付宏偉,陳波,洪壽海,郭義

(天津中醫(yī)藥大學,天津 300193)

動物實驗研究是醫(yī)學研究中最常用的研究方法之一,由于動物實驗受試對象易于控制,來源有保證,實驗條件可按預先設計的要求準確控制,因而能彌補臨床研究之不足,進行許多在臨床實驗中不能進行的研究[1]。在動物實驗研究中,制備與疾病發(fā)病相似、適用的動物模型是進行實驗研究的重要基礎[2],且適宜的動物模型,可以更好的體現(xiàn)干預措施的作用特點和優(yōu)勢,提高實驗的準確性和代表性。

針灸在中國已有幾千年的歷史,雖然臨床證明針灸有效,但其作用機制尚不明確,為了闡明其科學的作用機制,進一步提高臨床療效,開展動物研究必不可少。目前,國內(nèi)外對針灸實驗動物模型的研究很多,由于針灸在不同水平上同時對機體內(nèi)多個系統(tǒng)多個靶點的功能產(chǎn)生整體調(diào)節(jié)的特點,現(xiàn)有的動物模型都未能充分地體現(xiàn)出針灸的作用特點,使得針灸的療效受到影響。因此,本文著重對目前針灸研究常用的針灸鎮(zhèn)痛動物模型的應用現(xiàn)狀進行了初步分析總結(jié),對其中存在的一些問題提出一些看法與建議,以期為讀者在針灸鎮(zhèn)痛動物模型制備方面提供一些思路。

1 常用的針灸鎮(zhèn)痛動物模型

針灸在治療上具有雙向調(diào)節(jié)作用,通過經(jīng)絡的傳導,調(diào)整氣血和臟腑功能,以其操作簡便、療效確切、無毒副反應等特點,在多種疾病的治療中取得了確切的療效。近年來相關(guān)研究[3-5]顯示,針刺臨床應用所涉及病種按系統(tǒng)分以神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)疾病為主,突出針刺在鎮(zhèn)痛方面的作用。根據(jù)病因,疼痛可分為組織損傷引起的炎癥性疼痛和神經(jīng)損傷引起的神經(jīng)性疼痛;根據(jù)部位,疼痛又分為軀體痛和內(nèi)臟痛[6]。目前,各種各樣的動物模型用于研究針灸鎮(zhèn)痛作用的效果和機制。本文筆者著重從神經(jīng)性疼痛模型、內(nèi)臟性疼痛模型、炎性疼痛動物模型等幾方面回顧了比較常用的動物模型的制備方法,并進行總結(jié)。詳見表1。

表1 常見針灸鎮(zhèn)痛動物模型造模方法

2 目前針灸鎮(zhèn)痛動物模型存在的問題

2.1 造模方法簡單,缺乏中醫(yī)特點

在針灸實驗研究中,雖然各種疼痛的動物模型已越來越廣泛地運用于針灸研究,但傳統(tǒng)的造模方法都存在一些弊端。①造模因素過于簡單,直接套用西醫(yī)藥理學模型,如潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是由免疫、遺傳、精神及心理多種因素共同作用的結(jié)果[24],乙酸灌胃等單一的造模方法不能完全反映其病機,且很難解決UC復發(fā)、交替出現(xiàn)的特點,與針灸在治療方式上存在很大差異,不能完全反映針灸的治療效果,也就無法判斷針灸治療此病的確切療效。②動物模型的中醫(yī)證候特色不強,缺乏對“本證”的認識,如用“捆綁或夾尾激怒”法制造的肝郁脾虛動物模型[25],是否屬于肝郁的范圍？是否符合該證的發(fā)病原因和臨床表現(xiàn)? 是否可以用軀體刺激來替代精神刺激? 這些問題都值得考慮。針灸對于某個病的治療并非直接針對病原或患病的組織器官,而是對機體發(fā)揮多層次多靶點的調(diào)節(jié)作用,在不同水平上同時對機體內(nèi)多個系統(tǒng)多個靶點的功能產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用,從而達到防治疾病的目的。大部分動物模型都是單純模擬西醫(yī)的病理改變,只能復制某種疾病某一方面的癥狀,體現(xiàn)針灸對于這一癥狀所發(fā)揮的治療作用,不能很好的反映針灸整體調(diào)節(jié)的效應特點。而且這種病因模型模擬的病理狀態(tài),難以體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的特征,割裂了“病”與“證”的聯(lián)系。

