曹紅亞 李姣

ELISA法檢測(cè)HIV抗體弱陽性外部對(duì)照血清的制備及評(píng)估

曹紅亞 李姣

目的 研究酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體弱陽性外部對(duì)照血清的制備方法及效果。方法 選取20例HIV患者, 另選取20例健康人員, 抽取所有受檢者血液,分別制成HIV陽性混合血漿與HIV陰性混合血漿。使用HIV陰性血漿稀釋HIV陽性的血漿, 并使用荷蘭生物梅里埃試劑進(jìn)行檢驗(yàn), 檢驗(yàn)次數(shù)為12次。同時(shí)對(duì)比不同稀釋度的 HIV 抗體弱陽性外部質(zhì)控血漿的配制及 OD 值和HIV 弱陽性外部質(zhì)控血漿12次的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 結(jié)合數(shù)據(jù)的對(duì)比分析后發(fā)現(xiàn), 經(jīng)過1年使用后的自制弱陽性的外部質(zhì)控血漿較好, 因?yàn)槠渚哂辛己玫姆€(wěn)定性, 其變異系數(shù)(CV)＜20%。結(jié)論 在實(shí)驗(yàn)室自制弱陽性的外部質(zhì)控血漿, 這樣更適合, 且操作簡單方便, 還易于保存。ELISA法檢測(cè)HIV抗體弱陽性外部對(duì)照血清的制備較好, 值得臨床推廣和應(yīng)用。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；人類免疫缺陷病毒抗體；對(duì)照血清；制備；評(píng)估

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2012年1月～2013年5月就醫(yī)的20例HIV患者為研究對(duì)象。女8例, 男12例, 年齡23～68歲,平均年齡(37.5±9.5)歲。

1.2 方法 在實(shí)驗(yàn)前, 準(zhǔn)備相應(yīng)的血漿、試劑和儀器。需要準(zhǔn)備的血漿有兩種, 分別為HIV陽性的混合血漿, 另一種為HIV陰性混合血漿；需要準(zhǔn)備的試劑為在保質(zhì)期內(nèi)的荷蘭生物梅里埃抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒；需要準(zhǔn)備的儀器有洗板機(jī)和酶標(biāo)儀。

1.2.1 自制弱陽性外部對(duì)照血清 抽取20例健康人員的血液.20例健康人員的肝功能為正常、HCV為陰性, 并將HIV陰性血各2 ml混合, 同時(shí)進(jìn)行滅菌。滅菌的時(shí)間為30 min,溫度需達(dá)到56℃, 并離心15 min.3000 r/min, 然后收集上層清液進(jìn)行備用。而后, 將20例HIV陽性血(100 μl/例)混合,同時(shí)進(jìn)行滅菌。滅菌的時(shí)間為30 min, 溫度需達(dá)到56℃, 并離心15 min.3000 r/min, 然后收集上層清液進(jìn)行備用。最后,使用HIV陰性混合血與HIV陽性混合血進(jìn)行稀釋, 并使用荷蘭生物梅里埃抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑進(jìn)行檢測(cè), 檢測(cè)次數(shù)為12次, 并觀察OD、S/CO以及CUTOFF的值［1,2］。

1.2.2 質(zhì)控圖 反復(fù)實(shí)驗(yàn)稀釋度為1∶1200的弱陽性外部對(duì)照血清, 在其穩(wěn)定后將36 ml的陰性混合血漿與30 μl的HIV陽性混合血漿進(jìn)行均勻的混合, 做成稀釋度為1∶1200的弱陽性外部對(duì)照血清, 并進(jìn)行保存。保存器皿使用尖底離心管, 每管保存劑量為70 μl, 保存溫度為-20℃。最后, 由不同的操作人員在不同的時(shí)間進(jìn)行檢測(cè), 并記錄其CUTOFF值［3-6］。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察稀釋度、OD、CUTOFF、A值、S/CO值以及CO值等。

2 結(jié)果

2.1 觀察指標(biāo)數(shù)值 稀釋度、OD、CUTOFF等見表1, 表2。

表1 不同稀釋度的 HIV 抗體弱陽性外部質(zhì)控血漿的配制及OD值

表2 HIV弱陽性外部質(zhì)控血漿12次的檢測(cè)結(jié)果

2.2 穩(wěn)定性 對(duì)于已經(jīng)保存在-20℃內(nèi)1年的外部對(duì)照血清使用一樣廠家, 但是不同批次的荷蘭生物梅里?？贵w酶聯(lián)免疫診斷試劑, 進(jìn)行常規(guī)檢驗(yàn)3～4次/月.1年共44次, CV為11.01%, 但是CV值僅有少于20%的在規(guī)定范圍內(nèi)。

