.62±51.39)ng/L;總IgE含量為(42.16±7.45)μg/mL, 哮喘組3組數(shù)據(jù)均明顯高于對照組, 差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 IL-4基因-33C/T基因型可能是兒童容易發(fā)生哮喘的基因型, 而且IL-17F基因的突變可能在哮喘的發(fā)生發(fā)展中也起著重要的作用, -33位點多態(tài)性與IL-4表達水平相關(guān)。

        白細胞介素-4;白細胞介素-17;基因多態(tài)性;哮喘

        支氣管哮喘是由多種細胞和細胞組分參與的, 一種以黏膜高分泌和血清高IgE為特征的氣道慢性疾?。?], 是兒童期最常見的慢性呼吸道疾病, 嚴重影響兒童健康[2]。其發(fā)病機制迄今尚未完全闡明, 大部分學者以Th1/Th2反應失衡的免疫學發(fā)病機制為主。Th0細胞在正常機體中往往會按特殊比例分化為Th1和Th2細胞, 然而在哮喘患者體內(nèi)Th1類細胞的分泌會減少, 而Th2細胞分泌增多, 從而誘導氣道高反應及炎癥的發(fā)生。IL-4主要由活化T細胞產(chǎn)生, 有許多多態(tài)性靶點, 其中IL-4基因啟動子區(qū)-33bp處為常見的多態(tài)性位點,與哮喘的易感性和嚴重程度有一定的相關(guān)性。IL-17是主要由T淋巴細胞等分泌的前炎性細胞因子, 它參與了機體多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展, 并且能夠積極促進多種炎性因子的釋放, 尤其與肺部感染、哮喘等疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。本文選擇IL-4和IL-17的兩個多態(tài)性位點進行分析, 研究基因的多態(tài)性與哮喘的易感性之間的關(guān)系, 以及對IgE水平的影響, 以解釋哮喘的發(fā)病機理?,F(xiàn)報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料 選取2013年2月~2014年10月湛江中心人民醫(yī)院和廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院收治的60例哮喘患兒作為哮喘組, 年齡3~10歲, 其中男34例, 女26例, 選擇同期72例體檢正常的兒童作為對照組, 年齡4~12歲, 其中男41例,女31例, 排除有哮喘病史、典型過敏性病史患者。兩組兒童在性別構(gòu)成、年齡分布等一般資料方面組間比較, 差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05), 具有可比性。見表1。

        表1 兩組一般情況比較

        表1 兩組一般情況比較

        注:兩組比較, P>0.05

        組別例數(shù)性別年齡(歲)男女哮喘組60 34 26 6.42±3.41對照組72 41 31 7.14±4.35

        表2 IL-4與IL-17基因內(nèi)切酶PFLP與哮喘的關(guān)系(%)

        表3 兩組外周血IL-17、IL-4和IgE水平的比較( x-±s)

        1.2 方法

        1.2.1 DNA樣品提取 采用EDTA抗凝管采集兩組兒童的外周靜脈血2 m l, 并按說明書使用DNA提取試劑盒提取基因組DNA, 通過電泳檢測其是否完整, 并采用紫外分光光度儀檢測其濃度以及純度后, 置于-70℃保存?zhèn)溆?。剩余全血離心分離血漿后分裝冷凍, 用于檢測外周血IL-4、IL-17和IgE含量。

        1.2.1 IL-4與IL-17基因型分析 IL-4基因型引物序列為IL-4基因啟動子區(qū)-33位點引物Ⅰ:5‘-TGAA GATATCTTT GTCAGCATT-3’,引物Ⅱ:5‘-AG ACCCA TTAATAGGTGTCG-3’。IL-17基因型引物序列為IL-17/rs763780位點引物Ⅰ:5‘- CATTTCTA CAGCTTCTTCAGCTG-3’, 引物Ⅱ:5’-AGAAGGTGCTGG TGACTGTT-3’。并行PCR擴增, 取PCR產(chǎn)物5 μl, 加限制性內(nèi)切酶, 37℃消化8 h, 對PCR產(chǎn)物和酶切產(chǎn)物的檢測應用凝膠電泳的方法, 進而參照DNA marker確定其基因型。

        1.2.3 外周血IL-4、IL-17和總IgE水平檢測 采用ELISA技術(shù)測定外周血IL-4、IL-17和總IgE含量。

        1.3 統(tǒng)計學方法 用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差( x-±s)表示, 實施t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示, 實施χ2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié)果

        2.1 IL-4與IL-17基因內(nèi)切酶PFLP與哮喘的關(guān)系 IL-17基因rs763780位點以及IL-4基因-33C/T位點的基因型分布在哮喘組和對照組內(nèi)分布, 差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

        2.2 兩組外周血IL-17、IL-4和IgE水平的比較 外周血IL-17、IL-4和IgE水平3組數(shù)據(jù)中哮喘組均明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

