王鵬飛，許潤(rùn)春，李江維，張喻娟，余 娟

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137)

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不同方法制備竹瀝鎮(zhèn)咳祛痰藥效學(xué)研究

王鵬飛，許潤(rùn)春*，李江維，張喻娟，余 娟

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，四川 成都 611137)

目的：研究不同方法制備竹瀝在鎮(zhèn)咳與祛痰方面的藥效學(xué)差異。方法：采用小鼠氨水引咳嗽實(shí)驗(yàn)和小鼠氣管酚紅分泌實(shí)驗(yàn)，觀察壓榨竹瀝、烤制竹瀝、煎煮竹瀝對(duì)小鼠鎮(zhèn)咳與祛痰作用的影響。結(jié)果：不同方法制備竹瀝均能顯著延長(zhǎng)氨水引發(fā)小鼠咳嗽的潛伏期，降低咳嗽次數(shù)，促進(jìn)小鼠氣管酚紅的分泌，與空白組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：不同方法制備的竹瀝均具有明顯的鎮(zhèn)咳與祛痰作用。

竹瀝；鎮(zhèn)咳；祛痰；藥效學(xué)

竹瀝為禾本科植物青桿竹(BambusatulldoidesMunro)、粉綠竹(PhfllostachysglaucaMccluve)及同屬的竹竿經(jīng)火烤灼而流出的淡黃色澄清液體，具有清熱豁痰、清心定驚的功效，主治痰熱咳喘、肺熱痰雍等癥，是中醫(yī)鎮(zhèn)咳祛痰之要藥[1-2]?，F(xiàn)代藥效研究同樣顯示，竹瀝具有良好的鎮(zhèn)咳與祛痰作用[3]。然古代本草記載之竹瀝，均為用火烤制得的澄清液體，現(xiàn)代制備多采用壓榨或煎煮法制備竹瀝，古今兩者制備方法有較大差異。本研究擬采用烤制法、煎煮法、壓榨法制備竹瀝，研究其在鎮(zhèn)咳與祛痰兩方面的藥效學(xué)差異。

1 材料

1.1 試驗(yàn)藥物

粉綠竹采于江西省南昌市灣里區(qū)江西中醫(yī)藥大學(xué)，經(jīng)方清茂教授鑒定為剛竹屬剛竹組粉綠竹?？局浦駷r：取粉綠竹的鮮桿500g，每?jī)晒?jié)鋸成一段(約50cm長(zhǎng))，兩端去節(jié)，用電爐加熱中部，收集兩端流出的汁液，烤制無(wú)汁液滲出，得烤制竹瀝50mL。壓榨竹瀝：取粉綠竹的鮮桿500g，劈成小片，置于壓榨機(jī)中，逐漸增加壓力至40MP，保持至無(wú)汁液流出，收集流出的汁液，得壓榨竹瀝100mL,減壓濃縮至50mL。煎煮竹瀝：取粉綠竹的鮮桿500g，劈成小片，置于圓底燒瓶中，加水淹沒(méi)竹片，加熱煮沸1h，過(guò)濾，濾液濃縮至50mL，即得。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)昆明種小鼠，體重(20±2)g，雌雄各半，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(川)2013-24。

1.3 試劑與儀器

氯化銨(成都科龍化工試劑廠，批號(hào):20130612)，苯酚紅(成都科龍化工試劑廠，批號(hào)：040609)，NaHCO3(成都科龍化工試劑廠，批號(hào)：20110824),氨水(成都科龍化工試劑廠，批號(hào)：20120321)，復(fù)方磷酸可待因口服液(澳美制藥，批號(hào)：1308102)，鮮竹瀝液(四川通源制藥有限公司，批號(hào)：1305030)，UV-1700型分光光度計(jì)(日本島津公司)。

2 方法

2.1 不同方法制備竹瀝鎮(zhèn)咳作用研究[4-5]

