劉耀仁（鴻富錦精密電子（鄭州）有限公司,鄭州　450000）

塘虱魚組織中氟滅菌的液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測方法之建立與方法確效

劉耀仁
（鴻富錦精密電子（鄭州）有限公司,鄭州450000）

疾病的預防和治療一直是養(yǎng)殖業(yè)者的一大難題。當疾病發(fā)生時，因養(yǎng)殖密度高，環(huán)境難以改善下便容易造成養(yǎng)殖生物大量死亡，此時養(yǎng)殖業(yè)者為了減少損失與控制病害，大多都會選擇投喂藥物來治療疾病。本文主要對氟滅菌在塘虱魚中的應用進行了分析與探究。

氟滅菌；串聯(lián)質(zhì)譜儀；塘虱魚

疾病的預防和治療一直是養(yǎng)殖業(yè)者的一大難題。當疾病發(fā)生時，因養(yǎng)殖密度高，環(huán)境難以改善下便容易造成養(yǎng)殖生物大量死亡，此時養(yǎng)殖業(yè)者為了減少損失與控制病害，大多都會選擇投喂藥物來治療疾病。但使用藥物對環(huán)境造成的沖擊卻往往容易被人們所忽略，藥物的殘留就是引發(fā)后續(xù)效應的首要原因。

1　分析方法

1.1分析方法

秤取待測樣品放入50mL高速離心管中(肌肉1g；血漿、肝臟、腎臟、皮膚和脊椎骨0.1g)，加入3mL的超純水與6mL乙酸乙酯，震蕩10分鐘使其混合均勻，再于15℃下以5000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘。收集上層液放置于透明玻璃試管中，高速離心管內(nèi)的殘余物質(zhì)再加入3mL乙酸乙酯，重復萃取一次，合并二次的上層液，在45℃下使用氮氣將其吹干，加入1mL的回溶液(乙腈:水;50:50%)震蕩回溶，經(jīng)過0.22微米的filter過濾，經(jīng)過適當稀釋后，以液相層析串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)進行檢測。

1.2方法偵測極限

為了解分析方法所能偵測的最低濃度點，因此參考環(huán)境檢驗方法偵測極限測定指引NIEA-PA107確立分析方法的方法偵測極限。方法確效依據(jù)歐盟2002/657/EC決議書之規(guī)定，進行魚體組織中FLU殘留分析之確效實驗，獲得回收率、重復性、再現(xiàn)性CCα與CCβ等參數(shù)并且計算不確定度。

量測不確定度，量測不確定度的計算是參考梁(2006)的計算方式并加以修改。

建立分析殘留量檢測公式如下：

X－樣品中待測成分的含量，微克每千克；

Ax－測定液中待測成分的峰面積；

As－標準液中待測成分的峰面積；

Cx－標準液中待測成分的含量，微克每千克；

V－定容體積，mL；

m－取樣量，g

R－回收率，%

從式（1）可知，樣品中FLU測定濃度的不確定度是標準溶液濃度（Cx）、樣品質(zhì)量（m）、定容體積（V）、樣品溶液峰面積（Ax）、標準溶液峰面積（As）和回收率（R）的函數(shù)。其中峰面積為計算機自動積分所得，其不確定度可不予考慮。本次分析實驗的不確定度包含以下幾項：

（1）FLU標準溶液的不確定度：FLU標準溶液的不確定度包含有標準品純度的不確定度、標準品稱量的不確定度、標準儲備液配制的不確定度和標準溶液稀釋的不確定度構(gòu)成。

（2）樣品稱量的不確定度：天平穩(wěn)定度變異產(chǎn)生的不確定度，以肌肉樣品為例進行計算。

（3）溶液體積的不確定度：在本方法中包含樣品稀釋體積以及最終回溶體積。

（4）回收率的不確定度：因儀器狀態(tài)仍具有不確定度，故采用平均回收率做為計算不確定度之因素。

2　試驗結(jié)果

2.1方法偵測極限(MDL)：

塘虱魚各組織的MDL值如下。肌肉基質(zhì)的MDL為1.63ng/g；血漿基質(zhì)為1.25ng/ml；肝臟基質(zhì)為1.01ng/g；腎臟基質(zhì)為1.62ng/g；皮膚基質(zhì)為1.72ng/g；脊椎骨基質(zhì)為1.28ng/g。

2.2回收率與重復性：

分析塘虱魚各組織添加樣品中所含的FLU如下。300、600和900ng/g肌肉基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于88.03～93.55%，變異系數(shù)介于5.64～7.08%；血漿基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于83.19～95.05%，變異系數(shù)介于1.89～4.96%；肝臟基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于88.72～95.31%，變異系數(shù)介于5.66～7.05%；腎臟基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于83.60～95.22%，變異系數(shù)介于3.72～6.75%；皮膚基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于82.54～95.34%，變異系數(shù)介于2.73～6.07%；脊椎骨基質(zhì)添加樣品的平均回收率介于86.10～93.24%，變異系數(shù)介于2.42～6.71%。

2.3再現(xiàn)性

塘虱魚各組織的FLU分析方法重復性如下。300、600和900ng/g肌肉基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為6.89、6.44和6.17%；血漿基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.67、4.98和2.89%；肝臟基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為6.26、6.61和6.32%；腎臟基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.06、5.04和7.04%；皮膚基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為5.31、4.61和6.34%；脊椎骨基質(zhì)添加樣品的總變異系數(shù)分別為4.69、5.39和7.31%。

2.4CCα與CCβ

塘虱魚各組織的FLU分析方法之CCα與CCβ結(jié)果如下。肌肉基質(zhì)添加樣品的CCα與CCβ分別為638和667ng/g；血漿基質(zhì)添加樣品分別為693和741ng/mL；肝臟基質(zhì)添加樣品分別為621和674ng/g；腎臟基質(zhì)添加樣品分別為669和706ng/g；皮膚基質(zhì)添加樣品分別為631和671ng/g；脊椎骨基質(zhì)添加樣品分別為691和762ng/g。

3　結(jié)束語

本次實驗所建立的FLU分析方法具有萃取步驟簡單，成本低廉等優(yōu)點，其確效的各項參數(shù)如滯留時間、相對離子強度、回收率、精密度、重復性等亦符合歐盟2002/657/EC的決議書的規(guī)范。

[1]張菊香.建立畜產(chǎn)水產(chǎn)品中之喹諾酮類藥物分析方法及恩氟喹諾酮羧酸在吳郭魚中藥物動力學之研究[J].國立中山大學海洋生物科技暨資源學系博士論文,2009.

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