朱菊紅 周宏艷 周東方 王 菁

一種奧沙拉秦鈉膠囊苯胺雜質考察方法

朱菊紅 周宏艷 周東方 王 菁

目的 建立奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質考察方法。方法 采用高效液相色譜（HPLC）法。色譜柱為Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）, 流動相為甲醇：混合溶劑（含1.41 g/L磷酸二氫鉀和0.47 g/L磷酸磷酸氫二鈉二水化合物的混合溶液并用42 g/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至8.0）15∶85, 流速1.0 ml/min, 檢測波長為205 nm, 柱溫為40℃, 進樣量50 μl。結果 苯胺峰與相鄰峰能夠分離, 檢測限為2.78×10-4μg。結論 本法可用于奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質考察。

高效液相色譜法；奧沙拉秦鈉；苯胺雜質

奧沙拉秦鈉膠囊為水楊酸類藥物, 通過偶氮鍵連接兩分子5-氨基水楊酸, 到達結腸部位后其偶氮橋在細菌作用下斷裂, 分解為二分子5-氨基水楊酸并作用于結腸炎癥黏膜,抑制前列腺素合成, 抑制炎癥介質白三烯的形成, 降低腸壁細胞膜的通透性, 減輕腸黏膜水腫, 用于輕中度急慢性潰瘍性結腸炎的治療［1］。EP7.0美沙拉秦原料質量標準中對苯胺雜質檢查控制, 苯胺雜質對人體健康能產生高鐵血紅蛋白血癥、溶血性貧血和肝、腎損害, 由于奧沙拉秦鈉含有二分子美沙拉秦［2］, 因此對苯胺雜質進行考察、控制。本文參考EP7.0美沙拉秦原料質量標準項下雜質K檢查方法［3］, 建立了HPLC法測定奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質的含量, 方法專屬性、靈敏度、耐用性等符合要求, 可以滿足奧沙拉秦鈉膠囊中苯胺雜質檢查。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 1260高效液相色譜儀（包括VWD檢測器、G1311C自動調配泵、G1329B標準自動進樣器、G1316A可調柱溫恒溫箱、Agilent色譜化學工作站等）；電子分析天平。

1.2 藥品與試劑 苯胺對照品（99%, Aladdin Industrial Corporation）；奧沙拉秦鈉膠囊（批號：110203、110206、110209）；甲醇（色譜級, 美國Tedia有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件的選擇和系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Agilent C18（4.6×250 mm, 5 μm）；流動相：甲醇：混合溶劑（含1.41 g/L磷酸二氫鉀和0.47 g/L磷酸磷酸氫二鈉二水化合物的混合溶液并用42 g/L氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至8.0）15∶85；流速1.0 ml/min, 檢測波長為205 nm；柱溫為40℃；取苯胺鹽酸鹽對照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 作為對照品溶液, 進樣量50 μl。對照溶液主峰信噪比至少為10。

2.2 有關物質檢查 精密稱取裝量差異項下內容物的細粉適量（約40 mg）, 置于20 ml容量瓶中, 加流動相溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 濾過, 取續(xù)濾液作為供試品溶液。取苯胺鹽酸鹽對照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度,搖勻過濾即得。

精密量取上述兩種溶液各50 μl, 分別注入液相色譜儀。供試品中苯胺雜質峰不得大于對照品溶液中苯胺峰面積（10 ppm）。

2.3 方法的專屬性 取苯胺鹽酸鹽對照品27.8 mg, 置于100 ml容量瓶, 用流動相溶解并稀釋至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 作為苯胺定位用溶液。精密量取50 μl, 注入液相色譜儀。

取奧沙拉秦鈉膠囊裝量差異項下內容物的細粉適量（約40 mg）, 精密稱定, 置20 ml容量瓶中, 加流動相溶解并稀釋至刻度, 過濾, 取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取50 μl,注入液相色譜儀。

