摘 要:本文在對冬棗黃酮進(jìn)行提取的過程中,應(yīng)用的主要方法是超聲波提取法,試驗(yàn)以正交試及單因素為主,在對冬棗黃酮提取過程中的材料、方法及結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)探討的基礎(chǔ)上,對LD50和S180荷瘤小鼠的測定及抗氧化展開了研究。
關(guān)鍵詞:冬棗黃酮;提??;抗氧化
DOI:10.16640/j.cnki.37-1222/t.2015.22.029
0 前言
在科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步的背景下,我國農(nóng)業(yè)技術(shù)也取得了一定成績,近年來,多種鮮食果品新品種得到開發(fā),冬棗就是其中的一種,它具有晚熟的特性,山東及河北等地是其主要生長基地。在進(jìn)一步對其進(jìn)行研究的過程中人們發(fā)現(xiàn),冬棗具有較高的營養(yǎng),同時(shí)該果品當(dāng)中還擁有大量的黃酮,這一物質(zhì)對于細(xì)菌、疾病的預(yù)防以及植物生長過程中開花和結(jié)果都發(fā)揮著非常重要的功能。在這種情況下加強(qiáng)對冬棗黃酮的提取及其抗氧化作用的探討具有重要意義。
1 冬棗黃酮的提取
在將黃酮從冬棗中進(jìn)行提取的過程中,主要實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇y定其抗氧化活性。提取工藝的研究以正交實(shí)驗(yàn)法為主進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),經(jīng)過實(shí)驗(yàn)對最佳提取時(shí)機(jī)進(jìn)行確立,從而為開展更深入的冬棗成分提取打下良好的基礎(chǔ)。
(1)具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。在對冬棗中黃酮進(jìn)行提取之前,首先將其進(jìn)行冷凍,實(shí)驗(yàn)中所需不同試劑都是分析純試劑,如乙醇、三氯化鐵和三氯乙酸等;實(shí)驗(yàn)過程中所需的儀器包括超聲波清洗機(jī)、粉碎機(jī)、SK-1快速混均器和真空干燥箱 DZF6050等[1]。
實(shí)驗(yàn)具體步驟如下:溫室中將冷凍過的鮮棗進(jìn)行解凍處理,在絞碎鮮棗的過程中要充分運(yùn)用粉碎機(jī),提取過程中應(yīng)用多種溶劑,并對其進(jìn)行離心過濾。在對提取效果進(jìn)行評定的過程中應(yīng)以不同的抗氧化活性為基礎(chǔ)。
在測定其抗氧化活性的過程中,應(yīng)用鐵氰化鉀,該活性標(biāo)準(zhǔn)缺陷的制定以蘆丁為基礎(chǔ)。具體步驟如下:取磷酸緩沖溶液2.5毫升,它擁有6.6的pH值,取不同濃度蘆丁溶液,將磷酸緩沖溶液分別滴入其中,并加入1毫升濃度為百分之一的鐵氰化鉀,均勻攪拌過后,在五十?dāng)z氏度的基礎(chǔ)上持續(xù)加熱二十分鐘。并進(jìn)行快速冷卻,接下來將2.5毫升、濃度為百分之十的三氯乙酸加入其中,并在十分鐘內(nèi)進(jìn)行3500轉(zhuǎn)離心分離。接下來將產(chǎn)生的的溶液取出2.5毫升在加入FeCl3過后對其進(jìn)行均勻攪拌,帶溶液徹底靜止后對其吸光度進(jìn)行測試。吸光度值越小代表抗氧化性越弱。
在進(jìn)行超聲波提取試驗(yàn)的過程中,首先科學(xué)設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案,具體步驟如下:在具塞試管中滴入五十毫升冬棗漿,將其置入超聲波清洗劑當(dāng)中,十五分鐘離心處理之后對產(chǎn)生的溶液進(jìn)行抗氧化活性測定。單因素實(shí)驗(yàn)應(yīng)最先開展,在此基礎(chǔ)上正交試驗(yàn)為L9(34),這樣一來能夠?qū)r(shí)間、比例及濃度進(jìn)行科學(xué)的選擇,促使冬棗黃酮提取過程中最佳工藝參數(shù)得以產(chǎn)生。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。在測定總抗氧化活性的過程中,橫坐標(biāo)應(yīng)用蘆丁這一基礎(chǔ),縱坐標(biāo)為吸光值。確定濃度不同的溶液吸光值選擇的點(diǎn)為700nm,這樣一來就能夠得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,并確定回歸方程:y=0.0038x-0.0069和r=0.9995。
接下來就是確定超聲波提取法最佳工藝參數(shù),此時(shí)需要對乙醇相關(guān)提取工藝進(jìn)行深入考察,在單因素實(shí)驗(yàn)背景下,正交實(shí)驗(yàn)同樣應(yīng)用L9(34),這樣就能夠得到溫度、濃度、比例等限制提取效果的相關(guān)因素。經(jīng)對比可知,相關(guān)因素當(dāng)中,影響最大的是時(shí)間,影響最小的是乙醇溶液的濃度[2]。
