張 鶴，孟憲生，朱禹澎，畢 帥，李 征

(1.遼陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 遼陽(yáng) 111000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

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哮喘類中藥制劑中非法添加化學(xué)藥品檢測(cè)方法研究

張 鶴1，孟憲生2*，朱禹澎1，畢 帥1，李 征1

(1.遼陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 遼陽(yáng) 111000；2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的：建立快速、準(zhǔn)確、高靈敏度測(cè)定哮喘類中藥制劑中非法添加醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松的分析方法，并對(duì)10批市售藥品進(jìn)行檢測(cè)。方法：采用TLC法對(duì)非法摻入的化學(xué)藥物進(jìn)行定性鑒別，并以HPLC法測(cè)定含量，采用C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水(40∶60)為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。結(jié)果：市售藥品中，3批樣品檢測(cè)出非法摻有醋酸潑尼松，其重量百分含量分別為0.4237%、0.5061%、0.6035%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、選擇性強(qiáng)、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以有效檢測(cè)出哮喘類中藥制劑中非法添加的糖皮質(zhì)激素類化學(xué)藥品。

哮喘類中藥制劑；高效液相色譜法；糖皮質(zhì)激素；醋酸潑尼松

哮喘作為常見(jiàn)病、多發(fā)病，已成為嚴(yán)重威脅公眾健康的一種主要慢性疾病，哮喘本身不易治療，且易引起許多其他疾病。中藥以其療效獨(dú)特、毒副作用小、安全有效的特點(diǎn)在治療慢性病方面雖有其優(yōu)勢(shì)，但短期療效不如西藥理想。近年來(lái)，一些不法生產(chǎn)廠家及私人診所為了迎合患者用藥不良反應(yīng)少、見(jiàn)效快的需求，以純中藥制劑之名、行添加化學(xué)藥之實(shí)，在中成藥中非法添加化學(xué)藥品，患者在毫不知情的情況下長(zhǎng)期、大量服用此類制劑，極易引發(fā)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，損害身體健康[1]。本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-7]，擬建立檢測(cè)方法，對(duì)哮喘類中藥制劑中非法添加的五種糖皮質(zhì)激素類化學(xué)藥品(醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松)進(jìn)行定性和定量分析。建立了快速、準(zhǔn)確的分析方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津公司2010高效液相色譜儀，LC-10AT vp輸液泵，SPD 10Avp可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器，TA-130柱溫箱，ANASTAR色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

1.2 試劑與試藥

對(duì)照品：醋酸潑尼松(10012-0105)，醋酸氫化可的松(0013-0106)，潑尼松(100199-199401)，醋酸地塞米松(100122-200804)，地塞米松(100129-200303)，以上對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水，10批樣品購(gòu)于藥房及私人診所。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC法測(cè)定

2.1.1 供試品溶液制備 取樣品約一次性用量，加甲醇適量，超聲溶解20min，濾過(guò)，將濾液于水浴上蒸干，加甲醇1mL使溶解，即得。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 取醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、潑尼松、醋酸地塞米松、地塞米松對(duì)照品適量，加甲醇制成各含1mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.3 薄層色譜法 按薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10μL，對(duì)照品溶液各5μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮(1.5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視。結(jié)果顯示，有3批供試品在醋酸潑尼松處出現(xiàn)陽(yáng)性斑點(diǎn)。

2.2 HPLC法測(cè)定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(40∶60)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為240nm。

2.2.2 對(duì)照品溶液配制 取上述5種對(duì)照品溶液各10mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，制成0.1mg/mL的儲(chǔ)備液。分別精密吸取儲(chǔ)備液，甲醇適量稀釋，制成每1mL中約含1、5、10、25、50μg的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.3 供試品溶液配制 取樣品適量，研勻，精密稱取一次口服劑量，加甲醇適量溶解，定容至50mL容量瓶中，超聲提取20min，放冷，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾，精密吸取2mL，加流動(dòng)相定容至10mL容量瓶中，過(guò)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，備用。

2.2.4 空白溶液配制 取TLC法鑒別項(xiàng)下未檢出添加化學(xué)藥品的供試品，按上述供試品制備方法配制，制成空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由色譜圖可知，各目標(biāo)對(duì)照品分離度良好，空白溶液中的中藥成分不干擾測(cè)定。見(jiàn)圖1。

圖1 供試品(A)、對(duì)照品(B)、空白(C)色譜

2.3.2 檢測(cè)限 以信噪比為3∶1時(shí)的對(duì)照品進(jìn)樣量作為檢測(cè)限，醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、潑尼松、醋酸地塞米松、地塞米松的檢測(cè)限分別為1.2、1.1、1.4、1.3、1.3ng。

2.3.3 線性關(guān)系試驗(yàn) 取各組分濃度約為 1、5、10、25、50μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰峰面積。以對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)(X)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，各組分濃度在1～50μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性關(guān)系考察結(jié)果