圖1 高效液相色譜圖A：對照品；B供試品

在苯胺對照品溶液和奧沙拉秦鈉樣品色譜圖中, 苯胺峰保留時間位置處無干擾峰。

2.4 檢測限 對照品溶液：取本胺鹽酸鹽對照品27.8 mg,至100 ml容量瓶, 用流動相溶解并稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml至20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度, 再吸取0.2 ml置于20 ml容量瓶, 用流動相稀釋至刻度。精密量取對照品溶液10 μl進樣。性噪比3時, 檢測限［4］為2.78×10-4μg。

2.5 強制破壞試驗

2.5.1 酸破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加7 mol/L的鹽酸5滴, 再加10 ml流動相溶解,室溫下放置2 h后, 用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH至中性,后加流動相稀釋至刻度。

2.5.2 堿破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 滴加2 mol/L的氫氧化鈉溶液10滴, 再加10 ml流動相溶解, 室溫下放置2 h后, 用2 mol/L的鹽酸調節(jié)pH至中性, 后加流動相稀釋至刻度。

2.5.3 高溫破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流動相溶解并稀釋至刻度, 后放置水浴中3 h。

2.5.4 光照破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加流動相溶解并稀釋至刻度, 在光照（4500±500）Lx條件放置2 d。

2.5.5 氧化破壞 取奧沙拉秦鈉樣品約40 mg, 置于20 ml容量瓶中, 加入30%雙氧水1 ml, 再加10 ml流動相溶解, 室溫下放置2 h后, 后加流動相稀釋至刻度。

分別取上述溶液各50 μl注入液相色譜儀, 均未檢出苯胺雜質, 說明奧沙拉秦鈉較為穩(wěn)定, 在較為劇烈條件下未降解產生苯胺雜質。

2.6 溶液穩(wěn)定性 取上述樣品溶液, 分別于0、2、4、6、8 h進樣50 μl注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 結果見表1。

表1 溶液穩(wěn)定性試驗結果

2.7 耐用性 將色譜條件中的參數(shù)作適度變化, 采用不同色譜柱、不同柱溫、不同流速, 考察對測定結果的影響情況,性噪比均能達到10, 方法耐用性良好。

2.8 有關物質檢查結果 對某制藥企業(yè)111203、111206、111209三批按“2.2 有關物質檢查”方法檢查, 均未檢出苯胺雜質。

3 小結

奧沙拉秦鈉樣品在酸、堿、高溫、光照、氧化條件下破壞,均未檢出苯胺雜質。EP7.0奧沙拉秦鈉原料質量標準項下未將苯胺訂入標準。但苯胺作為特定雜質, 奧沙拉秦鈉含有美沙拉秦結構, 本法可作為奧沙拉秦鈉可能含有苯胺雜質檢查的檢查方法。

為使奧沙拉秦鈉在色譜系統(tǒng)中盡快洗脫, 可以在苯胺峰保留時間之后, 設定較高比例甲醇, 對奧沙拉秦鈉等相關成分洗脫。

［1］ 范竹萍, 曾民德.國產奧沙拉秦鈉膠囊治療潰瘍性結腸炎149例.中國臨床藥理學與治療學, 1999, 4（1）:12-16.

［2］ 陳龍珠, 陳玨.奧沙拉秦鈉膠囊溶出度測定.西北藥學雜志, 2000, 15（3）:168.

［3］ 曾國明.柳氮磺胺吡啶片與奧沙拉秦鈉膠囊對潰瘍性結腸炎的治療效果比較.醫(yī)學信息旬刊, 2011, 24（7）:196-197.

［4］ 石晶波.奧沙拉秦鈉膠囊和柳氮磺胺吡啶片在治療潰瘍性結腸炎中的療效比較.吉林醫(yī)學, 2012, 33（18）:168.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.192

2014-12-17］

323000 浙江眾益制藥股份有限公司（朱菊紅周宏艷 周東方）；平邑縣食品藥品監(jiān)督管理局（王菁）