2.2 評價指標不統(tǒng)一,模型不穩(wěn)定

模型的成功建立是研究順利進行的首要條件,而動物模型評價指標的標準化,規(guī)范化是判定和保證研究結(jié)果可靠性,真實性和科學性的基本前提。雖然目前國內(nèi)外對實驗動物模型的研究很多,但是對模型的評價缺乏統(tǒng)一的,標準的量化指標。一方面,由于造模方法、干預因素和衡量標準等參差不齊,造成動物模型的病理損害不一致,模型的成功率和穩(wěn)定性報道不統(tǒng)一。如大鼠 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)造模法制備胃粘膜損傷模型時,由于配方比例及藥物來源不同,其造模周期,造模成功率和穩(wěn)定性方面都會存在差異,因此針灸效應的穩(wěn)定性和重復性也不盡相同。另一方面,大部分動物模型為急性模型,模型建立后檢測指標存在波動,與臨床的慢性病理過程不完全符合。如國內(nèi)外研究面神經(jīng)壓榨模型均單純以當時受損神經(jīng)病理切片在光鏡下的形態(tài)學改變作為造模成功的判定標準[26],如果卡壓時間過短,強度不夠,模型會存在自愈現(xiàn)象,這必將會影響下一步對針灸療效的客觀評價。在指標檢測方面,主要以觀察模型生理、生化、病理等客觀指標為主,而對動物的精神狀態(tài)、反應靈敏度、飲食情況、大便量及性狀等情況的記錄較少。

2.3 穴位定位標準不統(tǒng)一,實際操作有差異

腧穴的特異性描述和穴位的準確定位是針刺研究特異性和再現(xiàn)性的先決條件, 在動物身上準確模擬針灸穴位對實驗針灸研究至關(guān)重要。在針刺作用機制研究的動物實驗中,由于各地的醫(yī)師針刺時參考的圖譜和資料不同,導致穴位定位存在一定的差異,如“十五”規(guī)劃教材《實驗針灸學》中的動物穴位圖譜[1]對大鼠膈俞穴定位“在第7胸椎下兩旁肋間”,華興邦等研制的大鼠穴位圖譜[27]定位膈俞穴“在第八胸椎下兩旁,肋間,左右各一穴”,這樣參考資料不同,取穴不同,針刺效果就會存在差異。在實驗操作中,由于經(jīng)穴選取方法不一致,有研究顯示穴位與非經(jīng)非穴的針刺效應常無顯著性差異,從而否定了經(jīng)典的經(jīng)穴特異性作用理論,進而影響針灸研究結(jié)果的準確性[28]。另外,大部分實驗研究選穴時多取具有代表性的一、兩個腧穴進行研究,而在臨床治療中多是幾組腧穴配合使用,這與臨床實際操作有差異,也會影響針灸的療效。

2.4 模擬程度不高,臨床轉(zhuǎn)化存在困難

動物與人的生命現(xiàn)象,有一定的共性,這是醫(yī)學實驗中可以應用動物實驗的基礎,但人與動物在解剖、生理、病理特征和對各種因素的反應上,又存在客觀差異,如某些客觀表現(xiàn)如舌象、脈診及神志等不易在動物身上模擬出來。目前許多動物模型都已復制成功,但外源性藥物方法和手術(shù)方法所構(gòu)建的模型,不能完全模擬人體的患病狀態(tài),動物實驗結(jié)果不能完全符合人對處理因素(藥物、手術(shù)等)的反映。如國外一些學者認為電針在冷熱刺激誘發(fā)疼痛模型比機械刺激誘發(fā)疼痛模型的鎮(zhèn)痛效果可能更有效[29],這是否與實際臨床相符還有待進一步證實。雖然一些動物模型對于針灸的生理反應與臨床有相關(guān)性(如腸能動性),但這些反應與人類受試者患有的某些特定疾病(如腸易激綜合癥)的治療結(jié)果相關(guān)到什么程度尚不明確[30-31]。而且很多有關(guān)針灸基礎的生理學研究是在正常動物身上進行的,但這是否等于在患者身上的實際效果,還有待研究。如有研究[32]表明,弗氏佐劑(CFA)誘導的炎癥性老鼠模型在100HZ電針刺激時比正常老鼠產(chǎn)生更為明顯的鎮(zhèn)痛效果和更快發(fā)展的耐受性。

