祝 輝 羅自力 張國(guó)慶 何德云 杜建紅

成都軍區(qū)藥品儀器檢驗(yàn)所，四川 成都 610017

HPLC法測(cè)定中藥成分溶度參數(shù)的實(shí)驗(yàn)研究

祝 輝 羅自力 張國(guó)慶 何德云 杜建紅

成都軍區(qū)藥品儀器檢驗(yàn)所，四川 成都 610017

目的：探討高效液相色譜法用于測(cè)定中藥成分溶度參數(shù)的可行性。方法：運(yùn)用色譜理論及Hildebrand-Scatchard溶解度理論創(chuàng)立HPLC法測(cè)定化合物的溶度參數(shù)的數(shù)學(xué)表達(dá)式，利用咖啡因驗(yàn)證該理論并對(duì)大黃類成分進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果：咖啡因驗(yàn)證該法可信度高，曲線擬合所得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚溶度參數(shù)分別為39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。結(jié)論：高效液相色譜指紋圖譜構(gòu)建數(shù)學(xué)模型方法能夠同時(shí)對(duì)中藥多個(gè)組分進(jìn)行分析、測(cè)定，能夠?yàn)閱挝吨兴幩巹┑闹圃旃に囂峁┮欢ǖ睦碚摶A(chǔ)與測(cè)定技術(shù)方面的支持。

高效液相色譜法；中藥；溶度參數(shù)

中藥及復(fù)方有效多成分群的溶解規(guī)律預(yù)測(cè)是從事中藥制劑研究的前提和基礎(chǔ)[1]。目前，溶解度或總浸出物的方法來衡量中藥及復(fù)方中多成分在某一溶劑中的溶解行為并不能從理論上揭示化合物溶解的本質(zhì)規(guī)律，制約了單味調(diào)配中藥的劑型改革和中藥配伍規(guī)律的藥劑學(xué)理論的闡明[2]。本文基于HPLC中的指紋圖譜分析方法及原理，對(duì)中藥成分溶度參數(shù)進(jìn)行分析，以期為中藥制劑的現(xiàn)代化提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 HPLC指紋圖譜

中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥經(jīng)過適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，提取其化學(xué)信息并加以描述，能夠標(biāo)志該中藥材或中成藥特性的共有峰的圖譜[3]。HPLC色譜條件的選擇、穩(wěn)定性試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)是構(gòu)建HPLC指紋圖譜的主要部分。

1.1 色譜條件的選擇 應(yīng)該使中藥成分盡可能多的在HPLC中顯示出來，保持各個(gè)峰較好的分離度和峰型。此外色譜條件還要保證主要指標(biāo)成分以及活性成分能夠非常有效地進(jìn)行分離。一般將分析時(shí)間控制在4h內(nèi)。DAD檢測(cè)器的出現(xiàn)讓我們可疑選擇更多的檢測(cè)波長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)多波長(zhǎng)的同時(shí)檢測(cè)，所獲得的HPLC指紋圖譜能展示中藥多波長(zhǎng)指紋圖譜的豐富信息，用其定性和定量分析更準(zhǔn)確。進(jìn)樣量應(yīng)保持最小成分的特征峰峰面積在4位數(shù)以上。在保證以上條件的前提下，應(yīng)保持色譜條件的簡(jiǎn)單、實(shí)用。

1.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 選擇特定的時(shí)間點(diǎn)，如24h、36h及48h，對(duì)所制備的供試品溶液的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，計(jì)算本時(shí)段之內(nèi)的特征色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間與峰面積的比值的離散程度，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)<5%。

1.3 精密度試驗(yàn) 對(duì)儀器的精密度進(jìn)行考察，可通過兩種方法實(shí)現(xiàn)。①制備6～9份供試品溶液，對(duì)不同時(shí)間段內(nèi)的特征峰保留時(shí)間及峰面積進(jìn)行分析，RSD<5%為合格。②同一供試品溶液在同一個(gè)色譜條件之下，以及在同一個(gè)時(shí)間段之內(nèi)進(jìn)行6～9次的連續(xù)進(jìn)樣，對(duì)特征峰保留時(shí)間及峰面積進(jìn)行分析，RSD<3%為合格。

2 基本原理

2.1 中藥單成分保留時(shí)間與溶度參數(shù)的關(guān)系Hildebrand-Scatchard正規(guī)溶液溶解度方程與HPLC色譜原理結(jié)合的公式為：

①

②

最終計(jì)算得到

③

2.2 總量參數(shù)AT,BT,CT與指紋圖譜總量幾何平均保留時(shí)間、單成分保留時(shí)間，a，b，c的關(guān)系

④

3 材料與方法

3.1 儀器與材料 Agilent 1200高效液相色譜儀，配備DAD檢測(cè)器；梅特勒XPE型電子天平；咖啡因(批號(hào)：050605)上海試劑二廠生產(chǎn)；蘆薈大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所；乙腈為色譜純；水為Milliq水。

