杜安玲

ESBLs、SSBL 的檢測(cè)及臨床應(yīng)用

杜安玲

目的 了解對(duì)頭孢噻肟耐藥的大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)、超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(SSBL)的臨床分布及其對(duì)抗生素的敏感性。方法 利用雙紙片協(xié)同試驗(yàn)及紙片法確證試驗(yàn)檢測(cè)ESBLs及SSBL, 并用紙片擴(kuò)散試驗(yàn)和DL-96E測(cè)定抗生素的敏感性。結(jié)果 從頭孢噻肟最小抑菌濃度(MIC)≥2的大腸埃希菌檢出產(chǎn)ESBLs為62.5%；產(chǎn)SSBL為9.4%。產(chǎn)酶菌株對(duì)頭孢菌素高度耐藥,對(duì)氨曲南、慶大霉素、環(huán)丙沙星及復(fù)方新諾明耐藥率高, 對(duì)亞胺培南、美羅培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星、頭孢哌酮/舒巴坦耐藥率低。結(jié)論 產(chǎn)生ESBLs、SSBL是大腸埃希菌對(duì)頭孢菌素類(lèi)抗生素耐藥的重要機(jī)制, 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)加強(qiáng)檢測(cè), 為臨床合理使用抗生素提供依據(jù)。

抗生素；超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；超超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；耐藥性檢測(cè)

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素耐藥率升高的主要原因是細(xì)菌產(chǎn)生了ESBLs、SSBL和AmpC酶［1,2］,大腸埃希菌主要引起呼吸道、尿路系統(tǒng)、傷口等部位感染,是重要的醫(yī)院感染常見(jiàn)條件病原菌。為了解大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs、SSBL在本所的分布情況, 正確理解細(xì)菌的不同耐藥機(jī)制, 掌握細(xì)菌耐藥率的變化, 為臨床合理使用抗生素提供依據(jù)。本試驗(yàn)從臨床住院患者分離的對(duì)頭孢噻肟≥2的大腸埃希菌進(jìn)行檢測(cè)ESBLs、SSBL酶, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源 選取本所2013年6月～2014年12月分離的菌株, 選擇對(duì)頭孢噻肟MIC≥2的大埃埃希菌160株。樣本主要來(lái)自痰、中段尿、胸腹水等。細(xì)菌鑒定為珠海迪爾DL-96細(xì)菌鑒定儀。

1.2 藥敏試驗(yàn) 抗生素藥敏稀釋板(DL-96E)購(gòu)自珠海迪爾公司。質(zhì)控菌為大腸埃希菌ATCC25922。結(jié)果按2012年臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。

1.3 超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè) 雙紙片協(xié)同試驗(yàn)及采用2012年CLSI推薦的初篩及確證試驗(yàn)［3］。取頭孢西丁紙片抑菌環(huán)直徑≤18 mm的菌株, 轉(zhuǎn)種至胰酶大豆消化液中, 將生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期的細(xì)菌培養(yǎng)物離心后, 取沉淀部分的菌細(xì)胞經(jīng)反復(fù)凍融(-70℃及37℃交替水浴5次)制備酶的粗提物。按標(biāo)準(zhǔn)藥敏紙片擴(kuò)散法在M-H瓊脂平板上涂布大腸埃希菌ATCC25922, 在平板中央放置30 mg的頭孢西丁紙片, 在距紙片邊沿5 mm處開(kāi)使用無(wú)菌刀片向外呈放射狀挖一約20 mm × 2 mm的細(xì)槽, 將酶的粗提物加入細(xì)槽中, 于35℃培養(yǎng)過(guò)夜。表面細(xì)菌在細(xì)槽和頭孢西丁的抑菌環(huán)之間出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性, 證明所測(cè)菌產(chǎn)生SSBL酶。

2 結(jié)果

2.1 ESBLs、SSBL的檢測(cè)結(jié)果分析 當(dāng)頭孢噻肟MIC=2、4、8、32時(shí), 大腸埃希菌檢出產(chǎn)ESBLs比率分別為3.8%(6/160)、6.3%(10/160)、40.6%(65/160)、11.9%(19/160)；當(dāng)頭孢噻肟MIC=2、4、8、32時(shí), 大腸埃希菌檢出產(chǎn)SSBL比率分別為0、0、6.9%(11/160)、2.5%(4/160)。見(jiàn)表1。

表1 產(chǎn)ESBLs、SSBL大腸埃希菌與頭孢噻肟MIC檢出關(guān)系(n)

