王亮 周明偉

尿PCA3評(píng)分在前列腺癌的診斷意義分析

王亮 周明偉

目的 探討尿前列腺癌基因3(PCA3)評(píng)分在前列腺癌的診斷意義。方法 選取前列腺直腸指診異常的受檢者82例作為觀察組, 另選取30例同期健康查體者作為對(duì)照組。檢測(cè)兩組尿液中前列腺特異抗原(PSA)和PCA3 mRNA的表達(dá)并計(jì)算尿PCA3評(píng)分, 觀察組均行超聲引導(dǎo)下穿刺檢查確定前列腺癌發(fā)生情況, 并采用ROC曲線分析尿PCA3評(píng)分診斷前列腺癌的準(zhǔn)確性。結(jié)果 觀察組的尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分分別為(490.12±373.42)、(62.52±54.16)和(159.85±118.78)分,高于對(duì)照組的(352.42±326.62)、(4.21±4.03)和(11.95±6.25)分, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組確診為良性前列腺增生、前列腺癌的患者比例分別為43.90%和56.10%, 前列腺癌患者尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 而良性前列腺增生患者和對(duì)照組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較, 差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。尿PCA3評(píng)分經(jīng)ROC曲線分析, 其ROC-AUC=0.893［95%CI(0.834, 0.942)］, 本研究中以截?cái)嘀?5為前列腺癌診斷的臨界值時(shí)截?cái)嘀狄陨嫌?1例前列腺癌患者, 敏感性為89.13%, 截?cái)嘀狄韵?3例良性前列腺增生患者和健康人群, 特異性為95.45%, 陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為93.18%和92.65%, 尿PCA3評(píng)分診斷前列腺癌發(fā)生的價(jià)值良好。結(jié)論 尿PCA3評(píng)分在前列腺癌患者中的水平較高且其截?cái)嘀禐?5時(shí)診斷前列腺癌可獲得較高的診斷價(jià)值, 因此尿PCA3評(píng)分可能作為前列腺癌診斷的參考指標(biāo)之一。

尿前列腺癌基因3評(píng)分；前列腺癌；診斷

近年來隨著生活方式的改變和人口老齡化的加劇, 各類癌癥的發(fā)生率逐漸上升。作為老年男性常見腫瘤疾病, 前列腺癌指的是在前列腺發(fā)生的上皮性惡性腫瘤, 患者早期常無臨床癥狀, 前列腺癌腫瘤逐漸增大可導(dǎo)致排尿困難、血尿、陽痿等癥狀的出現(xiàn), 臨床常采取直腸指診、血清PSA、經(jīng)直腸前列腺超聲和盆腔MRI檢查等, 但其早期檢出率低, 患者長(zhǎng)常無法得到早期診治［1］。且直腸指診、血清PSA、經(jīng)直腸前列腺超聲和盆腔MRI等檢查對(duì)于前列腺癌均非特異性, 前列腺增生等均可出現(xiàn)四種檢查結(jié)果的異常。超聲引導(dǎo)下穿刺活檢作為前列腺癌檢查的金標(biāo)準(zhǔn), 雖可較準(zhǔn)確地檢出前列腺癌, 但其侵入性給患者帶來的創(chuàng)傷和痛楚較大。尋找無創(chuàng)有效的前列腺癌診斷方法對(duì)前列腺癌的早期診治和預(yù)后改善均具有重要意義。PCA3是近年來發(fā)現(xiàn)的特異地表達(dá)于前列腺癌細(xì)胞的基因, 且其表達(dá)水平可隨患者前列腺癌的發(fā)展而變化［2］。然而目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于尿PCA3 mRNA水平和PCA3評(píng)分在前列腺癌診斷中的研究報(bào)道甚少。本研究分析前列腺癌患者、良性前列腺增生患者和健康人群PSA mRNA、PCA3 mRNA水平和PCA3評(píng)分的水平及其PCA3評(píng)分對(duì)前列腺癌的診斷價(jià)值, 為前列腺癌的早期診斷和治療提供依據(jù), 結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年1月本院前列腺直腸指診異常的患者82例作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均為前列腺直腸指診異常患者且知情同意；排除標(biāo)準(zhǔn)：排除合并心肝肺腎等器官功能障礙患者和因各類原因無法配合實(shí)驗(yàn)檢查完成的患者。另選取30例同期健康查體者作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)且入選者均已簽署知情同意書。觀察組年齡35～81歲, 平均年齡(69.54±6.88)歲, 體質(zhì)量指數(shù)(BMI)19.4～33.8 kg/m2, 平均BMI(23.62±2.78)kg/m2。對(duì)照組年齡33～85歲, 平均年齡(70.28±67.59)歲, BMI 18.9～33.2 kg/m2, 平均BMI(23.16±3.24)kg/m2。兩組研究對(duì)象年齡、BMI等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 檢測(cè)方法 采用PCR定量分析法檢測(cè)觀察組和對(duì)照組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA表達(dá)水平并計(jì)算PCA3評(píng)分。具體如下：受檢者均采用傳統(tǒng)指診, 觸及前列腺后從左右兩側(cè)向中央用力按摩3次, 再?gòu)那傲邢夙敳肯蛑醒氚茨?次,囑患者排尿時(shí)收集尿液約50 ml并置于冰水中冷卻。將尿液標(biāo)本以3500 r/min離心約10 min后取尿沉渣保存待測(cè)。根據(jù)TaKaRa一步法提取RNA后采用微量分光光度計(jì)測(cè)定其RNA的濃度及純度后用于定量PCR反應(yīng)。根據(jù)TaKaRa ExScript TM RT-PCR Kit說明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄并制備cDNA、PCA3、PSA和內(nèi)參β-actin的熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用擴(kuò)增儀進(jìn)行反應(yīng)并制作溶解曲線和確定增產(chǎn)的特異性。擴(kuò)增采用20 μl反應(yīng)體系并于預(yù)冷的RNase free 反應(yīng)管中添加cDNA 2 μl、primer-F 1 μl、2 μM primer-R 1 μl、2×Easy-Taq PCR SuperMix 10 μl、10×SR Green 10.5 μl及ddH2O 1.3 μl, 擴(kuò)張反應(yīng)具體如下：于95℃環(huán)境中預(yù)變性10 min, 95℃環(huán)境中變性15 s, 60℃環(huán)境中退火30 s, 72℃環(huán)境中延伸15 s, 如此循環(huán)40次后于72℃環(huán)境中延伸10 min并將PCR產(chǎn)物于-20℃恒溫箱中保存待查。分析溶解曲線并通過檢測(cè)的Ct值表示各基因的mRNA表達(dá)量。此外觀察組均行超聲引導(dǎo)下穿刺檢查確定前列腺癌發(fā)生情況。

