嵇金如， 沈 萍， 魏澤慶， 陳艷艷， 應超群， 李蘭娟， 肖永紅

·論著·

國產和進口替加環(huán)素體外抗菌活性比較

嵇金如， 沈 萍， 魏澤慶， 陳艷艷， 應超群， 李蘭娟， 肖永紅

目的 比較替加環(huán)素國產和進口制劑對常見臨床分離菌的體外抗菌效果。方法 標準肉湯稀釋法測定國產與進口替加環(huán)素制劑對臨床分離菌株最低抑菌濃度(MIC)。結果 國產和進口替加環(huán)素制劑均具有廣譜和強大體外抗菌活性。對于腸桿菌科細菌具有良好的體外抗菌作用，MIC90≤2 mg/L，其中對大腸埃希菌MIC90為0.25 mg/L；對碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動桿菌的MIC90均分別為0.5 mg/L和2 mg/L；對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腸球菌屬MIC90均為 0.25 mg/L；對肺炎鏈球菌MIC90分別為0.25 mg/L和0.125 mg/L；對流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌MIC90≤0.125 mg/L；對嗜麥芽窄食單胞菌抗菌活性稍差，MIC90為4 mg/L；2種制劑對各種細菌敏感率幾乎相同，對各種細菌的累積抑菌曲線也幾乎重疊。結論 替加環(huán)素具有強大廣譜體外抗菌活性，對各種耐藥菌抗菌作用突出；進口與國產替加環(huán)素制劑體外抗菌效果相同。

替加環(huán)素； 體外抗菌活性； 最低抑菌濃度

替加環(huán)素是半合成四環(huán)素類藥物米諾環(huán)素的衍生物，被分類為甘氨酰環(huán)素類。該藥物具有非常廣的抗菌譜，對臨床常見耐藥菌具有強大抗菌活性，同時具有良好的藥動學特征[1-2]。本品于2005年美國食品藥品管理局(FDA)批準用于治療18歲及以上患者敏感菌所致感染，包括復雜腹腔內感染(如復雜闌尾炎、腹腔內膿腫)和復雜的皮膚及軟組織感染(如燒傷感染、深部軟組織感染和潰瘍感染)，其后也被批準為治療社區(qū)獲得性肺炎藥物[3]。

替加環(huán)素在我國沒有申請專利保護，國內制藥企業(yè)對替加環(huán)素進行了仿制并獲得我國食品藥品監(jiān)督管理總局的批準。本研究比較國產替加環(huán)素(澤坦，江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司)和進口替加環(huán)素(泰閣，輝瑞制藥有限公司產品)制劑對臨床常見細菌和主要耐藥菌的體外抗菌效果，結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源 分別收集2010―2013年浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院住院感染患者分離不重復菌株1 297株和2010―2011年全國216株苛養(yǎng)菌，細菌主要分離自血液、痰、尿、傷口分泌物等。菌株分布見表1。

質控菌株為大腸埃希菌ATCC 25922、大腸埃希菌ATCC 35218、金黃色葡萄球菌(金葡萄)ATCC 29213，為本實驗室保存。

1.1.2 抗菌藥物和培養(yǎng)基 2種注射用替加環(huán)素制劑分別為輝瑞制藥有限公司產品(泰閣)，50 mg/支(批號 AHLB/15，有效期至2014年8月)和江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司產品(澤坦)，50 mg/支(批號130401，有效期至2014年9月)，均為市售商品。使用說明：藥物加5.3 mL 0.9% NaCl配制10 g/L的溶液。Mueller-Hinton 肉湯(MHB)干粉為英國OXOID公司產品，分別用CaCl2·2H2O和MgCl2·6H2O調節(jié)陽離子至20～25 mg/L Ca2+和10～12.5 mg/L Mg2+。

