摘 要：2014年，對全省14個市和58個縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室開展了檢測能力比對，比對項目包括H7N9亞型流感抗體檢測、豬瘟抗體檢測、高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸檢測、雞白痢抗體檢測。比對結(jié)果表明，有11個市級實(shí)驗(yàn)室和47個縣級實(shí)驗(yàn)室比對結(jié)果全部正確。其中H7N9 亞型流感抗體檢測項目實(shí)驗(yàn)室正確率為95.77 %，豬瘟抗體檢測項目實(shí)驗(yàn)室正確率為100 %，高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸檢測項目實(shí)驗(yàn)室正確率為75.68 %，雞白痢抗體檢測項目實(shí)驗(yàn)室正確率為100 %。比對結(jié)果說明市縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室HI、ELISA和平板凝集方法檢測抗體的技術(shù)掌握較好，而用熒光RT-PCR檢測病毒核酸的技術(shù)能力有待提高。

關(guān)鍵詞：獸醫(yī)；實(shí)驗(yàn)室；檢測；能力比對

中圖分類號：S854.4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）03-0058-04

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)著動物疫病診斷、監(jiān)測、檢測、流行病學(xué)調(diào)查以及其它與動物防疫相關(guān)的技術(shù)工作，為動物防疫工作提供技術(shù)支持。獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對，是評價獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)水平的重要手段，也是加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的有效方法。2011年開始，按照農(nóng)業(yè)部有關(guān)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對的文件要求，遼寧省組織市縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室實(shí)施檢測能力比對工作，對提升市縣級實(shí)驗(yàn)室的檢測能力起到了極大的促進(jìn)作用。2014年，全省再次開展了市縣級實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對工作。

1 比對范圍

14個市級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，58個縣級獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室。

2 比對方法

2.1 比對項目設(shè)置

14個市和24個生豬調(diào)出大縣實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行H7N9亞型流感抗體檢測，豬瘟抗體檢測高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸檢測3個項目的比對；其他34個縣級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行H7N9亞型流感抗體檢測，豬瘟抗體檢測，雞白痢抗體檢測3個項目的比對。每個項目設(shè)置6個檢測樣品。

2.2 比對檢測方法

針對設(shè)置的比對項目，統(tǒng)一采用國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或國家參考實(shí)驗(yàn)室推薦的方法，見表1。

2.3 比對樣品的制備與發(fā)放

制備方式：由遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心禽病科、畜病科完成相應(yīng)比對樣品的制備、標(biāo)定、分裝，并將樣品和標(biāo)定值送交體系科統(tǒng)一保存。體系科對比對樣品統(tǒng)一編號后，作為盲樣下發(fā)使用。

樣品發(fā)放：各市縣實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定日期統(tǒng)一到遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心領(lǐng)取，并在8 h內(nèi)帶回所在實(shí)a驗(yàn)室。

比對試劑：由遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心公布標(biāo)定比對樣品所用試劑的生產(chǎn)廠家、品種和批號，各市縣實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備試劑。

2.4 結(jié)果評判標(biāo)準(zhǔn)

H7N9亞型流感抗體檢測評判標(biāo)準(zhǔn)：檢測值與參考值的偏差不超過1個滴度，判為結(jié)果準(zhǔn)確。

豬瘟抗體檢測評判標(biāo)準(zhǔn)：陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸檢測評判標(biāo)準(zhǔn)：強(qiáng)陽性和弱陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

雞白痢抗體檢測：陽性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陽性”；陰性樣品的檢測結(jié)果應(yīng)為“陰性”。

2.5 比對結(jié)果的遞交

市縣實(shí)驗(yàn)室在收到樣品之日起2 d內(nèi)完成檢測，并將檢測結(jié)果傳真至遼寧省動物疫病預(yù)防控制中心體系科；同時，出具正式的檢驗(yàn)報告，快遞送達(dá)體系科。

3 結(jié)果分析

3.1 總體結(jié)果

根據(jù)比對結(jié)果評判標(biāo)準(zhǔn)，在14個市級實(shí)驗(yàn)室中，有11個市所有比對項目的檢測結(jié)果全部正確，占78.57 %，出現(xiàn)較大偏差的檢測項目為用熒光RT-PCR方法檢測高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸（表2）。在24個生豬調(diào)出大縣實(shí)驗(yàn)室中，23個實(shí)驗(yàn)室參加了本次比對，有14個所有比對項目的檢測結(jié)果全部正確，占60.87 %，出現(xiàn)較大偏差的檢測項目為用血凝-血凝抑制試驗(yàn)方法檢測H7N9亞型流感抗體和用熒光RT-PCR方法檢測高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸（表3）。34個其他縣級實(shí)驗(yàn)室中，有33個所有比對項目的檢測結(jié)果全部正確，占97.06 %，出現(xiàn)較大偏差的檢測項目為用血凝-血凝抑制試驗(yàn)方法檢測H7N9亞型流感抗體（表4）。

