全艷玲，于洪梅，賈宏敏，陳 陽

(遼寧科技大學 化學工程學院，遼寧 鞍山 114051)

抑菌圈法比較研究兩種聚胍殺菌性能

全艷玲，于洪梅，賈宏敏，陳 陽

(遼寧科技大學 化學工程學院，遼寧 鞍山 114051)

通過設計抑菌圈試驗，對兩種聚胍——聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽和聚六亞甲基單胍鹽酸鹽的殺菌性能進行了比較研究，考察了兩種聚胍對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑菌效果。結果表明，兩種聚胍對上述四種常見致病細菌均有很好的殺菌能力，并且兩種聚胍具有協(xié)同殺菌作用。

聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽; 聚六亞甲基單胍鹽酸鹽; 殺菌效果; 協(xié)同作用

用于制菌和殺菌的化學因素很多，因此評價消毒劑藥效的實驗是微生物工作者經(jīng)常面對的，也是教學中的重點。本課題組對胍基消毒劑已進行了多年的研究，我們結合科研促進教學的要求，將科研成果轉化成教學內容，對自制的兩種聚胍——聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽和聚六亞甲基單胍鹽酸鹽的殺菌性能進行比較研究，增加一個微生物實驗。聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽[1-3](polyhexamethylene biguanidine hydrochloride，PHMB)是一種高效廣譜消毒殺菌劑，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌和酵母菌等均有殺滅作用，其安全性得到美國FDA和EPA認可。聚六亞甲基單胍鹽酸鹽(polyhexamethylene guanidine hydrochloride，PHGC)是一種新型高分子聚合物殺菌消毒劑，由于其具有良好的殺菌效果和安全性，近年來，在醫(yī)藥、植保、工業(yè)產(chǎn)品、食品及日用品等方面得到愈來愈廣泛的應用[4-6]。在開發(fā)這兩個產(chǎn)品時，通過設計抑菌圈實驗，考察了兩種聚胍PHMB和PHGC對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和銅綠假單胞菌等四種常見致病細菌的抑菌效果，同時考察了兩種聚胍復配后對上述四種常見致病細菌的抑菌效果。

1 實驗

1.1 試劑

聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽(PHMB)，聚六亞甲基單胍鹽酸鹽(PHGC)，無水乙醇(分析純)，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、銅綠假單胞菌，瓊脂，蛋白胨，牛肉膏，鹽酸(優(yōu)級純)，氯化鈉(分析純)。

1.2 主要儀器

臥式壓力蒸汽滅菌器，移液槍，熱鼓風干燥箱，超凈工作臺，電子天平，濾紙片，生化培養(yǎng)箱，數(shù)控超聲波清洗器，電子萬用爐，培養(yǎng)皿，試管，酸度計，游標卡尺。

1.3 抑菌圈試驗[7]

1)溶液的配制。用去離子水將PHMB和PHGC配制成試驗所需的不同濃度的溶液，并調pH值為中性。

2)菌種活化。用接種環(huán)將保存于4 ℃下的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色葡萄球菌、銅綠假單胞菌分別挑取一環(huán)接種至裝有液體培養(yǎng)基的250 mL錐形瓶中，在37 ℃水浴恒溫振蕩箱中培養(yǎng)24 h，作為實驗用原菌液。

3)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基。分別取蛋白胨10 g、牛肉膏3 g、NaCl 5 g、瓊脂20 g和水1 000 mL加入到燒杯中，自然pH值。加熱煮沸使瓊脂充分溶解后制成固體培養(yǎng)基，用于培養(yǎng)細菌。

4)將實驗所需的溶劑、培養(yǎng)基、玻璃儀器等在121 ℃下滅菌30 min。

5)用移液槍分別取金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色葡萄球菌、銅綠假單胞菌菌懸液50 μL加至已滅菌的培養(yǎng)皿中，將溶化后的瓊脂培養(yǎng)基冷卻至50 ℃左右，以無菌手續(xù)傾注入培養(yǎng)皿中。每個內徑9 cm的平皿傾注15～20 mL，置水平位置迅速旋動平皿，混合均勻后，取直徑5 mm的濾紙片分別沾取不同殺菌劑溶液置于培養(yǎng)基平板上，于37 ℃下恒溫培養(yǎng)18 h，觀察并用游標卡尺量取抑菌圈大小。

