黨曉鵬，寧明正

（陜西金冠牧業(yè)有限公司，西安 710018；陜西省蒲城縣龍陽畜牧獸醫(yī)站，陜西 蒲城 715507）

豬偽狂犬病(Pseudorabies，PR)是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種急性傳染病[1]，我國將其列為二類傳染病。近年來，豬偽狂犬病在陜西省流行范圍較廣，特別是農(nóng)戶散養(yǎng)豬場和小規(guī)模種豬場，野毒感染率較高。該病對種豬的危害主要是侵害繁殖系統(tǒng)，導(dǎo)致豬群繁殖力下降，產(chǎn)死胎、木乃伊數(shù)量增加，新生仔豬成活率下降[2]。

農(nóng)戶小型種豬場（基礎(chǔ)母豬100頭左右）在豬病凈化方面難度較大，豬場衛(wèi)生隔離消毒防疫等設(shè)施較差，種豬來源復(fù)雜多樣，豬瘟（HC）、豬2型圓環(huán)病毒（PCV-2）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬傳染性胸膜肺炎（APP）、副豬嗜血桿菌?。℉PS）等混合感染普遍，感染豬及帶毒豬淘汰措施難以執(zhí)行等。但針對豬偽狂犬病的凈化條件目前已基本具備，一是有商品化基因缺失疫苗免疫接種，二是有可區(qū)分疫苗免疫抗體與野毒感染抗體的PRV?gE抗體ELISA試劑盒和檢測PRV病原的實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒，在此基礎(chǔ)上結(jié)合消毒隔離等生物安全措施，逐步淘汰陽性感染豬，引入陰性種豬，在2～3年的時間里完全可以將豬偽狂犬病徹底凈化。國內(nèi)許多大型規(guī)模化種豬場已經(jīng)按照此方案對偽狂犬病成功進(jìn)行凈化，消滅了偽狂犬病野毒感染[3]。本試驗(yàn)用偽狂犬病病毒?gE抗體ELISA檢測試劑盒，對陜西省蒲城縣一農(nóng)戶小型種豬場的偽狂犬病野毒感染情況進(jìn)行連續(xù)抽樣監(jiān)測，同時應(yīng)用實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒，對表現(xiàn)有臨床癥狀的乳仔豬進(jìn)行實(shí)時熒光PRV病原檢測。然后根據(jù)抗體和病原檢測結(jié)果制定切實(shí)可行的凈化方案。

通過科學(xué)嚴(yán)格的疫苗接種，連續(xù)對豬群進(jìn)行5次抽樣檢測，包括PRV?gE抗體和疑似病仔豬病原檢測，嚴(yán)格隔離飼養(yǎng)抗體陽性豬，并實(shí)時逐步淘汰處理。該豬場的偽狂犬病野毒感染率由最初的45.45%逐步降低至1.72%，發(fā)病仔豬偽狂犬病野毒陽性率由48.28%降至0%，基本達(dá)到凈化豬群偽狂犬病的目標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

陜西蒲城某種豬場。存欄種公豬7頭，能繁母豬135頭。年出售商品仔豬近2?000頭。將豬群分組：哺乳仔豬、保育豬、中大豬、后備母豬、空懷母豬、妊娠母豬及種公豬。種公豬逐只采樣，其他每組分別抽樣20%。

1.2 豬群接種疫苗

豬場偽狂犬病免疫接種采用基因缺失弱毒疫苗。

1.3 檢測試劑盒

偽狂犬病gE缺失ELISA診斷試劑盒，購自武漢科前公司；豬偽狂犬病病毒(gE基因)實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒，購自北京世紀(jì)元亨公司。

1.4 血樣采集時間

豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測在2014年3月、6月、9月、12月和2015年3月各采集血樣1次，按照豬偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒說明書要求檢測PRV野毒感染抗體效價(jià)。

檢測結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上測各孔OD630?nm值。試驗(yàn)成立條件是陰性對照孔平均OD630?nm值與陽性對照孔平均OD630?nm值之差≥0.4.