1.2 方法

按照美國臨床和實驗室標準化協(xié)會(CLSI)標準[4]，微量肉湯稀釋法測定國產和進口替加環(huán)素制劑的最低抑菌濃度(MIC)，按照該標準規(guī)定的K-B法進行大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌產超廣譜β內酰胺酶(ESBL)的檢測。2種制劑均以生理鹽水配制為10 g/L的貯存液，-70 ℃保存?zhèn)溆?；測定前再進一步稀釋為1 g/L溶液，用全自動抗生素倍比稀釋系統(tǒng)(MDS-1100，大日本精機株式會社)，用調節(jié)好陽離子濃度的肉湯即CAMHB稀釋為0.015、0.03、0.06、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16 mg/L，再用全自動微孔分液系統(tǒng)(MDS-1200，大日本精機株式會社)分注到96孔板。

凍存菌株復蘇后，純培養(yǎng)鑒定，接種于MHB過夜培養(yǎng)，所得菌液進一步稀釋為 0.5麥氏濁度單位，1∶10稀釋后，用全自動菌懸液接種系統(tǒng)(MDS-1300，大日本精機株式會社)接種到預制藥物96孔板，每孔接種4 μL。96孔板置于35 ℃孵箱孵育 16 ～20 h，觀察。

表1 1 513株菌株分布

1.3 數(shù)據分析

分析2種制劑對不同細菌MIC范圍、MIC50和MIC90，繪制二者對主要細菌的累積抗菌曲線。根據美國FDA替加環(huán)素折點標準計算其對各種細菌的敏感率[3]。

2 結果

2.1 對革蘭陰性菌抗菌活性比較

國產和進口替加環(huán)素制劑對腸桿菌科細菌的MIC范圍均為0.06～8 mg/L，兩者差異不大，個別菌種MIC范圍相差一個稀釋度；對肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌和摩根摩根菌MIC90值2 mg/L，較其他腸桿菌科細菌MIC90值偏高；對鮑曼不動桿菌的MIC為0.06～16 mg/L，對碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動桿菌MIC90值均分別為0.5 mg/L和 2 mg/L；對嗜麥芽窄食單胞菌的MIC分別為0.06～8 mg/L和0.06～16 mg/L；對流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌具有相似抗菌活性，MIC90值均為 0.125 mg/L。各種革蘭陰性菌對2種制劑敏感率基本相同。見表2。

表2 國產和進口替加環(huán)素制劑對1 036株革蘭陰性菌的體外抗菌活性比較

-: no breakpoint.

2.2 對革蘭陽性菌抗菌活性比較

2種替加環(huán)素制劑對金葡菌和表皮葡萄球菌MIC范圍是0.03～0.5 mg/L，MIC90為 0. 25 mg/L。對腸球菌MIC范圍是0.03～0.25 mg/L，MIC90為 0.125 mg/L 或0.25 mg/L。對肺炎鏈球菌MIC值與其他陽性菌的MIC值相近，且MIC與細菌對青霉素的敏感性無關。2種制劑對肺炎鏈球菌MIC50值分別為0.06 mg/L和 0.125 mg/L, MIC90值分別為0.125 mg/L和0.25 mg/L。各種革蘭陽性菌對2種制劑敏感率基本相同。見表3。

2.2 國產和進口替加環(huán)素制劑累積抗菌曲線

2種制劑對各種細菌累積抗菌曲線基本重合。從圖1、圖2可見，替加環(huán)素對流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、葡萄球菌、肺炎鏈球菌和腸球菌曲線偏左，MIC值低，而對腸桿菌科、不發(fā)酵糖革蘭陰性菌曲線偏右，MIC值偏高。

表3 國產和進口替加環(huán)素制劑對477株革蘭陽性菌的體外抗菌活性比較

-: no breakpoint.

圖1 國產和進口替加環(huán)素制劑對各種革蘭陰性菌的累積抗菌曲線

3 討論

替加環(huán)素作為一種甘氨酰環(huán)素類藥物，在米諾環(huán)素9位分子上添加叔丁基甘氨酞胺基團而衍生的一種新型四環(huán)素類抗生素。由于9位替代基團形成的空間位阻作用，使其與核糖體靶位的親和性比米諾環(huán)素或四環(huán)素高5倍以上，克服了2種主要的獲得性四環(huán)素耐藥機制核糖體保護和主動外排(tet和otr基因介導)機制。因此替加環(huán)素具有廣譜抗菌活性，特別是對各種耐藥菌具有強大的抗菌活性，并已用于臨床治療[1-2,5]。

