摘要：目的 分析孕中期行產(chǎn)前診斷孕婦羊水細胞染色體核型，探討羊水染色體檢查對診斷胎兒染色體病的臨床意義。方法 對878例孕中期具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦行羊膜腔穿刺術抽羊水進行細胞培養(yǎng)、G顯帶技術及染色體核型分析。結(jié)果 成功分析的878例羊水標本，檢出異常核型15例（1.71%），其中數(shù)目異常9例，占異常核型的60.00%；結(jié)構異常6例，在異常核型中占40.00%；檢出正常變異染色體81例（9.21%）。結(jié)論 產(chǎn)前診斷是防止異常染色體兒出生的有效手段，有利于降低出生缺陷率、提高出生人口素質(zhì)生命質(zhì)量。

關鍵詞：羊水細胞；染色體異常；染色體核型分析；產(chǎn)前診斷

降低出生缺陷提高出生人口素質(zhì)是衛(wèi)生部門的長期工作目標，當前，羊膜腔穿刺術仍然是應用最廣泛而且準確的產(chǎn)前診斷方法。收集羊水中的胎兒上皮脫落細胞進行培養(yǎng)，從而獲得胎兒染色體中期分裂相，進行核型分析，是防止染色體病患兒出生的有效手段。

1 資料與方法

1.1一般資料 2013年1月～2014年2月來我院圍產(chǎn)保健科門診及遺傳咨詢門診就診的具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦879例，年齡18～44歲，孕齡18～22+6w，其中產(chǎn)前篩查高風險551例，高齡孕婦298例，其余30例（不良孕產(chǎn)史12例，彩超提示胎兒畸形16例，先天愚型孕婦1例），孕婦要求行羊膜腔穿刺術1例。

1.2方法

1.2.1采樣 在常規(guī)無菌條件下行羊膜腔穿刺術，B超引導下進行穿刺，最初的1～2ml羊水棄去，隨后抽取羊水20ml，注入2支15ml無菌離心管中（每支10ml）離心。

1.2.2接種 羊水標本以2100r/min離心后棄上清液，加羊水培養(yǎng)基（AmnioMAX-Ⅱ）5ml于離心管中混勻后移入羊水培養(yǎng)瓶中，后置于5%CO2，37℃培養(yǎng)，按衛(wèi)生部產(chǎn)前診斷行業(yè)標準（WS322《胎兒染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與診斷技術標準》）要求分別采用兩套培養(yǎng)系統(tǒng)進行培養(yǎng)與制片。

1.2.3收獲 培養(yǎng)7d后觀察細胞生長情況，視情況換液，當培養(yǎng)瓶中有9～16個細胞克隆貼壁生長，且細胞克隆中有較多大、園、折光性強的分裂細胞時，加秋水仙素后繼續(xù)培養(yǎng)2～4h再進行收獲。

1.2.4制片 經(jīng)過低濃度胰酶短時消化、刮細胞、離心、低滲、固定等步驟，將獲得的沉淀制成細胞懸液，濕冰片滴片，每瓶培養(yǎng)物分開制片編號，經(jīng)過75℃烤片3h、G顯帶。

1.2.5分析 每例標本選擇形態(tài)適中、顯帶清楚、帶數(shù)320條以上的核型分析6個，計數(shù)20個核型，如遇有疑問的標本則需增加分析和計數(shù)的分裂相數(shù)。本實驗室從實驗到核型分析均分兩組，由兩人進行，兩組分析878例羊水染色體結(jié)果均一致。

2 結(jié)果

2.1共采集標本879例，培養(yǎng)成功878例，培養(yǎng)成功率達99.89%。在成功培養(yǎng)的878例羊水染色體分析中，核型為46，XY451例（51.37%），46，XX427例（48.63%），檢出染色體異常15例，占受檢人數(shù)的1.71%（15/878），染色體數(shù)目異常9例（60%），其中常染色體數(shù)目異常8例，分別為21三體6例，18三體1例，13三體1例；性染色體數(shù)目異常1例，核型為47，XYY；染色體結(jié)構異常6例（40%），其中羅伯遜易位3例，其他平衡易位3例；正常變異染色體81例（9.21%），其中inv（9）12例；D、G組染色體的短臂和隨體增加共46例；1、9、16號染色體異染色質(zhì)區(qū)增加共18例；Y染色體長臂增加5例。

