文芳杰，周 勇，游紹雪，李 姍

(黔南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 都勻 558000)

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高效液相色譜法測(cè)定地龍膏中柚皮苷含量

文芳杰，周 勇，游紹雪，李 姍

(黔南州中醫(yī)醫(yī)院，貴州 都勻 558000)

目的：建立地龍膏中柚皮苷含量的測(cè)定方法，以控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。方法：采用Wondasil C18色譜柱(4.6mm×150mm，5μm)，以甲醇-醋酸-水(35∶4∶65)為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，柱溫30℃，檢測(cè)波長283nm。結(jié)果：柚皮苷在0.055～1.370μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r=0.999 9)。平均加樣回收率為96.68%，RSD=1.33%。結(jié)論：該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，可用于地龍膏的質(zhì)量控制。

地龍膏；柚皮苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

地龍膏為我院自制的中藥制劑，由地龍、燙骨碎補(bǔ)等五味中藥組成，具有清熱消腫、化瘀止痛的功效，臨床主要用于治療急性軟組織損傷。方中燙骨碎補(bǔ)的主要成分為柚皮苷，為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了柚皮苷的含量。

1 儀器與試藥

日本島津LC-15C高效液相色譜儀(SPD-15C型紫外可見檢測(cè)器，LCsolution Lite工作站)，F(xiàn)A-1004型電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)，AUW120D型電子天平(日本島津)，電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械五廠)。

柚皮苷(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110722-201111)，地龍膏為我院制劑科自制；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱：Wondasil C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流

動(dòng)相：甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶65)；檢測(cè)波長：283nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；理論塔板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液配制

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取柚皮苷對(duì)照品13mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取1mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1mL含柚皮苷0.054 8mg的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液制備 取本品5片，除去蓋襯，精密稱定，平展貼于醫(yī)用紗布上，剪成約1cm×1cm的小片，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇200mL，密塞，稱定重量，加熱回流3h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液制備 取缺燙骨碎補(bǔ)的其他各味藥材，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，樣品中柚皮苷色譜峰與其他色譜峰分離良好，陰性樣品溶液無干擾，證明系統(tǒng)適應(yīng)性良好。柚皮苷、樣品及陰性樣品的HPLC圖譜見圖1。

圖1 地龍膏HPLC圖譜

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液(濃度為0.0548mg·mL-1)1、5、10、15、20、25μL，注入液相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為：Y=193288X+611.45，r=0.999 9。結(jié)果表明柚皮苷在0.054 8～1.37 0μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。見圖2。

圖2 柚皮苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 精密度考察

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按“2.1”色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定柚皮苷峰面積RSD為1.43%，表明儀器的精密度良好。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，按“2.1”色譜條件于0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣測(cè)定，記錄柚皮苷色譜峰峰面積。結(jié)果表明樣品溶液在8h內(nèi)保持穩(wěn)定，RSD=1.37%。結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份。精密吸取各供試液10μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果樣品中柚皮苷的平均含量為0.834mg/10g，RSD=1.31%，表明重復(fù)性良好。見表3。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 回收率試驗(yàn)

取已知含量的地龍膏樣品(批號(hào)20120206，含量0.834mg/10g)2片，共6份，分別除去蓋襯，精密稱定，分別加入柚皮苷對(duì)照品適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按“2.1”色譜條件測(cè)定柚皮苷的含量，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為96.68%，RSD=1.33%，見表4。

表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

取地龍膏5片，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，按“2.1”色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算樣品中柚皮苷的含量。結(jié)果見表5。

表5 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 提取條件的選擇

試驗(yàn)前期，曾考察甲醇和乙醇對(duì)本品的提取效率，結(jié)果甲醇提取完全，雜質(zhì)較少；且以甲醇為提取溶劑，通過對(duì)超聲提取法和回流提取法以及提取時(shí)間的考察，結(jié)果得甲醇加熱回流3h，柚皮苷提取效果較好，方法可行。

3.2 測(cè)定方法的選擇

骨碎補(bǔ)為方中主藥，主要含柚皮苷。目前，國內(nèi)外報(bào)道中，柚皮苷的含量測(cè)定方法較多[2-5]，筆者參考《中國藥典》中骨碎補(bǔ)的含量測(cè)定方法，采用高效液相色譜法，以甲醇-冰醋酸-水(35∶4∶65)為流動(dòng)相建立了適合本制劑的含量測(cè)定方法，并測(cè)定出合理的含量限度。且測(cè)定方法能提取完全，精密度、重現(xiàn)性良好，回收率符合藥典要求，整個(gè)試驗(yàn)可控性強(qiáng)，能較客觀地控制本品的含量。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典 [S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010:239.

[2] 伍奕,蔣曉煌,蔣孟良,等.骨碎補(bǔ)中柚皮苷含量測(cè)定方法的優(yōu)化研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,30(3):48-50.

[3] 秦文兵,岐琳.HPLC法測(cè)定骨傷膠囊中柚皮苷的含量[J].西北藥學(xué)雜志,2009,24(3):168-169.

[4] 李雁玲,湯啟勛.HPLC法測(cè)定駁骨丸中柚皮苷的含量[J].中藥新藥與臨床藥理,2004,15(1):46-47.

[5] 李芳,周建平,雷建林,等.HPLC測(cè)定接骨續(xù)筋膠囊中柚皮苷的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥,2007,27(6):57-59.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Determination of Naringin in Dilong Emplastrum by HPLC

Wen Fangjie，Zhou Yong，You Shaoxue，Li Shan

(Qiannan Traditional Chinese Medicine Hospital，Duyun 558000，China)

Objective:To establish a method for the determination of naringin in Dilong emplastrum.Methods:The HPLC separation was performed on Wondasil-C18(4.6mm×150mm，5μm) column with a mixture methanol-acetic acid-water(35∶4∶65)as the mobile phase,at a flow rate of 1 ml/min. Detection wavelength was 283nm and column temperature was 30℃.Results:The linearity of naringin was in the range of 0.0548～1.370μg (r=0.999 9) and the average recovery was 96.68 %,RSD=1.33 %.Conclusion:The method quick,sensitive,accurate,stable,reproducible and can be used to control the quality of Dilong emplastrum.

Dilong Emplastrum；Naringin；HPLC

2015-07-01

文芳杰(1974-)，女，貴州省黔南州中醫(yī)醫(yī)院主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯邪l(fā)。

R284.2

A

1673-2197(2015)21-0041-03

10.11954/ytctyy.201521017