本研究表明替加環(huán)素對革蘭陰性菌，如流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌、大腸埃希菌抗菌活性非常突出，對其他腸桿菌科細菌次之，對鮑曼不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌MIC90為2～4 mg/L；對葡萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌MIC90≤0.25 mg/L。測定結果也表明，替加環(huán)素抗菌活性不受細菌特有的耐藥機制影響。本實驗結果與國內外研究報道相似[1-2,6-8]。本次研究中發(fā)現(xiàn)少量對替加環(huán)素中介和耐藥肺炎克雷伯菌，值得注意。

“澤坦”是我國江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司開發(fā)的替加環(huán)素仿制劑，于2012年由國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準上市，其適應證與進口替加環(huán)素(泰閣，輝瑞制藥有限公司)相同。本研究結果顯示，兩者均具有良好抗菌效果。與泰閣相比較，澤坦對個別細菌MIC90高一個稀釋倍數(shù)，如不產超廣譜β內酰胺酶肺炎克雷伯菌、產氣腸桿菌和肺炎鏈球菌，但兩者對所有細菌敏感率基本相同，累積抑菌曲線也基本呈重疊狀態(tài)，這種微小差異無臨床意義[4]。

鑒于成品藥物在配制過程中，制劑工藝、藥品裝量、制劑穩(wěn)定性、可溶性等均可對藥物效能造成影響[9]，本研究特意使用從市場購置國產和進口2種制劑進行比較，所得結果能反映成為藥物成品后兩者之間的情況，為臨床用藥提供直接對照數(shù)據。結果2種制劑具有幾乎相同的體外抗菌效果，這為臨床用藥提供了基本保障。

本研究為保證結果可靠準確，選擇標準肉湯稀釋法測定替加環(huán)素MIC值。大量文獻報道，可能由于替加環(huán)素本身結構與其親脂性特點，紙片擴散法測定結果與肉湯稀釋法之間存在較大差異，即使是定量E試驗擴散法，所得MIC值也較肉湯稀釋法高。Piller等[10]發(fā)現(xiàn)，E試驗測定替加環(huán)素的MIC值較肉湯稀釋法高一倍，雖然兩法一致性尚在可接受范圍，但對鮑曼不動桿菌、黏質沙雷菌和肺炎鏈球菌則差異在4倍以上；Zarkotou等[11]研究也發(fā)現(xiàn)，與肉湯稀釋法比較，VITEK2 和E試驗所得MIC值偏高，且均存在明顯大誤差；另外，K-B紙片擴散法與肉湯稀釋法也存在明顯差異[12]。有鑒于此，在進行替加環(huán)素體外抗菌活性測定時，應盡量選用肉湯稀釋法，E試驗可作為替代方法，而臨床常用的自動化藥敏測定系統(tǒng)以及K-B法結果大多不可靠。

[ 1 ] Doan TL, Fung HB, Mehta D, et al. Tigecycline: a clycylcycline antimicrobial agent[J]. Clin Ther,2006, 28(8):1079-1106.

[ 2 ] Dowzicky MJ, Park CH. Update on antimicrobial susceptibility rates among Gram-negative and Gram-positive organisms in the United States: results from the Tigecycline Evaluation and Surveillance Trail(TEST) 2005-2007[J]. Clin Ther, 2008,30(11):2040-2050.

[ 3 ] TYGACIL?(tigecycline) for injection for intravenous use initial U.S.[EB/OL]. http://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2013/021821s026s031lbl.pdf.

[ 4 ] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S]. Twenty-third infromational suplement, 2013, M100-S23.

[ 5 ] van Duin D, Kaye KS, Nueuner EA, et al. Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: a review of treatment and outcomes[J]. Diagn Microbiol Infect Dis, 2013,75(2):115-120.

[ 6 ] 張小江，徐英春, 原英, 等. 替加環(huán)素等14種抗菌藥物對多重耐藥菌的體外抗菌活性研究[J].中國感染與化療雜志，2009, 9(5): 366-368.