在進(jìn)行冬棗黃酮提取的過程中應(yīng)用超聲波提取具有以下優(yōu)點(diǎn),即簡單的操作、時(shí)間短和高效率等?,F(xiàn)階段這種方法被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析實(shí)驗(yàn)當(dāng)中。提取過程中包含多種方式,而“空化”作用是應(yīng)用超聲波提取的最主要原因,同時(shí),值得注意的是在對熱不穩(wěn)定的植物進(jìn)行提取的過程中應(yīng)用超聲波是非常有效的,這是因?yàn)檫@種方法不需要進(jìn)行加熱。
2 LD50和S180荷瘤小鼠的測定及抗氧化作用研究
通常狀況下,氧化與抗氧化在機(jī)體當(dāng)中通常能夠保持一種動態(tài)的平衡,一旦不同原因?qū)е聶C(jī)體出現(xiàn)較高的自由基水平,將使抗氧化能力大大減弱,從而導(dǎo)致一系列嚴(yán)重疾病,如癌癥和衰老迅速等。對于這些疾病的預(yù)防就要從抗氧化損傷入手,而冬棗中含有的黃銅就具有較高的抗氧化損傷功能,在這種情況下,加強(qiáng)對其抗氧化作用的研究具有重要意義。以下針對冬棗黃酮對LD50和S180荷瘤小鼠的抗氧化作用進(jìn)行了詳細(xì)的研究。
(1)半數(shù)致死量(LD50)的測定。實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)用昆明種小鼠十六只,雌雄各八只,將其進(jìn)行隨機(jī)分配成四組。在不限制飲水的狀況下,分別將不同劑量的冬棗黃酮提取物灌入其胃中,并詳細(xì)記錄其產(chǎn)生的不同癥狀及死亡特征。如果未發(fā)現(xiàn)死亡或中毒癥狀,則應(yīng)逐漸加大劑量重新實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過仔細(xì)觀察,死亡和中毒現(xiàn)象都沒有發(fā)生,當(dāng)該劑量達(dá)到五千毫克每千克時(shí)同樣安全,這說明該液體屬于五毒級。
(2)對S180荷瘤小鼠的抗氧化作用研究。應(yīng)用昆明種小鼠五十只,確定其健康程度,將其進(jìn)行普通水適應(yīng)性喂養(yǎng)七天之后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將環(huán)磷酞胺液體注射入實(shí)驗(yàn)物體內(nèi),將五十只小鼠分為五組,分別進(jìn)行腫瘤對照、EED和CY對照等。將其中一組放置于無菌空間中,對接種了7d的S180荷瘤小鼠的腹水進(jìn)行抽取,運(yùn)用顯微鏡進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)其中擁有百分之九十五的活細(xì)胞,運(yùn)用生理鹽水對其進(jìn)行稀釋,并在實(shí)驗(yàn)物皮下進(jìn)行注射,每只注射0.2毫升。
接種過后二十四小時(shí),對于不同分組的小鼠進(jìn)行不同程度的干預(yù),例如,對于CY組,每日應(yīng)用二十毫克每千克的環(huán)磷酞胺進(jìn)行灌胃,以后每隔一天進(jìn)行一次腹腔注射。
經(jīng)過實(shí)驗(yàn),對實(shí)驗(yàn)物的一般狀態(tài)進(jìn)行了掌握,通常狀況下,小鼠的生存質(zhì)量都保持良好,同時(shí)擁有良好的活動情況及精神狀態(tài),對其皮毛進(jìn)行觀察的過程中可以發(fā)現(xiàn),其始終保持光潔,體內(nèi)腫瘤的生長速度也能夠得到有效控制。由此可以看出,冬棗黃酮對于抑制腫瘤和細(xì)菌具有重要作用。
3 結(jié)論
本文通過運(yùn)用超聲波提取法,有效確定了冬棗黃酮提取的最佳工藝條件,并在昆明小鼠實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對黃酮的抗氧化作用及抑制細(xì)菌生長功能進(jìn)行了詳細(xì)的分析。實(shí)驗(yàn)表明,現(xiàn)階段在科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步的背景下,我國應(yīng)積極加強(qiáng)對冬棗這一新果品的種植,并對其中的黃銅進(jìn)行大量提取,加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)研究,逐漸提高其抗氧化功能,為人類醫(yī)學(xué)等方面的進(jìn)步做貢獻(xiàn)。
參考文獻(xiàn):
[1]胡迎芬.冬棗黃酮的提取分離及抗氧化、抑瘤活性研究[D].青島大學(xué),2009.