3.2 方法

3.2.1 供試品的制備 分別精密稱取咖啡因和大黃類藥物成分的標(biāo)準(zhǔn)品各5mg置于25 ml容量瓶中，乙腈定容至刻度，為標(biāo)準(zhǔn)液。分別量取上述大黃類藥物成分標(biāo)準(zhǔn)液1ml，混合后制成混合對(duì)照品溶液。均過膜備用。

3.2.2 色譜條件 色譜柱：安捷倫ZOBAX PLUS色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl；流動(dòng)相：乙腈和水梯度洗脫，咖啡因運(yùn)行50min，乙腈體積比由30%～100%運(yùn)行，25%～100%、15%～100%、10%～100%、5%～100%和0%～100%6個(gè)程序。大黃類藥物運(yùn)行100min，乙腈體積比由50%～100%運(yùn)行，40%～100%、30%～100%、20%～100%、10%～100%和0%～100%6個(gè)程序。

4 結(jié)果與分析

4.1 咖啡因單成分溶度參數(shù) 指紋圖譜幾何平均保留時(shí)間與總量表觀溶度參數(shù)關(guān)聯(lián)的函數(shù)表達(dá)式或數(shù)學(xué)模型，根據(jù)數(shù)學(xué)表達(dá)式計(jì)算出咖啡因在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值大小值分別為38.02 J1/2/cm3/2、38.34 J1/2/cm3/2、38.96 J1/2/cm3/2、39.23 J1/2/cm3/2、39.96 J1/2/cm3/2和40.25 J1/2/cm3/2。進(jìn)行求導(dǎo)線性法處理，δR得見表1。

表1 咖啡因?qū)?shù)線性回歸法所得溶度參數(shù)

4.2 大黃類成分溶度參數(shù) 根據(jù)數(shù)學(xué)表達(dá)式計(jì)算出蘆薈大黃素在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黃酸在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為42.02 J1/2/cm3/2、43.34 J1/2/cm3/2、44.92 J1/2/cm3/2、46.27 J1/2/cm3/2、43.35 J1/2/cm3/2和45.49 J1/2/cm3/2。大黃素在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為41.49 J1/2/cm3/2、42.43 J1/2/cm3/2、44.22 J1/2/cm3/2、44.69 J1/2/cm3/2、45.39 J1/2/cm3/2和45.99 J1/2/cm3/2。大黃素甲醚在不同洗脫條件下的溶度參數(shù)值分別為38.12 J1/2/cm3/2、39.54 J1/2/cm3/2、40.92 J1/2/cm3/2、41.47 J1/2/cm3/2、42.55 J1/2/cm3/2和43.59 J1/2/cm3/2。大黃類成分進(jìn)行求導(dǎo)線性法處理，得見表2。曲線擬合所得蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素和大黃素甲醚溶度參數(shù)分別為39.65 J1/2/cm3/2、39.10 J1/2/cm3/2、38.41 J1/2/cm3/2和36.50 J1/2/cm3/2。見表2。

表2 大黃類成分導(dǎo)數(shù)線性回歸法所得溶度參數(shù)

5 結(jié)論

本文為中藥復(fù)方藥劑學(xué)配伍規(guī)律研究搭建理論與技術(shù)平臺(tái)，該法運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，求算指紋圖譜曲線的總量零、一、二階矩。其中總量一階矩為總量保留時(shí)間對(duì)峰面積的算術(shù)平均值，而總量幾何平均保留為總量保留時(shí)間對(duì)峰面積的幾何平均值，因此可以反映整張圖譜眾多指紋峰的集中趨勢(shì)[4]。本文所測(cè)得咖啡因和大黃類成分的溶度參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道[5]基本一致，說明本方法可信。因此，高效液相色譜指紋圖譜構(gòu)建數(shù)學(xué)模型方法，能夠同時(shí)對(duì)中藥多個(gè)組分進(jìn)行分析、測(cè)定，能夠?yàn)閱挝吨兴幩巹┑闹圃旃に囂峁┮欢ǖ睦碚摶A(chǔ)與測(cè)定技術(shù)方面的支持。

[1] 賀福元，周宏灝，羅杰英，等．HPLC測(cè)定中藥成分溶度參數(shù)的理論與實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國(guó)中藥雜志，2008，33(6)：642-647．

[2] 賀福元，劉文龍，扶瑾，等．HPLC測(cè)定中藥多成分總量溶度參數(shù)的理論及實(shí)驗(yàn)研究[J]．中國(guó)中藥雜志，2010，35(8)：977-983．

[3] 李鳳麗，李進(jìn)，吳嬌．指紋圖譜技術(shù)在中藥領(lǐng)域研究中應(yīng)用現(xiàn)狀[J]．天津藥學(xué)，2014，26(3)：52-57．

[4] 張聰，金德莊．中藥山茱萸HPLC色譜指紋特征研究[J]．中成藥，2008，30(12)：1726-1731．

[5] 趙成．高效液相色譜法(HPLC)用于測(cè)定中藥成分溶度參數(shù)的研究[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8(10)：15-16．

祝輝(1979-)，男 ，四川雙流人，漢族，博士，主管藥師，主要從事臨床藥學(xué)的研究。

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1007-8517(2015)08-0012-03

2015.01.27)