2.2行羊膜腔穿刺術的879例孕婦，有1例孕婦術后1d出現(xiàn)下腹疼痛，因及時就診，未發(fā)生流產(chǎn)。術后均未發(fā)生感染、胎盤早剝、陰道流血、胎膜早破、羊水栓塞及胎兒損傷等并發(fā)癥。

3 討論

3.1羊膜腔穿刺術在產(chǎn)前診斷中的應用 在產(chǎn)前及時、安全、準確地診斷胎兒遺傳病，有利于醫(yī)務人員和孕婦共同協(xié)商、選擇恰當?shù)奶幚矸桨浮．a(chǎn)前診斷的方法很多，包括細胞遺傳學、生化遺傳學以及分子遺傳學等。其中通過羊膜腔穿刺、培養(yǎng)羊水細胞、進行核型分析的細胞遺傳學方法診斷胎兒染色體核型異常，是目前臨床上使用最廣泛的一種方法。羊膜腔穿刺羊水細胞培養(yǎng)是當前細胞遺傳產(chǎn)前診斷的金標準[1]。

羊膜腔穿刺是一種通過B超引導，經(jīng)腹部穿刺羊膜腔收集羊水的方法。我們在實際工作中深刻地體會到，只要嚴格遵循操作規(guī)范，積極探索操作方法，運用羊膜腔穿刺開展產(chǎn)前診斷具有非常高的臨床價值。

羊膜腔穿刺作為一種創(chuàng)傷性診斷方法，其對母親和胎兒的影響是導致孕婦及其家屬焦慮的主要原因。據(jù)文獻報道，孕中期羊膜腔穿刺的流產(chǎn)率在0.5%～1%[2]。為了減輕創(chuàng)傷，我們嚴格控制操作指征，努力預防感染，術后密切隨訪，及時處理潛在風險。在我們的臨床操作中，并沒有發(fā)生術后流產(chǎn)的情況。

多數(shù)情況下，在孕中期（18～22+6w）行羊膜腔穿刺效果較好。穿刺過早，雖然有活性的羊水細胞比例高，但羊水細胞數(shù)量不足，對胎兒損傷較大；過晚穿刺，羊水細胞活力減弱，培養(yǎng)效果欠佳[3]。

3.2羊水細胞核型分析診斷唐氏綜合征 唐氏綜合征（21三體綜合征）是常見的三體綜合征，是由于患者細胞內(nèi)多了1條21號染色體造成的。表現(xiàn)為智力中重度低下、特殊面容及各種先天畸形的綜合征，發(fā)病率為1/600～1/800[4]。在妊娠過程中，患該病的胎兒更容易流產(chǎn)、死產(chǎn)，因此孕中期的檢出率應高于新生兒[5]。在我們檢出的孕中期染色體核型異常的胎兒中，40%的為21三體綜合征，并已全部引產(chǎn)。

研究發(fā)現(xiàn)，在某些特定人群中該病的發(fā)生率明顯增高，包括：①篩查陽性者；②母親分娩時年齡35歲以上；③曾生育唐氏綜合征患兒；④父母有一方是累及21號染色體羅伯遜易位或其他平衡易位攜帶者或21號染色體鑲嵌體。對于這部分人群，是非常有必要行孕中期羊膜腔穿刺術的。在我們發(fā)現(xiàn)的6例唐氏綜合征患者中，3例孕婦為產(chǎn)前篩查高風險，2例孕婦為高齡，1例孕婦本人為唐氏綜合征患者。