        3 討論

        哮喘是一種臨床常見的疾病, 然而其病因十分復雜。哮喘的發(fā)生往往是由患者本身的遺傳因素以及外界的環(huán)境因素引起的, 其在遺傳上具有明顯的易感性[3]。在患兒哮喘的發(fā)病過程中, 遺傳因素往往起著重要的作用。為了探查出哮喘人群的易感基因, 更好的幫助臨床醫(yī)師了解哮喘的病理發(fā)生,提高患者的治療效率, 越來越多的學者開始注重關(guān)于哮喘病遺傳病基因的研究。Th1/Th2失衡理論被廣泛接受, 兩種細胞因子之間既相互拮抗又相互促進, 行使各自不同的生理功能。然而在哮喘發(fā)生時, 機體自身的免疫反應發(fā)生, 導致Th0細胞主要向Th2分化, 其功能發(fā)生相對的亢進, 導致Th1的功能則相對受到抑制, 從而使得這種動態(tài)的平衡狀態(tài)遭到破壞。IL-4是誘導Th2細胞分化的關(guān)鍵因子, 國內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)IL-4位點與哮喘易感性以及血清IgE升高有著密切的關(guān)系[4]。

        然而由于Th1/Th2失衡理論并不能夠完全用來解釋哮喘的某些實驗以及臨床現(xiàn)象。隨著醫(yī)學技術(shù)以相關(guān)檢測手段的不斷發(fā)展, 越來越多的研究顯示IL-17以及IL-4在哮喘的發(fā)生發(fā)展中能夠起到一定的作用。本研究中IL-17在哮喘患兒外周血中表達增高, 說明IL-l7同樣也參與了哮喘的發(fā)病過程, 從而可以彌補Th1/Th2失衡這個機制的不足。 哮喘的主要特點是氣道高反應性和氣道慢性炎癥, 而且細胞因子在氣道炎癥的形成方面有著十分重要的作用。血清中IgE的含量水平與哮喘的發(fā)病和氣道高反應高度相關(guān)[5]。以血清中總IgE或者特異性IgE升高為特點。許多細胞因子介導了哮喘發(fā)病的生物學反應, 其中IL-4和IL-17就是最強的調(diào)節(jié)因子,在哮喘的發(fā)生中扮演者重要角色。哮喘患者的氣道黏膜中IL-4mRNA和蛋白水平均增高, IL-4促進IgE的合成。亦有研究發(fā)現(xiàn), 哮喘患者血清IL-4水平高于正常對照組[6]。趙凱姝等[7]的研究證實支氣管哮喘發(fā)生與IL-17呈正相關(guān), 而與IL-23以及IFN-γ無明顯關(guān)系。

        我國研究哮喘相關(guān)基因多態(tài)性起步較晚, 但是隨著分子生物技術(shù)以及遺傳技術(shù)的逐步發(fā)展, 對其的研究也漸漸深入,進一步闡明哮喘的發(fā)病機制。IL-4基因以及IL-17基因與兒童哮喘的發(fā)生有著密切關(guān)系, 明確哮喘易感個體, 為哮喘的臨床治療提供新的思路。

        [1] 王阿芳, 錢粉紅, 周林福, 等.IL-4、IL-13單核苷酸多態(tài)性與中國東南方漢族人群哮喘關(guān)系的研究.中華哮喘雜志電子版, 2012, 6(6):1561-1565.

        [2] 鄭莎莎, 朱曉萍, 李波, 等.貴陽地區(qū)哮喘患兒IL-4Rα基因多態(tài)性及其與血清總IgE水平的相關(guān)性.中華醫(yī)學雜志, 2014, 94(36):2822-2827.

        [3] 黃花榮, 吳敬芳.IFN-γ與IL-4基因多態(tài)性與兒童哮喘易感性及外周血IFN-γ、IL-4和IgE的關(guān)系.中國病理生理雜志, 2010, 26(9):1769-1775.

        [4] 王修海, 趙煒, 劉世國, 等.白細胞介素4和13基因多態(tài)性對支氣管哮喘患者易感性及血清總IgE水平的影響.中華結(jié)核和呼吸雜志, 2009, 32(3):161-164.

        [5] 郭彤, 趙宏霞, 楊勇, 等.白細胞介素-23基因多態(tài)性與兒童哮喘易感性的關(guān)系.廣東醫(yī)學, 2012, 33(13):1975-1977.

        [6] 黃永富, 余世慶, 杭杲, 等.哮喘患者血清中IL-4, IL-12, IL-13, IFN-γ, IgE水平的測定及其臨床意義.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志, 2009, 24(5):120-123.

        [7] 趙凱姝, 張云峰, 成煥吉, 等.白細胞介素-23、白細胞介素-17在支氣管哮喘小鼠發(fā)病中的作用.實用兒科臨床雜志, 2010, 25(9):639-642.

        10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.15.035

        2015-01-08]

        524023 湛江中心人民醫(yī)院新生兒科(關(guān)宇鳳);廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院兒科(鄭貴浪)

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