1.3 治療方法 確診為前列腺癌患者均接受相應(yīng)的抗癌治療, 確診為良性前列腺增生患者亦接受相應(yīng)的治療。

1.4 評(píng)價(jià)方法 PCA3評(píng)分：PCA3評(píng)分=(PCA3 mRNA/PSA mRNA)×1000。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；多組計(jì)量資料比較采用方差分析, 進(jìn)一步兩兩比較采用q檢驗(yàn)；尿PCA3評(píng)分在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值分析采用受試者操作特性曲線(ROC)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較 與對(duì)照組比較, 觀察組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分均升高, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 不同超聲引導(dǎo)下穿刺檢查結(jié)果的患者及對(duì)照組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較 82例受檢者超聲引導(dǎo)下穿刺檢查結(jié)果顯示良性前列腺增生、前列腺癌的患者例數(shù)分別為36例和46例, 分別作為良性前列腺增生組、前列腺癌組。良性前列腺增生、前列腺癌的患者比例分別為43.90%(36/82)和56.10%(46/82)。前列腺癌患者尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分均高于良性前列腺增生患者和對(duì)照組, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 而良性前列腺增生患者和對(duì)照組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2, 圖1。

表1 兩組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較( x-±s)

表2 不同超聲引導(dǎo)下穿刺檢查結(jié)果患者及對(duì)照組尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分比較( x-±s)

2.3 PCA3評(píng)分在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值的ROC曲線分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示, PCA3評(píng)分截?cái)嘀?5為前列腺癌診斷的臨界值時(shí)預(yù)測(cè)甲狀腺癌的敏感性、特異性、陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均較高, 尿PCA3評(píng)分截?cái)嘀?5時(shí)診斷前列腺癌發(fā)生的價(jià)值良好且優(yōu)于傳統(tǒng)中截?cái)嘀禐?5時(shí)診斷前列腺癌發(fā)生的價(jià)值。見表3, 圖1。

