劉巖青 盛吉章 孫鳳莉

術(shù)后化療的Ⅱ期結(jié)腸癌患者血清Smad4的表達(dá)及臨床意義

劉巖青 盛吉章 孫鳳莉

目的 研究Ⅱ期結(jié)腸癌患者術(shù)后行輔助化療前后血清Smad4表達(dá)水平及臨床意義。方.110例Ⅱ期結(jié)腸癌術(shù)后輔助化療的患者, 根據(jù)有無復(fù)發(fā)情況分為復(fù)發(fā)組(37例)和未復(fù)發(fā)組(73例)；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)對其輔助化療前后血清Smad4水平進(jìn)行檢測。分析血清Smad4水平與患者無病生存時間的關(guān)系。結(jié)果 未復(fù)發(fā)組化療后血清Smad4水平與化療前相比明顯升高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；復(fù)發(fā)組化療前血清Smad4顯著低于未復(fù)發(fā)組, 兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。患者血清Smad4水平與患者無病生存期呈正相關(guān)(I=-2.03, P＜0.05)。結(jié)論 血清Smad4水平變化可作為評測Ⅱ期結(jié)腸癌患者術(shù)后輔助化療療效及預(yù)后的重要分子生物學(xué)指標(biāo)。

血清Smad4；結(jié)腸癌 ；化療；酶聯(lián)免疫吸附劑測定法

結(jié)腸癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤, 其易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的特性嚴(yán)重威脅著人類的健康和生命［1］。Ⅱ期結(jié)腸癌最為多見, 手術(shù)治療是其公認(rèn)的治療手段, 而輔助化療也越來越普遍, 但是輔助化療的效果卻存在爭議。因此, 尋找能早期預(yù)測化療療效的分子生物學(xué)指標(biāo)非常重要。Smad4基因是轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β) 信號通路的重要級聯(lián)分子, 在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮著重要的作用［2］。作者之前的研究表明Smad4在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用, 參與了腫瘤新生淋巴管的生成, 促進(jìn)了腫瘤的轉(zhuǎn)移［3］。本研究進(jìn)一步探討血清Smad4水平變化在Ⅱ期結(jié)腸癌患者術(shù)后化療中的臨床意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取滄州市中心醫(yī).2013年5月～2015年8月經(jīng)病理和臨床指標(biāo)診斷為Ⅱ期結(jié)腸癌患者110例, 平均年齡(68±10)歲, 平均隨訪時間為60個月。其中未復(fù)發(fā)者(未復(fù)發(fā)組)73例, 復(fù)發(fā)者(復(fù)發(fā)組)37例。所有患者均行結(jié)腸癌根治術(shù), 術(shù)后行靜脈化療, 化療方案：四氫葉酸200 mg/m2, 5-氟尿嘧啶425 mg/m2連續(xù)5 d.28 d為1個周期, 共化療6周期。所有患者術(shù)前均未接受化療、放療及免疫治療等抗腫瘤治療。兩組患者一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 血清Smad4的檢測方法

1.2.1 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 利用棋盤滴定法確定抗原、抗體最適工作濃度。采用間接ELlSA法檢測不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值, 以濃度為橫坐標(biāo), 以吸光度為縱坐標(biāo), 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 血清Smad4檢測 早晨空腹抽取靜脈血3 m.25℃條件下靜置1 h.10000 r/min高速離心10 min, 取上清血漿1 ml,加入1.5 ml試管中, 置入-65℃冰箱保存。待所有血液樣品處理完之后統(tǒng)一采用ELISA檢測Smad4蛋白濃度, 實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照Smad4蛋白(ELISA)試劑盒說明書操作。

1.3 隨訪 所有患者均采用電話隨訪、門診復(fù)查和住院等相結(jié)合的隨訪方式。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用Curve Expert1.30曲線軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者化療前血清Smad4水平變化比較 復(fù)發(fā)組化療前血清Smad4水平為(36.5±8.7)pg/ml, 而未復(fù)發(fā)組中化療前血清Smad4水平為(75.4±12.7)pg/ml, 兩者相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1, 圖1。

2.2 兩組患者化療前后血清Smad4水平變化比較 復(fù)發(fā)組術(shù)化療后Smad4水平為(40.2±11.5)pg/ml, 與化療前Smad4水平相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。而未復(fù)發(fā)組化療后Smad4水平為(99.3±21.5)pg/ml, 顯著高于于化療前水平, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1, 圖2。

表1 兩組化療前血清中Smad4蛋白的表達(dá)情況比較(±s, n)

表1 兩組化療前血清中Smad4蛋白的表達(dá)情況比較(±s, n)

注：兩組比較, P＜0.05

組別例數(shù)Smad4(pg/ml)陽性陰性復(fù)發(fā)組3736.5±8.71621未復(fù)發(fā)組73 75.4±12.75023

表2 兩組化療后血清中Smad4蛋白的表達(dá)情況比較(±s, n)