3 討論

針對以上存在的問題,筆者提出以下幾點建議。

在造模方法方面,研究者不應生搬硬套既有的模型,應在中醫(yī)學理論指導下,突出“證”的概念,根據(jù)實驗需要,改進現(xiàn)行單病因模型,制備符合針灸鎮(zhèn)痛作用特點的動物模型,以最大限度地突出針灸療法的治療作用。如制備心絞痛動物模型時,除了探索如何更好地控制心肌細胞缺血、缺氧,如何把握缺血和再灌注的時間等,還應該考慮人類心絞痛患者多是老年人或同時患有高血壓、高血脂等其他疾病,在造模時是否考慮選用年老的動物或通過高脂飼料喂養(yǎng)動物,增加動物血液中膽固醇含量,使動物模型更靠近中醫(yī)理論,貼近臨床,突出針灸的作用特點。

針灸的研究對象及其影響因素(如穴位定位、針刺手法、進針深度角度等)大多數(shù)是不固定的,因此針灸效應的穩(wěn)定性和重復性就會受到影響,如何在建立的動物模型上體現(xiàn)針灸的效應是針灸研究的關(guān)鍵。在模型評價體系的建立上,盡量選用大家公認的造模方法和評價指標,對于實驗造模成功所需的時間,模型自然恢復的時間,反證治療時間進行估算,使模型保持一定的穩(wěn)定性。除對生化、病理、生理等客觀指標的標準化外,還應結(jié)合動物的皮毛、糞便、進食、精神狀況以及行為學表現(xiàn)等一般特征,制定半定量的評價指標。這樣使造模評定體系宏微觀相結(jié)合,達到規(guī)范化、客觀化和科學化。

穴位選取方面,要認識到動物與人的差異,不能簡單對照人體相應位置的腧穴按比例的在動物身上模擬,而要結(jié)合解剖、生理等方面進一步探討,完善實驗動物針灸穴位與經(jīng)絡理論,使實驗動物取穴標準化、規(guī)范化,突出針灸穴位的特異性。目前國外已開始進行規(guī)范動物腧穴定位標準的準備工作,如韓國學者Yin CS等[33]在該國學者前期研究基礎上,提出了一套 121個腧穴的小鼠和大鼠模型定位系統(tǒng)。在模擬針刺療效時,應考慮根據(jù)辨證取穴,加減穴位數(shù)目,確保針灸的臨床療效。

動物實驗研究的結(jié)果在臨床適用性上有局限性,這就要求我們要客觀看待動物實驗和人體的符合率,必須考慮對于一些重要的傳統(tǒng)基礎理論概念如穴位、經(jīng)絡等,在動物和人之間是否有生理相等性;從動物實驗中得到的信息是否能代表在病人身上的治療效果,是否能直接用來指導臨床,而對于舌象,脈象等客觀指標可以從動物的皮毛色澤、活動情況、飲食及精神狀況等方面進行評估。另外,在針灸鎮(zhèn)痛研究中,大部分是瞬間或即刻有害刺激制備的急性疼痛模型,而臨床上多是長期病理損害的慢性疼痛疾病,針灸鎮(zhèn)痛研究除了正常動物和急性疼痛造模模型,也需要關(guān)注慢性疼痛疾病的動物模型,以確保研究結(jié)果與臨床試驗設計的相關(guān)性?？傊?在針灸鎮(zhèn)痛研究中,針灸可以作為一種有效的補充和替代療法來緩解疼痛,但合適的動物模型成為針灸鎮(zhèn)痛研究的瓶頸。只有使用合適的動物模型,研究結(jié)果才更具有科學性和說服力。由于其治療過程的特殊性,使針灸的效應受到多種因素的影響,如何在動物身上體現(xiàn)針灸鎮(zhèn)痛效應的穩(wěn)定性和可重復性是關(guān)鍵。因此,建立合適的、體現(xiàn)針灸鎮(zhèn)痛效應特點的模型及科學的評價方法,促進實驗動物模型的標準化研究,對針灸鎮(zhèn)痛研究至關(guān)重要。

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