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液分別于0、2、4、6、12h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積，計(jì)算RSD。結(jié)果表明，對(duì)照品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。5種目標(biāo)對(duì)照的RSD分別為0.61%、0.59%、0.68%、0.49%、0.72%。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品(含醋酸潑尼松)精密稱定6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，吸取10μL注入高效液相色譜儀，將峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。結(jié)果RSD為1.3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 回收率試驗(yàn) 取不含添加化學(xué)物質(zhì)的中藥制劑1批，稱取9份，每份取1次口服劑量，分別加入5種對(duì)照品0.5、1.0、2.5mg，每個(gè)濃度平行配制3份，按供試品制備方法項(xiàng)下制備供試品溶液，吸取10μL注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。5種目標(biāo)對(duì)照品的回收率分別為98.5%、99.2%、98.9%、99.1%、98.8%，RSD均<1.5% 。

2.3.7 含量測(cè)定 對(duì)抽取的10批次治療哮喘類中藥制劑進(jìn)行檢測(cè)， 結(jié)果在2批平喘膠囊及某私人診所配制的止咳平喘制劑供試品溶液的液相色譜中呈現(xiàn)與醋酸潑尼松對(duì)照品色譜圖保留時(shí)間相一致的色譜峰。對(duì)檢測(cè)到的成分進(jìn)行定量，結(jié)果顯示：2批平喘膠囊分別含醋酸潑尼松0.4237%、0.5061%；某私人診所配制的止咳平喘制劑含醋酸潑尼松0.6035%。

3 討論

哮喘類中藥制劑通常含有多味中藥，成分較多，如僅采用TLC法專屬性不強(qiáng)，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，所以本文在采用TLC法粗篩定性鑒別后，再采用HPLC法進(jìn)行定量分析，可快速、準(zhǔn)確地對(duì)哮喘類中藥制劑中非法添加的醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，專屬性強(qiáng)，5種化合物可達(dá)到基線分離。

在波長(zhǎng)200～400nm范圍進(jìn)行掃描，醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松的紫外最大吸收波長(zhǎng)分別為240、243、239.5、239.5、239.5nm，為使各化合物均有較大的紫外吸收，有較好的檢測(cè)靈敏度，選擇240nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

本文建立的方法操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，能夠用于檢測(cè)治療哮喘類中藥制劑非法添加的糖皮質(zhì)激素，可作為哮喘類中藥制劑中質(zhì)量和安全用藥的控制 。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典臨床用藥須知·化學(xué)藥和生物制品卷(2005年版)[S].北京:人民衛(wèi)生出版社,2005：243-244,437-445.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].二部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

[3] 董永成，杜士明,陳永順.中成藥及保健品非法添加化學(xué)成分的類型、危害及對(duì)策[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(8)：1601-1602 .

[4] 李小敏，畢雪艷，李莉.平喘鎮(zhèn)咳中成藥中非法添加兩種化學(xué)藥品檢驗(yàn)方法的研究[J].中國(guó)藥事，2007，21(6)：447．

[5] 劉金艷，趙春杰，王超眾.抗風(fēng)濕類中成藥中添加糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2008,9(6)：424-426 .

[6] 胡毅堅(jiān)，吳春芬.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方地塞米松霜中2組分的含量[J]. 中國(guó)藥房，2006，17(20)：1546 .

[7] 吳春敏,陳海濱.中成藥中非法添加化學(xué)物質(zhì)的現(xiàn)狀與對(duì)策[J].海峽藥學(xué)，2003(6):107.

[8] 劉吉金.降壓保健品及中成藥中非法添加化學(xué)成分的快速檢測(cè)方法研究[J].中成藥,2008,30(1):144-146.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Study on the Method for Detecting the Chemical Drugs Added Illegally to Asthma in Chinese Medicine Preparation

Zhang He1，Meng Xiansheng2*，Zhu Yupeng1，Bi Shuai1，Li Zheng1

(1.LiaoYang Institute for Food and Drug Control,Liaoyang 111000, China;2.College of pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)

Objective:To establish a quick，accurate，sensitive method for analysis of acetamidophenol，prednisone hydrocortisone，dexamethasone，prednisonand dexamethasone mixed in Asthma traditional Chi-nese medicine．Methods:Qualitative identification of the chemical drugs illegally adulterated with TLC method，And with the HPLC method for the determination of Using C18column(250mm×4.6mm，5μm)， Using ace-tonitrile and water (40∶60) as the mobile phase, A flow rate of 1mL/min,The detection wavele-ngth of 240nm．Results:Prednisone acetate was found in 3 form ulations,and the percentages of contents were 0.4237%、0.5061%、0.6035%．Conclusion:The method is simple，selectire，sensitive，reliable and accurate,and it can be used to detect adrenal cortical horm one illegaly added into the traditional Chinesemedicine．

Asthma Preparations of Traditional Chinese Medicine；High Performance Liquid Chromatography；Sugar Cortical hormone；Prednisone Acetate

2015-02-11

張鶴(1982-)，女，遼陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴帣z驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

孟憲生(1964-)，男，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幗M分配伍、代謝組學(xué)及藥品質(zhì)量分析。Email：mxsvvv@126.com

R284

A

1673-2197(2015)13-0013-03

10.11954/ytctyy.201513006