表2 兩組化療后血清中Smad4蛋白的表達(dá)情況比較(±s, n)

注：兩組比較, P＜0.05

組別例數(shù)Smad4(pg/ml)陽性陰性復(fù)發(fā)組3740.2±11.52017未復(fù)發(fā)組7399.3±21.54528

圖1 復(fù)發(fā)組化療前Smad4血清蛋白表達(dá)水平明顯低于未復(fù)發(fā)組化療前Smad4的表達(dá)水平

圖2 未復(fù)發(fā)組患者化療前血清Smad4表達(dá)水平明顯低于化療后Smad4的表達(dá)水平

2.3 化療前血清Smad4與患者無病生存時間的關(guān)系 患者化療前血清Smad4的水平與其無病生存期呈正相關(guān) (I=-2.03, P＜0.05)?；颊呋熐把錝mad4水平越高, 其無病生存時間越長；Smad4 陽性表達(dá)組的無病生存時間明顯的長于Smad4陰性表達(dá)組, 兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見圖3。

圖3 血清Smad4表達(dá)水平與Ⅱ期結(jié)腸癌患者術(shù)后化療患者無病生存期的關(guān)系

3 討論

結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤之一, 嚴(yán)重威脅人類健康。多種治療手段, 如手術(shù)治療、化療和靶向治療, 使Ⅱ期結(jié)腸癌的治愈率已明顯提高, 但化療后仍有部分患者出現(xiàn)腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移［4］。因此, 尋找能早期預(yù)測化療療效的分子生物學(xué)指標(biāo)非常重要。目前, Ⅱ期結(jié)腸癌患者的最主要化療方案還是以5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的化療。Smad蛋白被證實(shí)是TGF-β家族的下游信號蛋白, 在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮著重要的作用［5］。Smad4蛋白是其重要的成員之一, 其位于人染色體18q21, 是首先在胰腺癌中發(fā)現(xiàn)的新型抑癌基因［6］, 其所編碼的Smad4蛋白是轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)信號通路的重要級聯(lián)分子, 在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮著重要的作用［7］。國外多項(xiàng)研究報道, 在胰腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、食管癌中, Smad4基因的缺失與失活可以增加腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力, 從而導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)［8］。Papageorgis等［2］經(jīng)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)Smad4基因失活能與結(jié)腸癌細(xì)胞的化療耐藥有密切關(guān)系, Smad4可能在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。因此,本研究選取110例Ⅱ期結(jié)腸癌術(shù)后行以5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的輔助化療的患者, 對其化療前后的血清中Smad4水平進(jìn)行檢測, 探討其在其化療中的意義及其與無病生存時間的關(guān)系。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn), 復(fù)發(fā)組化療前血清中Smad4水平明顯的低于未復(fù)發(fā)組(P＜0.05)；復(fù)發(fā)組化療前后血清中Smad4水平變化不顯著；但是未復(fù)發(fā)組化療后血清中Smad4水平與化療前血清Smad4水平相比, 明顯升高(P＜0.05)；這說明在在結(jié)腸癌患者中Smad4發(fā)揮了抑制腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的作用, 這與之前的研究結(jié)果是一致的［9］；同時也說明血清中Smad4的水平可以預(yù)測Ⅱ期結(jié)腸癌術(shù)后對以5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的輔助化療的療效和敏感性的預(yù)測, 高水平的Smad4的Ⅱ期結(jié)腸癌術(shù)后患者對以5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的輔助化療有良好的療效, 復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的幾率也明顯降低。作者進(jìn)一步分析了血清中Smad4表達(dá)水平與Ⅱ期結(jié)腸癌化療后的無病生存期之間的關(guān)系, 結(jié)果表明, 血清中Smad4水平與結(jié)腸癌患者化療后的無病生存時間呈正相關(guān), 化療前血清Smad4水平越高, 其無病生存時間越長, Smad4 陽性表達(dá)組的無病生存時間明顯的長于Smad4陰性表達(dá)組。

總之, 血清中Smad4的水平能預(yù)測Ⅱ期結(jié)腸癌患者術(shù)后對5-氟尿嘧啶為基礎(chǔ)的輔助化療的敏感性, 并與化療后患者的無病生存時間呈負(fù)相關(guān), Smad4在結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著抑制因子的作用。但是, 因?yàn)楸狙芯繕颖玖坑邢? 還待更大的臨床樣本來證實(shí), 同時, 需要更多更深入的具體分子機(jī)制的研究。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.36.113

2015-09-02］

061001 滄州市中心醫(yī)院腫瘤外二科(劉巖青孫鳳莉), 心內(nèi)科(盛吉章)