S=樣品孔OD630?nm值，N=陰性對照孔平均OD630?nm值。

若S/N比值≤0.6,樣品判為PRV抗體陽性。

若S/N比值≤0.7但＞0.6,該樣品必須重測，如果結(jié)果相同，則過一段時間后重新采集血樣進(jìn)行檢測。

若S/N比值＞0.7,樣品判為PRV抗體陰性。

1.5 豬偽狂犬病病毒實(shí)時熒光PCR檢測

對有臨床癥狀的仔豬采集淋巴結(jié)組織，處理后進(jìn)行病原檢測，操作方法按照試劑盒生產(chǎn)廠家說明書操作。

檢測結(jié)果判定：被檢組織樣品Ct?值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線為豬偽狂犬病病毒野毒陽性，被檢樣品30＜Ct＜37并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，需要重新取樣提取DNA，擴(kuò)增后進(jìn)行結(jié)果判定，如仍為可疑，則判定為陽性；被檢樣品Ct值＞37時，判定為陰性；對于某些未呈現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線，但本底值較高的樣品，判為陰性。

1.6 免疫程序

2014年3月以來，選用豬偽狂犬病基因缺失弱毒疫苗進(jìn)行全群免疫。新生仔豬3日齡滴鼻免疫，8周齡時再肌注加強(qiáng)免疫1次；種公豬及后備母豬每3個月免疫1次。

1.7 飼養(yǎng)管理措施

每天及時打掃圈舍衛(wèi)生，清理生產(chǎn)垃圾，保持舍內(nèi)外干凈整潔，及時清理豬糞，盡量做到豬、糞分離，保持豬體、圈舍干凈。豬舍空圈后要清洗、消毒，種豬上床或調(diào)圈，要把空圈先沖洗后用廣譜消毒藥消毒，產(chǎn)房每斷奶一批、育成每育肥一批、育肥每出欄一批，先清掃，再用火堿噴霧消毒。注意通風(fēng)換氣，冬季做到保溫，舍內(nèi)空氣良好。夏季通風(fēng)防暑降溫，排出有害氣體。使用過的藥盒、藥瓶、疫苗瓶、消毒劑瓶、一次性輸精瓶等應(yīng)及時焚燒或銷毀處理。料袋能利用的返回飼料廠，不能利用的焚燒掉。四季滅鼠，夏季滅蚊蠅。

2 結(jié)果

2.1 PRV?gE抗體檢測結(jié)果（見表1）

豬群gE野毒抗體的陽性率由首次檢測的45.45%降至第5次檢測的1.72%，說明豬群偽狂犬病野毒抗體逐步降低，凈化初步成功。最后1頭陽性帶毒豬建議豬場盡快淘汰，半年后應(yīng)再復(fù)查1次。

2.2 偽狂犬病野野毒實(shí)時熒光PCR檢測結(jié)果（見表2）

表 1?PRV?gE 野毒抗體檢測結(jié)果

表2 偽狂犬病野野毒實(shí)時熒光PCR檢測結(jié)果

在凈化之初，對有臨床癥狀的仔豬進(jìn)行偽狂犬病野野毒實(shí)時熒光PCR檢測，結(jié)果表明豬場新生仔豬及保育豬群呈現(xiàn)較為嚴(yán)重的感染狀態(tài)，陽性率高達(dá)48.28%。采取凈化方案后，豬群繁殖性能明顯改善，產(chǎn)仔數(shù)、健仔數(shù)、新生仔豬成活率等指標(biāo)明顯提高。3個月后進(jìn)行第2次檢測時，新生仔豬群偽狂犬病野毒陽性率已降至27.78%，效果明顯；到2015年3月，豬場新生仔豬抽樣結(jié)果顯示偽狂犬病野野毒實(shí)時熒光PCR檢測陽性率已經(jīng)為0%，且再無新的偽狂犬病仔豬出現(xiàn)。

3 討論

我國預(yù)防豬偽狂犬病主要采取免疫接種的方式，首選疫苗為豬偽狂犬病gE基因缺失疫苗。豬偽狂犬病基因缺失疫苗免疫原性好、抗體產(chǎn)生快，保護(hù)力強(qiáng)，可把疫苗免疫豬與野毒感染豬區(qū)分開。偽狂犬病gE抗體ELISA檢測試劑盒能區(qū)分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，通過檢測結(jié)果可判斷豬只是否感染偽狂犬病野毒。豬偽狂犬病病毒(gE基因)實(shí)時熒光PCR檢測試劑盒可對病料進(jìn)行野外強(qiáng)毒病原檢測。通過5次連續(xù)監(jiān)測結(jié)果表明，農(nóng)戶小型種豬場在實(shí)施科學(xué)免疫接種的基礎(chǔ)上，結(jié)合抗體和病原檢測，嚴(yán)格隔離、淘汰、凈化，完全能夠清除野毒感染,使種豬場成為偽狂犬病陰性豬場。

[1]?殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].第2版.?北京：科學(xué)出版社，1997：998—1009.

[2]?趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.豬病學(xué)[M].第9版.北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2008：465—476.

[3]?萬遂如.關(guān)于養(yǎng)豬場偽狂犬病的凈化問題[J].今日畜牧獸醫(yī)，2014(8)：1—4.