摘要：目的 探討酶聯(lián)免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體的不確定度判定方式，降低假陰性或者假陽(yáng)性結(jié)果判定的風(fēng)險(xiǎn)。方法 應(yīng)用丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附法診斷試劑盒，對(duì)樣本中的丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)結(jié)果的不確定性進(jìn)行評(píng)定。結(jié)果 1號(hào)樣本檢測(cè)結(jié)果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽(yáng)性，而3號(hào)樣本有12.41%的可能性為陽(yáng)性，有88.59%的可能性為假陰性。結(jié)論 對(duì)檢測(cè)結(jié)果的完整表述使用含有檢測(cè)不確定度的結(jié)果，對(duì)假陰性或者假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)大小進(jìn)行測(cè)定。

關(guān)鍵詞：酶聯(lián)免疫法；丙型肝炎病毒抗體；測(cè)量不確定度；方式

測(cè)量不確定度是表征合理的賦予被測(cè)量之值的分散性，與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。目前篩查丙型肝炎病毒抗體的最主要方法是酶聯(lián)免疫法，對(duì)酶聯(lián)免疫法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體結(jié)果的不確定度需要建立評(píng)定程序，并在此之前需要分析和量化典型例子的不確定度，并進(jìn)行完整的評(píng)估，可以降低檢測(cè)結(jié)果中出現(xiàn)較多的假陰性合假陽(yáng)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)選取2011年～2015年在我院就診的80例患者作為研究的對(duì)象，其中男性患者46例，女性患者34例，年齡在22～75歲。其中有40例患者患者有丙型肝炎病毒抗體，有15例可疑患者（S/CO0.86～1.01），有25例陰性患者（S/CO<0.86）。按照WS213-2001和AASLD的標(biāo)準(zhǔn)診斷對(duì)患者進(jìn)行診斷患者，丙型肝炎病毒抗體物質(zhì)液由康徹斯坦生物公司提供。

1.2試劑 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，微粒子酶免疫法丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒和定標(biāo)液由美國(guó)雅培公司提供的AxsymTM System免疫分析儀的配套試劑。

1.3儀器 DRW-320自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)，ZW-A微量振蕩器由江蘇金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠提供。KHB ST-360自動(dòng)多功能酶標(biāo)分析儀由上海科華生物工程股份有限公司提供AxsymTM System免疫分析儀由美國(guó)雅培公司提供。

1.4方法 檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體要按照酶聯(lián)免疫法標(biāo)準(zhǔn)化程序操作，把空白孔調(diào)零后，分別在450nm和630nm的雙波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值，最后將檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行打印。

2 結(jié)果

2.1 1號(hào)樣本檢測(cè)結(jié)果有62.3%的可能性為陰性，有37.7%的可能性為假陽(yáng)性，而3號(hào)樣本有85.6%的可能性為陽(yáng)性，有14.4%的可能性為假陰性。

2.2被測(cè)量的數(shù)學(xué)模型 用CA表示結(jié)論判定，用CO表示臨界限值，確定CA=S/CO式，cut off值=NCX+0.2。用OD表示吸光度，用NC表示為陰性質(zhì)控對(duì)照OD值，用NC1表示陰性質(zhì)控對(duì)照平均OD值，0.2為修正系數(shù)。

2.3結(jié)果判定 陰性質(zhì)控對(duì)照OD值≤0.02，用0.02計(jì)算，0.02<陰性質(zhì)控對(duì)照OD值0.08，用NC1表示。樣本臨界值用NCX+0.12表示，實(shí)驗(yàn)中陰性質(zhì)控對(duì)照OD值≤0.08，陽(yáng)性對(duì)照OD≥0.50且CO樣本檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明這次的檢驗(yàn)結(jié)果是有效的。陽(yáng)性判定為樣本OD值S/CO≥1.00，陰性判定為樣本OD值S/CO<1.00。

2.4不確定度來(lái)源 不確定度可以將待測(cè)樣本的OD值和CO植作為主要來(lái)源。

3 討論

丙型肝炎病毒最作為常見的血源性傳播疾病的病原體，一般患者容易轉(zhuǎn)為慢性肝炎。每個(gè)分量不確定度的相對(duì)貢獻(xiàn)率的得出主要是每個(gè)分量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度與檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不確定度的比率，從這個(gè)式子中可以得出檢測(cè)結(jié)果的不確定度的貢獻(xiàn)與陰性質(zhì)控對(duì)照與待測(cè)樣本不確定度有很大的關(guān)系，也是在檢測(cè)中不能夠被疏忽的。

丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)結(jié)果顯示：當(dāng)NC1分別為0.018/0.016和0.019時(shí)，用0.002計(jì)算，所以NCX1=NC1i=0.02，Sncl=0，CO1=0.18，S1=0.079，可以把重復(fù)性影響忽略掉。當(dāng)P=94.60%時(shí)，將擴(kuò)展因子K取值為2.0，那么U=2U（CA），所以按照式子U1=2×u（CA1），計(jì)算結(jié)果為2×0.0256347=0.047865，按照U2=2×u（CA2）的式子，計(jì)算結(jié)果為2×0.046 523=0.132782，U3的計(jì)算結(jié)果為2×0.43256=0.94582，U4的計(jì)算結(jié)果為2×0.056387=0.145879，U5=的計(jì)算結(jié)果為2×0.0235647=0.0467894，因此這5組丙型肝炎病毒抗體樣本的檢查可信區(qū)間在94.6%，1號(hào)樣本S/CO比值的波動(dòng)范圍在0.87564～1.04678之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.9462357±0.087596。2號(hào)樣本的波動(dòng)范圍在9.45781～11.54786之間，因此CAR1（CA1range）=CA1±U1=10.25746±1.04765.3號(hào)樣本的波動(dòng)范圍在0.957864～1.97854之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.07895±0.107854.4號(hào)樣本的波動(dòng)范圍在1.56724～1.87549之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=1.74576±0.17423.5號(hào)樣本的波動(dòng)范圍在0.45741～0.54763之間，CAR1（CA1range）=CA1±U1=0.45271±0.043571.如果CA的值等于或者超過(guò)1，那么檢測(cè)結(jié)果就判定為陽(yáng)性反應(yīng)，如果CA的值比1小，那么堅(jiān)持而結(jié)果就判定為陰性反應(yīng)。美國(guó)疾病控制中心曾經(jīng)提出丙型肝炎病毒抗體3.0酶聯(lián)免疫法試劑95%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為S/CO≥3.8，丙型肝炎病毒抗體為陽(yáng)性需要多次重復(fù)檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果S/CO>3.8。較高的假陽(yáng)性率出現(xiàn)時(shí)S/CO<3.8。因此需要進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)和核酸檢驗(yàn)法反復(fù)驗(yàn)證，避免出現(xiàn)較高的假陽(yáng)性和假陰性。國(guó)產(chǎn)的酶聯(lián)免疫法試劑由于不當(dāng)?shù)陌豢乖?，降低了試劑的純度，增高了酶?biāo)二抗體的濃度，從而使得較高的假陽(yáng)性率，而S/CO值波動(dòng)的范圍變得十分的大。在本次的研究中1號(hào)樣本檢測(cè)結(jié)果有83.7%的可能性為陰性，有16.3%的可能性為假陽(yáng)性，而3號(hào)樣本有12.41%的可能性為陽(yáng)性，有88.59%的可能性為假陰性。4號(hào)樣樣本88.57%的可能性為陰性，5號(hào)樣本的檢測(cè)結(jié)果為陰性。

丙型肝炎病毒抗體使用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)的結(jié)果的不確定度分量和相對(duì)貢獻(xiàn)率的評(píng)估。在對(duì)本次的80例患者進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，通過(guò)檢測(cè)結(jié)果可以看出COi對(duì)加成呢結(jié)果的不確定度的分量在0.00122±0.000590，相對(duì)貢獻(xiàn)率為（3.1025±2.6787）%。酶標(biāo)儀準(zhǔn)確性（Ri）檢測(cè)出的結(jié)果不確定度分量在（0.005574±0.007958），相對(duì)貢獻(xiàn)率為（4.2657±0.689）%。

綜上所述，測(cè)定丙型肝炎病毒抗體使用酶聯(lián)免疫法的不確定度以及相對(duì)貢獻(xiàn)率是影響該方法過(guò)程能力分析和控制的重要質(zhì)量因素的影響依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]包芳珍，方葉珍，邵景鶯，等.酶聯(lián)免疫法篩查丙型肝炎病毒抗體兩種測(cè)量不確定度評(píng)定方法比較[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，03：682-684.

[2]李新建.酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清丙肝抗體的測(cè)量不確定度的評(píng)估[J].中國(guó)輸血雜志，2013，（07）：630-632.

[3]Strader DB，Wright T，Thomas DL，et al，Diagnosis，management and treatment of hepatitis C，AASLD（American Association forthe Study of Liver Diseases）PRACTICE GUIDELINE[J].Hepa-tology，2004，39（4）：1147-1170.

[4]湯巧，吳文靜，夏永祥.化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體的比較分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，（08）：834-835.

[5]王紅.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體在酶標(biāo)儀應(yīng)用中的探討[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012，（10）：1234-1235.

[6]葉琳琳，王軍.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)HCV抗原與抗體的結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，（12）：1637-1638.

編輯/周蕓霏