林 威，覃 葆，劉 泉，梁 悅,韋佩妍

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

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雞骨草膠囊中梔子提取工藝研究及有效成分含量測(cè)定

林 威，覃 葆*，劉 泉，梁 悅,韋佩妍

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001)

目的：探討雞骨草膠囊中主要原料藥梔子的含量測(cè)定雞骨草膠囊方法及提取工藝。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定雞骨草膠囊有效成分含量，應(yīng)用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選梔子提取工藝。結(jié)果：梔子苷在0.06～1.2μg(r=0.999 8) 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為101.28%(RSD=1.18)。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、有效、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于雞骨草膠囊有效成分的提取和測(cè)定。

雞骨草膠囊；梔子苷；提取工藝；含量測(cè)定

雞骨草膠囊由三七、人工牛黃、豬膽汁、牛至、雞骨草、白芍、大棗、梔子、茵陳、枸杞子等十味中藥組成，具有疏肝利膽、清熱解毒的作用。目前對(duì)雞骨草膠囊的研究中，梔子苷含量測(cè)定較多[2-4]，而梔子的提取工藝研究較少，在當(dāng)今中藥工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中，很多企業(yè)不注重原料藥的前處理，藥材未經(jīng)過(guò)合適的處理就進(jìn)行投料生產(chǎn)，造成藥材不能被最有效地利用。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)雞骨草膠囊現(xiàn)有的工藝方法，系統(tǒng)分析雞骨草膠囊中的主要原料藥材梔子，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選該藥材的提取工藝，為企業(yè)改進(jìn)原料藥前處理及藥物規(guī)范化生產(chǎn)提供參考。

1 材料

Agilent1100高效液相色譜系統(tǒng)(包括G1311A Quatpunp、G1314A VWD、G1316A Collum)；LG16-WA 高速臺(tái)式離心機(jī)(北京京立離心機(jī)有限公司)；BP211D電子分析天平(德國(guó)賽多利斯)；KQ520003型超聲清洗器(昆明市超聲儀器有限公司)；DFY-300 300克搖擺式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)。梔子苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：110749-200714)，梔子藥材(廣西玉林制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，批號(hào)：100505)。乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher公司)，水為純水，其余均為分析純。

2 梔子提取工藝及有效成分測(cè)定

2.1 梔子中梔子苷含量測(cè)定

2.1.1 供試品溶液制備 精密稱取梔子2.0g，置于100mL錐形瓶中，根據(jù)因素水平設(shè)計(jì)表加不同倍量蒸餾水煎煮，合并煎液，過(guò)濾、濃縮至干浸膏。用甲醇定容至25mL，搖勻離心即得供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱定梔子苷對(duì)照品3.01mg，用甲醇定容至50mL，即得。

2.1.3 色譜條件 色譜柱：ODS-2；流動(dòng)相：乙腈-水(15∶85)；檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；柱溫：28℃；進(jìn)樣量：10μL；流速:1.0mL/min。在此條件下，分離度大于1.5，目標(biāo)峰與其他組分達(dá)到基本分離，梔子苷理論塔板數(shù)不低于1 500(見(jiàn)圖1、圖2)[1]。

圖1 梔子苷對(duì)照品溶液高效液相色譜

圖2 梔子供試品溶液高效液相色譜

2.1.4 線性試驗(yàn) 分別精密吸取苦梔子苷對(duì)照品溶液(0.03mg/mL)1、2、5、10、15、20μL，在“2.1.3”色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量x(μg)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=7 477.1x+125.07，R=0.999 8(見(jiàn)圖1),結(jié)果表明，梔子苷在0.06～1.2μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 梔子苷對(duì)照品線性曲線

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取同一梔子苷對(duì)照品溶液，在“2.1.3”色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，計(jì)算峰面積RSD為0.62%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取梔子苷供試品溶液，按照“2.1.3”色譜條件，分別在0、1、2、4、8、16、24h進(jìn)樣10μL，測(cè)定梔子苷的含量，計(jì)算 RSD為1.86%，表明梔子苷24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一梔子樣品6份，每份2.0g，精密稱定。按照供試品溶液制備方法制備，在“2.1.3”色譜條件下進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，計(jì)算RSD為1.36%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.1.8 回收率試驗(yàn) 取已知含量的梔子樣品6份，每份1.0g，精密稱定，分別精密加入一定量的梔子苷對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法制備，在“2.1.3”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，并于505nm處進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算回收率。試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率良好，見(jiàn)表1。

表1 雞骨草回收率結(jié)果

2.2 梔子提取工藝正交試驗(yàn)

2.2.1 因素與水平 梔子為雞骨草膠囊中不可缺少的一味中藥，根據(jù)雞骨草膠囊的制作工藝和單味藥的提取工藝進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確立梔子以適量水煎煮2次，以粉碎度(A)、溶劑用量(B)、煎煮次數(shù)(C)為考察因素，梔子苷含量為考察指標(biāo)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，因素水平、正交試驗(yàn)及方差分析分別見(jiàn)表2、表3、表4。

表2 正交因素水平

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差分析

注：F0.05(2,2)=19.00；F0.01(2,2)=99.00。

3 討論

實(shí)驗(yàn)表明，HPLC法測(cè)定雞骨草膠囊中梔子苷的含量，在流動(dòng)相乙腈-水(15∶85)條件下結(jié)果顯示，該法操作簡(jiǎn)便，方法科學(xué)、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)。本次實(shí)驗(yàn)以梔子苷為對(duì)照品，根據(jù)2010版藥典選擇高效液相色譜條件和雞骨草膠囊的制作工藝，采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)表3中R值及K值的大小，得出各因素影響梔子苷含量的主次關(guān)系為C>B>A,最優(yōu)方案為A3B3C2，即在雞骨草膠囊中，梔子的最佳提取工藝為粉碎至40目，加20倍量水煎煮3次。各組分間梔子苷含量差異較小。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:231.

[2] 范全民.HPLC測(cè)定雞骨草膠囊中桅子苷的含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2006,20(5):44-45.

[3] 施群，孫桂鴻，付亞平，等.雞骨草膠囊中梔子甙含量測(cè)定[J].湖北中醫(yī)雜志,2000,22(12):43-44.

[4] 王艷紅，陳獻(xiàn).雞骨草膠囊中梔子苷的含量測(cè)定[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2007,14(3):41-42.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Research on Extraction Tchnology and Content Detmination of the Main Raw Material Drug of Gardenia in Jigucao Capsule

Lin Wei,Qin Bao*,Liu Quan,Liang Yue,Wei Peiyan

(GuangXi Chinese Medical University,Nanning 530001,China)

Objective:To discuss the method of determination and the extraction techniques of Gardenia in Jigucao capsule.Methods:The main raw material drug of Jigucao capsule was determined by HPLC.Using Orthogonal design experiments to the experiment.Results:Jigucao and Geniposide has a good linear relationship in 0.06～1.2μg.The coefficient of recovery in Geniposide was 101.28% (RSD=1.18%)。It has a good sample recovery.Conclusion:The method is simple,stable accurate and eproductible and can be used as determination and the extraction techniques of Jigucao capsule.

Jigucao Capsule；Geniposide；Extracting Process；Content Determination

2014-12-19

國(guó)家科技特派員項(xiàng)目(2009GJE10028)

林威(1989-)，男，廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士生，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。

覃葆(1956-)，男，廣西中醫(yī)藥大學(xué)教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幣谥萍爸兴庂|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R284.2

A

1673-2197(2015)08-0028-02

10.11954/ytctyy.201508014