2.2 產(chǎn)ESBLs、SSBL大腸埃希對(duì)常用抗生素的敏感性 對(duì)亞胺培南敏感(100.0%)、美羅培南敏感(100.0%)、哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%)、阿米卡星敏感(91.3%)、頭孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%)。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)頭孢菌素類(lèi)、單酰胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)和復(fù)方新諾明抗生素高度耐藥, 僅部分菌株體外試驗(yàn)顯示對(duì)四代頭孢吡肟敏感。

3 討論

由于廣譜三代、四代頭孢菌素在臨床的廣泛應(yīng)用、患者免疫力下降及基礎(chǔ)疾病的增多, 細(xì)菌的耐藥率亦不斷增加, ESBLs和SSBL酶的產(chǎn)生則是目前認(rèn)為大腸埃希菌對(duì)三代、四代頭孢菌素耐藥的主要機(jī)制。ESBLs大多數(shù)由TEM-1、TEM-2及SHV-1發(fā)生突變的衍生物, 能水解青霉素類(lèi)、頭孢菌素類(lèi)及單酰胺類(lèi), 能被克拉維酸等酶抑制劑所抑制, 對(duì)頭霉素及碳青霉烯類(lèi)敏感, 多由質(zhì)粒傳遞, 導(dǎo)致大腸埃希菌對(duì)三代頭孢菌素及酶抑制劑的耐受［4］, 以CTX型ESBLs占多數(shù)［5,6］。

本試驗(yàn)中, 大腸埃希菌檢出產(chǎn)ESBLs、SSBL的比率分別為62.5%和9.4%, 表明大腸埃希菌對(duì)三代頭孢菌素耐藥的主要原因是產(chǎn)生ESBLs、SSBL, 大腸埃希菌對(duì)頭孢菌素類(lèi)、喹諾酮類(lèi)和單酰胺類(lèi)抗生素高度耐藥, 對(duì)慶大霉素及復(fù)方新諾明耐藥率也較高, 而對(duì)頭孢哌酮/舒巴坦敏感(78.8%), 阿米卡星敏感(91.3%), 哌拉西林/他唑巴坦敏感(93.1%), 尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)亞胺培南、美羅培南耐藥菌株。同時(shí)用頭孢噻肟、頭孢他啶和頭孢噻肟/克拉維酸、頭孢他啶/克拉維酸檢測(cè)ESBLs, 能起到互補(bǔ)作用, 能提高ESBLs的檢出率。結(jié)果顯示頭孢噻肟MIC值越大產(chǎn)ESBLs、SSBL率越高。

美國(guó)國(guó)家臨床標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)認(rèn)為產(chǎn)ESBLs、SSBL者, 雖體外測(cè)定對(duì)頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢吡肟等頭孢菌素敏感,但體內(nèi)療效差, 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)報(bào)告耐藥。本試驗(yàn)中部分產(chǎn)ESBLs菌株顯示對(duì)頭孢他啶、頭孢吡肟體外敏感, 由于體內(nèi)療效不好, 應(yīng)視為耐藥。因此, 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)積極開(kāi)展對(duì)產(chǎn)酶菌的檢測(cè),正確區(qū)分ESBLs和SSBL不僅是細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)的需要, 更具有分子流行病學(xué)意義, 而且對(duì)了解細(xì)菌耐藥機(jī)制, 合理選擇抗生素、為臨床合理使用抗生素提供重要依據(jù)和一定的指導(dǎo)作用。

［1］ 王輝, 劉穎梅, 王清濤.北京發(fā)現(xiàn)同時(shí)產(chǎn)DHA-1質(zhì)粒AmpC型XRX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的肺炎克雷伯菌.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2005, 25(5):419-422.

［2］ 沈定霞, 吳堅(jiān), 徐雅萍.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌的檢測(cè)及其耐藥表型和基因型.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2000, 20(3):273-276.

［3］ Bret L, Claris CC, Sitot D, et al.Chromosomally encoded AmpC-type b-Lactamase in a clinical isolate of Proteus mirabilis.Antimicrob Agents Chemother, 2005, 42(5):1110-1114.

［4］ 凌宙貴, 劉濱, 劉衛(wèi), 等.產(chǎn)ESBLs動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及耐藥性分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2014, 24(17):4174-4176.

［5］ 張虎, 閆中強(qiáng), 曹晉桂, 等.醫(yī)院感染肺炎克雷伯菌耐藥趨勢(shì)及b-內(nèi)酰胺酶基因分型分析.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2014, 24(21):5207-5209.

［6］ 常燕子, 李巧云, 裘莉佩, 等.質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類(lèi)耐藥基因在社區(qū)泌尿系感染大腸埃希菌中的分布.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2010, 5(20):1092-1094.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.102

2015-04-23］

455000 安陽(yáng)市結(jié)核病防治所