3.2 比對項目分項分析

H7N9亞型流感抗體血凝-血凝抑制試驗(yàn)檢測項目。檢測樣品總計426份，結(jié)果正確樣品423份，總正確率99.3 %。參加比對的71個實(shí)驗(yàn)室中，68個實(shí)驗(yàn)室檢測樣品結(jié)果全部正確，占95.77 %；其中，14個市級檢測樣品84份，正確率100 %；參加比對的57個縣級實(shí)驗(yàn)室檢測樣品342份，正確率99.12 %，54個實(shí)驗(yàn)室檢測樣品結(jié)果全部正確，占94.74 %。

豬瘟病毒抗體ELISA檢測項目。檢測樣品總計426份，結(jié)果準(zhǔn)確樣品426份，總正確率100 %。參加比對的71個實(shí)驗(yàn)室正確率100 %。

高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸熒光RT-PCR檢測項目。檢測樣品總計222份，結(jié)果準(zhǔn)確樣品210份，總正確率94.59 %。參加比對的37個實(shí)驗(yàn)室中，28個實(shí)驗(yàn)室檢測樣品結(jié)果全部正確，占75.68 %；其中，14個市級實(shí)驗(yàn)室檢測樣品84份，正確率96.43 %，11個市級實(shí)驗(yàn)室檢測樣品結(jié)果全部正確，占78.57 %；23個生豬大縣實(shí)驗(yàn)室檢測樣品138份，正確率93.48 %，17個實(shí)驗(yàn)室檢測樣品結(jié)果全部正確，占73.91 %。

雞白痢抗體平板凝集試驗(yàn)檢測項目。檢測樣品總計204份，結(jié)果正確樣品204份，總正確率100 %。參加比對的34個縣級實(shí)驗(yàn)室正確率100 %。

4 討論

4.1 從比對結(jié)果總體來看，本次設(shè)置的4個項目中，豬瘟抗體檢測ELISA 檢測項目和雞白痢抗體平板凝集試驗(yàn)檢測項目準(zhǔn)確度最高，H7N9亞型流感抗體血凝-血凝抑制試驗(yàn)方法檢測項目次之，高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸熒光RT-PCR方法檢測項目準(zhǔn)確度最低。

4.2 H7N9亞型流感抗體血凝-血凝抑制試驗(yàn)方法檢測項目，3個縣級實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)較大偏差。比對結(jié)果正確率比前幾年雖然有較大提高，但通過平時的檢查發(fā)現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)室未完全按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T118936-2003）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作，或?qū)嶒?yàn)室人為操作手法不規(guī)范等問題，這是影響我省市縣兩級實(shí)驗(yàn)室血凝-血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果與參考值不能完全符合的主要原因。說明在涉及影響因素較為多并且復(fù)雜的血凝-血凝抑制試驗(yàn)方法中，還需要加強(qiáng)訓(xùn)練，提高操作的標(biāo)準(zhǔn)化程度，進(jìn)一步提高準(zhǔn)確度。

4.3 豬瘟病毒抗體ELISA檢測項目，71個實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果與參考值完全一致；雞白痢抗體平板凝集試驗(yàn)檢測項目，34個縣區(qū)實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果與參考值完全一致。說明我省實(shí)驗(yàn)人員對ELISA實(shí)驗(yàn)和平板凝集試驗(yàn)操作熟練，結(jié)果準(zhǔn)確率高。

4.4 高致病性豬藍(lán)耳病病毒核酸熒光RT-PCR方法檢測項目，3個市級實(shí)驗(yàn)室和6個生豬調(diào)出大縣實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)較大偏差，說明個別市級實(shí)驗(yàn)室分子生物學(xué)檢測能力尚需提高，實(shí)驗(yàn)原理、結(jié)果判定與分析、實(shí)驗(yàn)操作細(xì)節(jié)的把握等方面能力還需加強(qiáng)，而生豬調(diào)出大縣分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室剛剛建設(shè)完成，經(jīng)過省、市疫控中心的培訓(xùn)，初步具備分子生物學(xué)檢測能力，但由于檢測項目開展時間短，檢測數(shù)量少，操作不夠熟練，還需要進(jìn)一步強(qiáng)化培訓(xùn)，增加檢測數(shù)量，提高檢測熟練度和準(zhǔn)確度。

4.5 從實(shí)驗(yàn)室的原始記錄和檢測結(jié)果報告上看，各實(shí)驗(yàn)室不同程度存在記錄與報告填寫不規(guī)范的現(xiàn)象。部分實(shí)驗(yàn)室原始記錄操作過程沒有詳細(xì)記錄，出現(xiàn)修改的地方?jīng)]有按規(guī)定標(biāo)記和簽字確認(rèn)。個別實(shí)驗(yàn)室的報告缺乏樣品狀態(tài)的描述，結(jié)果表述方式存在問題。

4.6 獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測能力是動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)建設(shè)的基礎(chǔ)，是技術(shù)支撐的核心所在，其所出具的檢測數(shù)據(jù)直接作為政府部門制定動物疫病防控策略的依據(jù)。要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系管理，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室檢測工作全程監(jiān)管，嚴(yán)格控制檢測質(zhì)量，確保實(shí)驗(yàn)室檢測科學(xué)規(guī)范，檢測數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠?！酢?/p>