3.3其他異常核型的產(chǎn)前診斷 據(jù)文獻報道，新生兒中染色體異常的發(fā)生率為1/150～1/120。其中，21三體發(fā)生率最高，其次為性染色體異常和結(jié)構性染色體異常[6]。篩選的基本原則是一方面盡可能讓所有潛在的患者被檢出，降低漏檢率，另一方面應嚴格控制接受產(chǎn)前診斷的孕婦例數(shù)，以減少診斷過程對產(chǎn)婦身體和心理的不良影響以及醫(yī)療資源的不當耗費。本研究中1例18三體和1例13三體，它們是因彩超提示畸形而作羊水穿刺，穿刺后就引產(chǎn)，其表型與染色體結(jié)果相符；1例47，XYY，它是最常見的性染色體疾病之一，小孩已出生，其表型并未見異常。XYY綜合征的產(chǎn)前診斷指征不明，多為零星發(fā)現(xiàn)。

染色體易位是染色體結(jié)構異常中最常見的情況。如果易位沒有導致遺傳物質(zhì)的丟失，并不表現(xiàn)出病理特征，即為平衡易位。親代中一方若為平衡易位攜帶者，其子代核型可能出現(xiàn)3種情況：①正常；②表型正常的平衡易位攜帶者；③不平衡易位。出現(xiàn)不平衡易位的胎兒往往流產(chǎn)，如果存活，常表現(xiàn)為不同程度的畸形或發(fā)育缺陷。因此夫婦雙方中一方為平衡易位攜帶者的，也應建議接受產(chǎn)前診斷。本研究中，發(fā)生羅伯遜易位和其他平衡易位有6例羊水標本，對其表性正常的父母作外周血染色體檢查，發(fā)現(xiàn)父母與胎兒核型一致的有5例，有1例父母染色體均正常，說明該胎兒易位為新發(fā)生的。對于6例的隨訪，已正常分娩，新生兒表型均正常。

3.4染色體正常變異的產(chǎn)前診斷 染色體變異屬遺傳多態(tài)性改變，一般不引起臨床癥狀[7]。在878例羊水細胞染色體核型中，染色體正常變異的異常檢出率為9.21%，inv（9）12例，全部為臂間倒位，D、G組染色體的短臂和隨體增加最多達46例，1、9、16號染色體次縊痕增加共18例，Y染色體長臂增加（大Y）5例。81例染色體正常變異者中有79例做了父母的外周血染色體檢查，結(jié)果均與胎兒一致。胎兒出生后進行了隨訪表型均為正常。

對于染色體病的產(chǎn)前診斷，逐漸受到醫(yī)務工作者和廣大孕產(chǎn)婦的重視。經(jīng)羊膜腔穿刺、培養(yǎng)羊水細胞、開展產(chǎn)前診斷的技術雖然相對安全、有效，但如何準確界定適用指征、改良細胞培養(yǎng)技術，尤其是如何更加精確描述染色體結(jié)構異常乃至基因的缺失、突變等，仍待我們進一步深入探索。

參考文獻：

[1]于萍，王和，袁粒星.產(chǎn)前診斷技術及其臨床應用[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15（4）：14-17.

[2]EVANS M I，WAPNER R J.Invasive prenatal diagnostic procedures 2005[J].Semin Perinatol，2005，29（4）：215-218.

[3]SEEDS J W.Diagnostic mid trimester amniocentesis：how safe？[J].Am J Obstet Gynecol，2004，191（2）：607-615.

[4]安娜，方群.產(chǎn)前篩查常見胎兒三體綜合征的進展[J].國外醫(yī)學婦產(chǎn)科學分冊，2002，29（6）：323 325.

[5]SPENCER K.What is the true fetal loss rate in pregnancies affected by trisomy 21 and how does this influence whether first trimester detection rates are superior to those in the second trimester？[J].Prenat Diagn，2001，21：788-789.

[6]SHARKEY F H，MAHER E，F(xiàn)ITZPATRICK D R.Chromosome analysis：what and when to request[J].Arch Dis Child，2005，90（12）：1264-1269.

[7]王樹玉，趙強，賈嬋.1000例遺傳咨詢患者的細胞遺傳學分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志，2000，8（4）：36.

編輯/周蕓霏