[ 7 ] 張冀霞，王占偉，王啟，等. 替加環(huán)素對臨床常見多重耐藥菌的體外抗菌活性研究[J]. 中華檢驗醫(yī)學雜志，2013, 36(4)：308-313.

[ 8 ] Andrasevic AT, Dowzicky MJ.Invitroactivity of tigecycline and comparators against Gram-negative pathogens isolated from blood in Europe (2004-2009)[J]. Int J Antimicrob Agent, 2012,39(2):115-123.

[ 9 ] Tattevin P, Cremieux AC, Rabaud C, et al. Efficacy and quality of antibacterial generic products approved fro human use: a system reivew[J]. Clin Infect Dis, 2014, 58(4):458-469.

[10] Piller CM, Draghi DC, Dowzichy MJ, et al.Invitroactivity of tigecycline against Gram-positive and Gram-negative pathogens as evaluated by broth microdilution and Etest[J]. J Clin Microbiol, 2008, 46(9):2862-2867.

[11] Zarkotou O, Pourmaras S, Altouvas G, et al. Comparative evaluation of tigecycline susceptibiltiy testing methods for expanded-spectrum cephalosporin-and carbapenem-resistant Gram-negative pathogens[J]. J Clin Microbiol, 2012,50(11):3747-3750.

[12] Liu JW, Ko WC, Huang CH, et al. Agreement assessment of tigecycline susceptibility determined by the disk diffusion and broth microdiltion methods among commonly encountered resistant bacterial isolates: results from the tigecyclineinVitroSurveillance in Taiwan(TIST) study,2008 to 2010[J]. Antimicrob Agents Chemother,2012,56(3):1414-1417.

Invitroantibacterial activity of imported and domestic tigecycline

JI Jinru, SHEN Ping, WEI Zeqing, CHEN Yanyan, YING Chaoqun, LI Lanjuan, XIAO Yonghong

. (Collaborative Initiative Center for Diagnosis and Treatment of Infectious Diseases, State Key Laboratory for Diagnosis & Treatment of Infectious Diseases, First Affiliated Hospital, School of Medicine, Zhejiang University, Hangzhou 310003, China)

Objective To compare theinvitroantibacterial activity of imported and domestic tigecycline against clinical isolates. Methods Standard broth microdilution method was used to determine the minimum inhibition concentration (MIC) of tigecycline against bacterial isolates.Results Both the imported and domestic tigecycline showed potent and broad spectrum antibacterial activity. Tigecycline demonstrated powerful antibacterial activity againstEnterobacteriaceaewith MIC90of≤2 mg/L. The MIC90of tigecycline was 0.25 mg/L againstEscherichiacoli. Both tigecycline products had the same MIC90against carbapenem-sensitive and -resistantAcinetobacterbaumannii, 0.5 and 2 mg/L, respectively. The MIC90s of the two tigecycline products were 0.25 mg/L againstStaphylococcusaureus,StaphylococcusepidermidisorEnterococcus. The MIC90s of domestic and imported tigecycline againstStreptococcuspneumoniaewere 0.25 and 0.125 mg/L, respectively. Both tigecycline products had significantinvitroantibacterial activity (MIC90≤0.125 mg/L) againstHaemophilusinfluenzaeandMoraxellacatarrhalis. Tigecycline showed relatively weak activity (MIC904 mg/L) againstStenotrophomonasmaltophilia. The domestic and imported tigecycline shared almost the same susceptibility rates for all the bacterial isolates tested. The cumulative bacterial inhibition curves of the two products nearly overlapped. Conclusions Tigecycline has potent and broad antibacterial activity against clinical isolates including the common resistant isolates. Both domestic and imported tigecycline have comparableinvitroantibacterial activity.

tigecycline; antibacterial activity; minimum inhibitory concentration

浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院傳染病診治國家重點實驗室，感染性疾病協(xié)同創(chuàng)新中心，杭州 310003。

嵇金如(1987—)，女，初級技師，主要從事臨床微生物檢驗和細菌耐藥性監(jiān)測。

肖永紅, E-mail:xiao-yonghong@163.com。

R978.14

A

1009-7708(2015)04-0330-05

2014-08-18

2015-02-04