表3 不同PCA3評(píng)分截?cái)嘀翟谇傲邢侔┰\斷中的應(yīng)用價(jià)值比較

圖1 PCA3評(píng)分和PSA在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值比較

3 討論

前列腺 癌是老年男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤疾病之一, 其發(fā)病率較高, 約占男性惡性腫瘤的1/4, 且其病死率約占男性惡性腫瘤的1/10。近年來隨著我國(guó)老齡化的加快及飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的改變, 前列腺癌在我國(guó)男性中的發(fā)病率逐漸上升。前列腺癌發(fā)病早期無特異性的臨床癥狀, 部分患者甚至無任何臨床表現(xiàn), 而部分患者出現(xiàn)臨床表現(xiàn)并確診時(shí)可能已發(fā)生局部浸潤(rùn)或骨骼、淋巴結(jié)等遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移, 患者往往預(yù)后不良。因此對(duì)前列腺癌的早期診治具有重要意義。傳統(tǒng)影像學(xué)檢查、血清學(xué)檢查及穿刺活檢等前列腺癌輔助診斷方法存在準(zhǔn)確性較低、特異性偏低或創(chuàng)傷較大等不足, 在前列腺癌早期診斷中的應(yīng)用效果不佳。尋找有效且無創(chuàng)的前列腺癌輔助診斷方法對(duì)前列腺癌的早期診治具有重要意義。PCA3作為新發(fā)現(xiàn)的前列腺癌特異性標(biāo)記物,可在人類前列腺癌細(xì)胞中特異性表達(dá), 因此可能用于前列腺癌的診斷中［3］。目前關(guān)于PCA3基因的表達(dá)研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)其在前列腺癌中表達(dá)水平較高, 正常前列腺中的表達(dá)水平較低, 而在其他組織或腫瘤標(biāo)本中不表達(dá)［4］。然而目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于前列腺癌患者尿中PCA3基因的表達(dá)和PCA3評(píng)分及其在前列腺癌診斷中的應(yīng)用研究報(bào)道較少, 明確尿PCA3評(píng)分在前列腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值可為前列腺癌的早期無創(chuàng)診斷提供依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示, 尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分在肛門指診出現(xiàn)前列腺腫塊患者中的水平均較高且均高于正常健康人群。而出現(xiàn)前列腺癌患者的尿PSA mRNA、PCA3 mRNA及PCA3評(píng)分明顯高于良性前列腺增生患者和健康人群, 這與PCA3基因在前列腺癌中高表達(dá)和在非前列腺癌患者和健康人群中表達(dá)水平較低的理論一致。超聲引導(dǎo)下穿刺檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)直腸指診出現(xiàn)前列腺腫塊的男性前列腺癌的發(fā)病率較高, ＞50%的直腸指診出現(xiàn)前列腺腫塊患者為前列腺癌, 因此老年男性應(yīng)定期行前列腺檢查以及早發(fā)現(xiàn)前列腺腫塊的發(fā)生, 并及時(shí)進(jìn)一步確定前列腺癌癥的發(fā)生以達(dá)到前列腺癌早發(fā)現(xiàn)和早治療的目的。前列腺癌患者尿PCA3 mRNA特異性表達(dá)提示PCA3相關(guān)指標(biāo)可能用于前列腺癌的預(yù)測(cè)。尿PCA3評(píng)分可通過尿PCA3和PSA在尿中的基因表達(dá)水平的比值反映患者前列腺發(fā)病情況, ROC曲線分析結(jié)果顯示, 不同尿PCA3評(píng)分截?cái)嘀翟\斷前列腺癌的靈敏度和特異度等不一, 其中以65為尿PCA3評(píng)分截?cái)嘀禃r(shí)可取得同時(shí)取得較高的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值, 對(duì)前列腺癌診斷的價(jià)值最優(yōu), 優(yōu)于傳統(tǒng)以35為PCA3評(píng)分截?cái)嘀祵?duì)前列腺癌診斷的價(jià)值。因此尿PCA3評(píng)分可能用于前列腺癌的輔助診斷, 而出現(xiàn)尿PCA3評(píng)分的老年男性需進(jìn)一步確診其前列腺癌的發(fā)生情況以早期干預(yù)并改善患者預(yù)后。由于本研究樣本量偏小且尿PSA、PCA3評(píng)分等亦可受患者前列腺良性病變等的影響, 因此明確尿PCA3評(píng)分診斷前列腺腺癌的價(jià)值需更大樣本量的全面深入研究。

綜上所述, 前列腺癌患者尿PCA3評(píng)分較高且對(duì)前列腺癌診斷具有一定價(jià)值, 當(dāng)其截?cái)嘀禐?5時(shí)診斷前列腺癌可獲得較高的診斷價(jià)值, 因此尿PCA3評(píng)分可能作為前列腺癌診斷的參考指標(biāo)之一。

［1］ 李世杰, 王鑫坤, 王佳, 等.高b值DWI對(duì)前列腺癌和前列腺炎的鑒別診斷價(jià)值.中國(guó)醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志, 2012(12):887-889.

［2］ 高建軍, 韓瑞發(fā).尿液前列腺癌基因3檢測(cè)診斷前列腺癌的Meta分析.中國(guó)全科醫(yī)學(xué), 2013, 16(5):483-486.

［3］ Kovács GL. New challenges and earlier approved methods in the laboratory diagnosis of prostate cancer. Magy Onkol, 2014, 58(4): 301-309.

［4］ 曹達(dá)龍, 葉定偉, 張世林, 等.前列腺癌特異抗原3對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞增殖的影響.中國(guó)癌癥雜志, 2012, 22(2):135-138.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.23.053

2015-04-23］

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