昆明種小鼠60只隨機(jī)分為空白組、陽(yáng)性組、烤制組、壓榨組、煎煮組、上市品組，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，空白組、陽(yáng)性組分別灌胃蒸餾水，烤制組、壓榨組、煎煮組、上市品組分別灌胃烤制竹瀝、壓榨竹瀝、煎煮竹瀝、上市品竹瀝，分別按照表2劑量灌胃給藥，連續(xù)給藥7d(可待因僅第7天給藥1次)。于末次給藥后1h(可待因給藥后30min)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。將小鼠置于鐘罩中，向密閉鐘罩(2L)內(nèi)噴入0.3mL濃氨水，觀察和記錄小白鼠的咳嗽潛伏期和3min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

2.2 不同方法制備竹瀝祛痰作用研究[4-5]

2.2.1 實(shí)驗(yàn)操作 昆明種小鼠60只隨機(jī)分為空白組、陽(yáng)性組、烤制組、壓榨組、煎煮組、上市品組，每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后，空白組灌胃蒸餾水，陽(yáng)性組、烤制組、壓榨組、煎煮組、上市品組分別灌胃氯化銨、烤制竹瀝、壓榨竹瀝、煎煮竹瀝、上市品竹瀝，分別按照表3劑量灌胃給藥，連續(xù)給藥7天。造模前禁食不禁水12h，末次給藥30min后每只小鼠腹腔注射0.25%酚紅溶液0.5mL，再隔30min后脫頸椎處死。將小鼠仰臥位用大頭針固定于木板上，頸部拉直，切開(kāi)頸正中皮膚，分離出氣管，在氣管下穿一線，以備固定針頭。用1mL注射器抽取5%碳酸氫鈉溶液0.5mL，接上磨鈍的7號(hào)針頭，從甲狀軟骨處插入氣管內(nèi)約0.3～0.5cm，用線結(jié)扎固定，避免針頭滑落。來(lái)回抽洗3次，取下注射器，將沖洗液注入小試管內(nèi)，重新吸取5%碳酸氫鈉溶液0.5mL，抽洗，重復(fù)2次，將3次沖洗液合并，合并洗出液后于3 000r/min離心機(jī)中離心15min，上清液在1700型分光光度計(jì)上于波長(zhǎng)546nm處，測(cè)定酚紅吸收度值A(chǔ)。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密稱取苯酚紅10.27mg，置100mL容量瓶中，加入5%NaCHO3至刻度，搖勻，即得0.1mg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL于10mL容量瓶中，分別加入5%NaCHO3，定容，搖勻。按照中國(guó)藥典附錄中分光光度法于546nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)。以吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程：A=0.136 4X+0.036 7，r=0.999 9，結(jié)果表明，苯酚紅含量在0～14.0μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(見(jiàn)表1)。

表1 不同濃度酚紅溶液紫外吸收值

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 不同方法制備竹瀝對(duì)小鼠氨水引咳嗽試驗(yàn)的影響

與空白組比較，烤制竹瀝、壓榨竹瀝、煎煮竹瀝能夠顯著延長(zhǎng)氨水引發(fā)小鼠咳嗽的潛伏期，明顯減少咳嗽次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，表明不同制備方法對(duì)氨水引發(fā)小鼠咳嗽具有抑制作用。三種不同制備方法竹瀝比較，顯示烤制竹瀝可能具有更好的抑制效果，但與其他制法組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

組別動(dòng)物數(shù)(n)給藥劑量(·kg-1)咳嗽潛伏期(s)3min咳嗽次數(shù)空白組陽(yáng)性組烤制組壓榨組煎煮組上市品組10101010101020mL40mg20mL20mL20mL20mL30.7±13.273.4±16.1△△59.8±17.4△△50.5±13.6△△47.7±21.0△55.2±15.5△△93.6±19.725.9±16.5△△35.1±18.5△△48.3±20.1△△58.2±13.5△47.4±15.2△△

注：與空白組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

組別動(dòng)物數(shù)(n)給藥劑量(·kg-1)酚紅吸收值(A)酚紅分泌平均值(μg/mL)空白組陽(yáng)性組烤制組壓榨組煎煮組上市品組10101010101020mL1g20mL20mL20mL20mL0.168±0.0571.013±0.219△△0.825±0.192△△0.627±0.216△△0.579±0.183△0.724±0.118△△0.963±0.1487.158±1.3365.779±1.1394.328±1.3153.976±1.0735.038±0.596