3 討論

在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自制HIV抗體弱陽性的外部對(duì)照血清的好處是不僅成本低, 而且還能夠降低由于運(yùn)輸、環(huán)境以及儀器等問題帶來的誤差［7-9］。從HIV弱陽性外部質(zhì)控血漿12次的檢測(cè)結(jié)果可知, 均值為2.96, 標(biāo)準(zhǔn)差為0.42。從上述研究表明, 自制的HIV抗體弱陽性的外部對(duì)照血清在1年后的CV＜20%, 能夠長期使用。其優(yōu)勢(shì)是重復(fù)性好、穩(wěn)定性強(qiáng)。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過程中, 試劑盒的臨界值應(yīng)是A值的2～3倍。在實(shí)驗(yàn)過程中, 若是有一些微小的變化對(duì)于其結(jié)果沒有過大的影響, 例如抗體的滴度過高就沒有監(jiān)控的作用；如果滴度過低,就會(huì)造成不易保存的現(xiàn)象［10］。對(duì)于已經(jīng)保存在-20℃內(nèi)1年的外部對(duì)照血清使用一樣廠家, 但是不同批次的荷蘭生物梅里?？贵w酶聯(lián)免疫診斷試劑進(jìn)行檢驗(yàn)結(jié)果為穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)室可以選擇一些國家較為認(rèn)可的試劑進(jìn)行長期的實(shí)驗(yàn), 這樣就可以減少經(jīng)常配置質(zhì)控品的問題［11］。在實(shí)驗(yàn)室中, 必不可少的就是質(zhì)控品的配置, 因此質(zhì)控圖也是必須制作的。實(shí)施質(zhì)量控制, 是為了保障檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性［12］。

綜上所述, 在實(shí)驗(yàn)室中配置適合本實(shí)驗(yàn)室的弱陽性的外部對(duì)照血清的方式較為可行, 這樣的方法不僅簡單方便, 而且能夠降低成本。同時(shí), 其在HIV的質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制中也應(yīng)用良多。

［1］ 楊茂瑜, 郎中凱. HIV 抗體外部對(duì)照質(zhì)控血清制備與應(yīng)用.中國艾滋病性病雜志.2011.17(5):582-583.

［2］ 項(xiàng)國謙, 趙紅燦, 王敏敏, 等.艾滋病病毒抗體室內(nèi)質(zhì)控血清制備及應(yīng)用評(píng)價(jià).放射免疫學(xué)雜志.2010.23(3):347-348.

［3］ 邊仕超, 馬兆瑾, 馬名駒, 等. ELISA 檢測(cè)HIV 抗體弱陽性外部質(zhì)控血漿的制備和應(yīng)用.預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)雜志.2013.29(2).149-150.

［4］ 郭志宏, 張佳峰, 夏燕, 等. 艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室ELISA 室內(nèi)質(zhì)控圖的評(píng)價(jià).中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2010.20(5):1236-1237.

［5］ 倪曉媚, 徐成芬, 曾永. ELISA檢測(cè)HIV抗體中臨界值質(zhì)控血清的制備. 浙江預(yù)防醫(yī)學(xué).2014.26(4):431-432.

［6］ 佘有彬. 質(zhì)控“即刻法”在HIV抗體ELISA檢測(cè)中的應(yīng)用探討.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志.2013.34(24):3388-3389.

［7］ 杜秀清. HIV抗體弱陽血清的制備和實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控圖的繪制. 健康大視野(醫(yī)學(xué)版).2014(10):829-830.

［8］ 宮輝, 高玲娟. 抗HIV抗體弱陽性質(zhì)控血清的制備及應(yīng)用評(píng)價(jià).中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2014.24(21):3092-3093.

［9］ 劉建軍, 李永明. ELISA檢測(cè)HIV抗體的影響因素及質(zhì)量控制措施.基層醫(yī)學(xué)論壇.2012.16(17):2231-2232.

［10］ 胡靜云, 陳善昌. ELISA檢測(cè)HIV抗體室內(nèi)質(zhì)控血清的制備與應(yīng)用.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué).2009.27(5):553-553.

［11］ 張惠榮, 耿海杰. ELISA檢測(cè)HIV抗體“即刻法”室內(nèi)質(zhì)控.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志.2005.15(4):491.

［12］ 劉穎麗, 于鵬, 邵小翠. HCV實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)方法的綜合分析.微量元素與健康研究.2014.31(6):11-12.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.36.023

2015-06-24］

213169 江蘇省常州市武進(jìn)區(qū)疾病預(yù)防控制中心