2 結果與討論

2.1 不同濃度的PHGC抑菌效果

表1 不同濃度的PHGC抑菌效果

2.2 不同濃度的PHMB抑菌效果

實驗采用抑菌圈法考察了不同濃度的PHMB對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和銅綠假單胞菌四種常見致病細菌的抑菌效果，實驗結果見表2。結果表明，PHMB在不同的濃度下對四種常見致病細菌均有一定的抑菌作用，并且抑菌作用隨著濃度的升高而逐漸增強。實驗結果還表明， PHMB在同一濃度下，對不同細菌的抑制能力不同，抑制效果大小順序為：大腸桿菌>銅綠假單胞菌>金黃色葡萄球菌>白色葡萄球菌。

表2 不同濃度的PHMB抑菌效果

2.3 PHMB和PHGC不同組合濃度的抑菌效果

表3 PHMB和PHGC不同組合濃度的抑菌圈大小

3 結束語

本文通過抑菌圈試驗，考察了聚六亞甲基雙胍鹽酸鹽(PHMB)和聚六亞甲基單胍鹽酸鹽(PHGC)對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抑菌效果，同時考察了兩種聚胍復配后對上述四種常見致病菌的抑菌效果。結果表明，PHGC和PHMB在不同的濃度下對四種常見致病細菌均有一定的抑菌作用，并且抑菌作用均隨著濃度的升高而逐漸增強。結果還表明，兩種聚胍消毒劑具有協(xié)同殺菌作用。

[1]蘇偉東, 孫貴娟, 盧桂寧, 等. 一種聚六亞甲基雙胍復方消毒劑殺菌性能及毒性的實驗研究[J]. 實用預防醫(yī)學, 2009, 16(5): 1615-1617.

[2] 陳巧芝, 崔玉杰, 栗華, 等. 聚六亞甲基雙胍復方消毒劑醫(yī)院消毒應用研究[J]. 河北醫(yī)藥, 2009, 31(6):668-670.

[3] 劉仲霞, 陸武韜, 蘇偉東. 一種復方聚六亞甲基鹽酸雙胍消毒液消毒相關性能研究[J]. 中國消毒學雜志, 2011, 28(4):448-450.

[4] 李光, 陳紅, 江建明. 胍基聚合物的合成及抗菌性能[J].高分子材料科學與工程, 2002, 18(4):85-87.

[5] 黃新宇. 鹽酸聚六亞甲基胍消毒劑研究進展[J]. 中國衛(wèi)生工程學, 2005, 4(5):324-325.

[6] 王冰妹, 陳惠珍, 鐘昱文, 等. 聚六亞甲基胍類消毒劑的殺菌效果觀察[J]．中國熱帶醫(yī)學, 2008, 8(3):194-197.

[7] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司. 消毒技術規(guī)范[S]. 北京: 中華人民共和國衛(wèi)生部, 2002: 84.

Comparative Study on the Germicidal Efficacy of Two Kinds of Poly Guanidine by Inhibition Zone Method

QUAN Yanling, YU Hongmei, JIA Hongmin, CHEN Yang

(School of Chemical Engineering, University of Science and Technology Liaoning, Anshan 114051, China)

The germicidal efficacies of polyhexamethylene biguanidine hydrochloride and polyhexamethylene guanidine hydrochloride were comparatively studied to Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus and Pseudomonas aeruginosa by inhibition zone method. The results showed that two kinds of poly guanidine for the above-mentioned four kinds of common pathogenic bacteria have significantly bactericidal capacity, and both have synergistic effect on germicidal efficacy.

polyhexamethylene biguanidine hydrochloride; polyhexamethylene guanidine hydrochloride; germicidal efficacy; synergistic effect

2014-05-17

2014年鞍山市科技基金資助項目。

全艷玲(1967-)，女，碩士，副教授，研究方向：微生物菌種選育和微生物發(fā)酵。

于洪梅(1971-)，女，博士，教授，研究方向：藥物中間體的合成。

R187.1

A

10.3969/j.issn.1672-4550.2015.03.009