注：與空白組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

3.2 不同方法制備竹瀝對(duì)小鼠氣管分泌酚紅試驗(yàn)的影響

與空白組比較，烤制竹瀝、壓榨竹瀝、煎煮竹瀝能夠顯著促進(jìn)小鼠氣管酚紅的排泌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，表明不同制備方法對(duì)小鼠祛痰具有較好的作用。三種不同制備方法竹瀝比較，顯示烤制竹瀝可能具有更好的祛痰效果。

4 討論

竹瀝具有悠久的使用歷史和明確的臨床療效，現(xiàn)代研究表明，其含有糖類、氨基酸[6]及愈創(chuàng)木酚[7]等物質(zhì)?？局品ㄖ苽渲駷r，竹竿外部受火焰高溫灼燒而促使保留在竹竿內(nèi)含水成分快速滲出、聚集成液體流出。煎煮法制備竹瀝，是竹竿內(nèi)部有效物質(zhì)向外部滲出的過(guò)程。壓榨法制備竹瀝，竹竿受外部強(qiáng)大力的作用，促使內(nèi)部含水物質(zhì)向外滲出，聚集形成液體，此過(guò)程未受高溫作用。本研究顯示，分別采用烤制、煎煮、壓榨三種不同方法制備得到竹瀝，均具有抑制氨水引發(fā)小鼠咳嗽、增加小鼠氣管分泌酚紅的作用，即不同制備方法得到的竹瀝均具有鎮(zhèn)咳與祛痰的藥理作用。三組間比較分析，烤制組略具有更強(qiáng)的鎮(zhèn)咳與祛痰的藥理作用。竹瀝是中醫(yī)鎮(zhèn)咳祛痰要藥，本草記載其制備方法多為烤制法，制備方法不便于現(xiàn)代大規(guī)模的生產(chǎn)，抑制了竹瀝這味具有良好療效鎮(zhèn)咳祛痰藥物的發(fā)展。本研究顯示，采用現(xiàn)代壓榨工藝獲得之竹瀝具有與烤制竹瀝接近的治療功效。我國(guó)竹類資源豐富，竹瀝藥效顯著，竹瀝的深入研究與開(kāi)發(fā)，必將為患者帶來(lái)福音。

[1] 張廷模，鄧家剛，周禎詳，等.臨床中藥學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:265-266.

[2] 蔡華芳.鮮竹瀝鎮(zhèn)咳祛痰作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2007,13(5)：43-44.

[3] 黃世得，夏侯林，張安國(guó)，等.慈竹瀝的藥理和和臨床實(shí)驗(yàn)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1995(4)：20-22.

[4] 金曉飛，李紅，蔣夢(mèng)良.不同種竹瀝的化學(xué)組分分析及其藥效研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014,20(5)：82-85.

[5] 張梅，雨田，舒筱琳，等.川明參鎮(zhèn)咳祛痰藥理作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006,17(7)：1121-1122.

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[7] 李紅，蔣夢(mèng)良.HPLC法測(cè)定不同種類竹子的竹瀝中愈創(chuàng)木酚的含量[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010,30(5)：38-40.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Antitussive and Expectorant Effects of Bamboo Juice Prepared by Different Methods

Wang Pengfei，Xu Runchun*，Li Jiangwei，Zhang Yujuan，Yu Juan

(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137,China)

Objective:To study the antitussive and expectorant effects of Bamboo juice which prepared by different methods.Methods:Experiments in mice which cough was induced by ammonia and cited trachea phenol red secretion , observating the differences of baked Bamboo juice, boiling Bamboo juice in antitussive and expectorant efficacy.Results:Bamboo juice which prepared by different methods all can significantly prolong the incubation period of cough in mice caused by ammonia (P<0.01), reduced cough frequency (P<0.01), the promotion of mouse tracheal phenol red secretion (P<0.01).Conclusion:Bamboo juice which prepared by different methods have obvious antitussive and expectorant effect.

Bamboo Juice; Antitussive;Expectorant

2015-01-29

王鵬飛(1989-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。

許潤(rùn)春(1973-)，女，博士，成都中醫(yī)藥大學(xué)副教授，研究方向?yàn)橹兴幣谥婆c制劑。E-mail:309786953@qq.com

R285.5

A

1673-2197(2015)13-0010-02

10.11954/ytctyy.201513004