孫琳，高美華，張智昆

（1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，山東 青島 266021； 2 煙臺山醫(yī)院檢驗科； 3 青島市婦女兒童醫(yī)院婦科）

細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞（CIK細胞）是將人體外周血單個核細胞在體外經(jīng)過多種細胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細胞［1］。該群細胞殺瘤活性強、殺瘤譜廣等，在臨床腫瘤治療中發(fā)揮著日漸重要的作用［2］。國際腫瘤生物治療協(xié)會的多名專家制定了免疫相關(guān)反應(yīng)評價標(biāo)準，即irRC［3］，該標(biāo)準認為可以通過測定免疫反應(yīng)指標(biāo)來評價免疫治療的效果。本研究通過比較晚期腫瘤病人在行CIK細胞治療前后的外周血T細胞亞群、自然殺傷細胞（NK細胞）和調(diào)節(jié)T細胞（Treg細胞）百分率以及白細胞介素2（IL－2）、干擾素γ（IFN－γ）的變化，旨在評價CIK細胞治療前后病人免疫狀態(tài)的改變。

1 對象與方法

1.1 研究對象

取煙臺山醫(yī)院收治晚期腫瘤病人20例（腫瘤組），男12例，女8例；年齡43～67歲，平均56歲。病人TNM分期Ⅲ期及以上，肺癌8例，原發(fā)性肝癌5例，胃癌5例，食管癌1例，乳癌1例。以查體中心體檢正常的健康成年人20例作為對照（對照組），男12例，女8例；年齡45～65歲，平均53歲。

1.2 儀器與試劑

Epics XL流式細胞儀為美國貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品，RT－6000全自動酶標(biāo)分析儀為深圳雷杜公司產(chǎn)品，流式細胞儀試劑均購自美國貝克曼庫爾特公司，細胞因子試劑盒購自深圳晶美生物科技有限公司，CIK制品由本院生物細胞治療室規(guī)范制備。

1.3 治療方法及檢測指標(biāo)

每例病人接受CIK細胞治療至少2個療程，每個療程間隔1個月。采用流式細胞儀檢測兩組T細胞亞群、Treg細胞及NK細胞百分率；采用酶聯(lián)免疫實驗測定兩組血清中細胞因子IL－2、IFN－γ的表達水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用PPMS 1.5［4］軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料數(shù)據(jù)以表示，組間比較采用t檢驗。

2 結(jié) 果

晚期腫瘤病人CIK治療前的CD3、CD4、CD8、CD4／CD8、Treg細胞、NK 細胞和IL－2、IFN－γ水平與對照組比較差異均有顯著意義（t＝2.12～3.98，P＜0.05）。CIK治療后10d，IL－2和IFN－γ水平升高，與治療前相比較差異均有顯著意義（t＝2.06～2.43，P＜0.05）；CIK治療后30d，腫瘤病人的CD4／CD8、NK細胞和IL－2和IFN－γ水平升高，Treg細胞下降，與治療前相比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝2.11～10.37，P＜0.05）。見表1、2。

表1 兩組治療前后外周血T細胞亞群、NK、Treg水平比較（n＝20，χ／%，）

表1 兩組治療前后外周血T細胞亞群、NK、Treg水平比較（n＝20，χ／%，）

組別 時間 T細胞亞群CD3 CD4 CD8 CD4／CD8NK細胞 Treg細胞對 照 組 66.32± 9.75 35.42±7.05 25.28±5.75 1.46±0.39 14.37±4.37 9.56±3.62腫瘤組 治療前 59.50±10.56 29.89±6.95 29.30±4.16 1.08±0.32 10.02±4.70 13.56±5.72治 療 10d 59.69±10.89 30.32±7.38 28.82±6.33 1.12±0.37 11.30±5.05 13.32±5.21治 療 30d 61.47± 9.73 31.95±8.22 26.34±5.72 1.33±0.42 19.17±6.22 8.71±5.05

表2 兩組治療前后細胞因子含量比較（n＝20，ρ／ng·L－1，）

表2 兩組治療前后細胞因子含量比較（n＝20，ρ／ng·L－1，）

組別 時間 IL－2 IFN－γ對照組 72.35±12.52 14.11± 3.43腫瘤組 治療前 60.23±14.10 10.34± 2.48治療10d 70.18±16.44 13.02± 4.27治 療 30d 101.26±30.17 53.66±18.42

3 討 論

T淋巴細胞主要分為輔助性T細胞（CD4）和細胞毒性T細胞（CD8），兩者的動態(tài)平衡是維持機體正常免疫應(yīng)答反應(yīng)的保障［5］。本文研究結(jié)果顯示，腫瘤病人治療前CD4下降，CD8升高，CD4／CD8明顯下降，說明腫瘤病人機體的免疫功能低下，這與文獻報道的結(jié)果一致［6］。免疫功能持續(xù)低下使得腫瘤易于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而難以治愈。NK細胞是一種殺傷腫瘤的效應(yīng)細胞，是人體自然免疫系統(tǒng)的重要組成部分［7］。本實驗結(jié)果顯示，晚期腫瘤組治療前NK細胞明顯低于健康對照組，這可能由于腫瘤的浸潤使得NK細胞的數(shù)量反應(yīng)性下降，機體對腫瘤的清除能力下降，從而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生［8］。經(jīng)過CIK治療后30d，病人NK細胞增殖迅速，機體的抗腫瘤能力增強。

Treg細胞具有免疫抑制和免疫無能兩大特征，在維持機體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、防止自身免疫性疾病的發(fā)生等方面都起到重要作用［9－10］。本文研究結(jié)果表明，晚期腫瘤病人治療前Treg細胞比例明顯高于對照組，說明病人處于免疫抑制狀態(tài)；CIK治療后30d，Treg細胞比例明顯降低，說明機體的免疫抑制狀態(tài)得到明顯改善。

本文研究結(jié)果顯示，治療后10d病人的IL－2、IFN－γ水平明顯增高，其增高早于其他免疫指標(biāo)，可以推斷CIK細胞改善免疫功能是通過分泌大量的細胞因子來完成，IL－2、IFN－γ等不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，還可以促進T細胞及NK細胞活化增殖，T細胞和NK細胞活化后又會分泌大量細胞因子，上述兩者協(xié)同作用，進一步改善病人的免疫功能，提高抗腫瘤能力。

綜上所述，CIK細胞不僅能夠直接殺傷腫瘤細胞，還能通過分泌大量細胞因子，誘導(dǎo)機體T細胞和NK細胞增殖活化，使機體處于免疫活躍狀態(tài)，明顯改善晚期腫瘤病人的免疫功能，其改善作用在治療30d左右即可達到較高水平；同時可降低腫瘤病人外周血Treg細胞水平，改善機體免疫抑制狀態(tài)，這也是CIK細胞發(fā)揮治療作用的重要途徑。

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