雷蒙蒙

(渭南職業(yè)技術(shù)學院，陜西 渭南 714000)

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中藥虎杖大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷分離純化研究

雷蒙蒙

(渭南職業(yè)技術(shù)學院，陜西 渭南 714000)

目的：從中藥虎杖中分離純化大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷。方法：虎杖水溶部分采用大孔吸附樹脂、聚酰胺色譜乙醇梯度洗脫法進行分離。結(jié)果：在大孔吸附樹脂柱60%及70%乙醇洗脫部位得到含有大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的洗脫物，聚酰胺色譜柱50%及70%乙醇洗脫部位得到大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷粗品。結(jié)論：本方法簡單，可避免采用硅膠色譜法對大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的破壞，提高提取率，適用于虎杖中該成分的分離純化。

虎杖；大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；分離；純化

隨著人口平均壽命的提高，世界各國逐步進入老齡化，與年齡相關(guān)的疾病也隨之增加，老年癡呆癥是常見而嚴重的老年病之一。雖然各國學者均在積極研制防治老年癡呆癥的藥物，但尚沒有一種能根治該病的藥物問世。老年性癡呆病人的記憶功能失調(diào)是膽堿能神經(jīng)元退行性病變的結(jié)果，提高中樞的乙酰膽堿含量對治療老年性癡呆具有較好的效果。目前從石杉中分離得到的高活性早老年性癡呆癥治療藥物石杉堿就是一種高效的膽堿酯酶抑制劑?，F(xiàn)代醫(yī)學認為老年性癡呆等疾病的發(fā)生和發(fā)展與海馬神經(jīng)元的損傷密切相關(guān)。研究表明，大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷對腦中真性乙酰膽堿酯酶活力具有可逆性的抑制作用，可提高中樞的乙酰膽堿含量，且對β-淀粉樣蛋白造成的海馬神經(jīng)元損傷具有一定的保護作用，因此，大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷既是一種真性乙酰膽堿酯酶可逆性抑制劑，又是海馬神經(jīng)元損傷保護劑，對老年性癡呆等疾病的發(fā)生和發(fā)展的多個環(huán)節(jié)有改善作用。動物行為學研究表明，大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷能顯著改善由東莨菪堿導致的小鼠學習記憶功能障礙，并能顯著提高正常小鼠學習記憶獲得能力，與陽性藥物石杉堿甲比較,兩者無顯著性差異[1]。

虎杖中的蒽醌類物質(zhì)有明顯的降壓和減慢心率作用。白藜蘆醇有降血脂作用，還能增加心臟收縮振幅，加強心肌收縮力，改善循環(huán)，顯著增加冠脈流量，改善微循環(huán)及抗休克。大黃素和白藜蘆醇苷有鎮(zhèn)咳平喘的作用。大黃素、大黃素葡萄糖苷和白藜蘆醇苷對金黃色葡萄球菌和肺炎雙球菌有抑制作用；大黃素等蒽醌類物質(zhì)有抗病毒作用，另外還有抗腫瘤、抗氧化、影響內(nèi)分泌等藥理作用[2-6]。

通常在蒽醌類化合物的分離中，由于氧化鋁可與其產(chǎn)生絡(luò)合而多采用硅膠柱色譜法，但在牟淑慧[7]的論文中發(fā)現(xiàn)，大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷等苷類成分的分離方法主要采用經(jīng)典的分離方法，如硅膠柱層析法、反相柱色譜法等，使分離復雜化并降低了提取率，資源浪費嚴重，因此，其制備方法有待進一步改進。

在本次實驗中，為尋找適宜方法進行大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的分離純化，采用大孔吸附樹脂柱和聚酰胺色譜柱進行研究。

1 儀器與材料

RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，HH-S恒溫水浴鍋(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，CX-250型超聲波清洗器 (北京醫(yī)療設(shè)備二廠)。

虎杖藥材購于北京同仁堂藥材批發(fā)部。AB-8大孔吸附樹脂，D101(天津市光復精細化工研究所)，聚酰胺(60～80目)(熒光化學廠)，硅膠G預制薄層板(20cm×20cm) (青島海洋化工廠)。乙醇(無水乙醇分析純，北京化工廠)，蒸餾水(屈臣氏，購買于中國廣州Wastons公司)。

對照品：大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷由北京中醫(yī)藥大學中藥學院張桂燕教授提供。

2 實驗方法

2.1 TLC色譜條件

2.1.1 對照品溶液配制 稱取大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷適量，加甲醇溶解，配制成濃度為1mg·mL-1的溶液，備用。

2.1.2 TLC條件 固定相：硅膠G預制薄層板(20cm×20cm)；展開劑：氯仿-乙醇(5∶1)；顯色劑：5%NaOH甲醇溶液。

2.2 提取方法

稱取虎杖粗粉，加95%乙醇提取，回收溶劑至無醇味，浸膏加水分散，乙醚萃取除去親脂性成分，得水層。

2.3 分離

2.3.1 大孔樹脂柱 大孔樹脂(D101)裝柱(直徑4cm,柱總長55cm，大孔樹脂柱高30cm)，水洗，備用。取“2.2”項下的水層200mL，水浴濃縮至53mL，上大孔樹脂柱，水洗至流出液無色，共用水2 000mL。 依次用30%、40%、50%的乙醇洗脫，每30mL收集1份；60%、70%的乙醇洗脫，每50mL收集1份。旋轉(zhuǎn)蒸干，殘留物作TLC檢視，結(jié)果見表1至表5。

表1 大孔樹脂柱30%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表2 大孔樹脂柱40%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表3 大孔樹脂柱50%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表4 大孔樹脂柱60%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表5 大孔樹脂柱70%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

30%～50%乙醇洗脫液及60%乙醇洗脫液的前50mL里均未見大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；60%乙醇洗脫液的后850mL及70%乙醇洗脫液中均可見大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷，合并為A部分。

2.3.2 聚酰胺色譜柱 聚酰胺色譜柱(60～80目)裝柱(直徑3cm,總長40cm，聚酰胺柱高27cm)，水洗備用。取“2.3.1”中A部分，水浴濃縮至干，加少量乙醇溶解，上聚酰胺色譜柱，水洗至流出液無色，共用水5 150mL。依次用15%、30%、50%、70%的乙醇洗脫，每50mL收集1份，旋轉(zhuǎn)蒸干，作TLC檢視，結(jié)果見表6至表9。

表6 聚酰胺柱15%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表7 聚酰胺柱30%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表8 聚酰胺柱50%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

表9 聚酰胺柱70%乙醇洗脫TLC檢視結(jié)果

15%～30%乙醇洗脫液、50%乙醇洗脫液的前250mL及70%乙醇洗脫液的后200mL里均未見大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷；50%乙醇洗脫液的后150mL及70%乙醇洗脫液的前200mL里均有大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷。

分離流程如圖1。

圖1 虎杖中大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷分離流程

3 結(jié)果

通過對虎杖水溶部分采用大孔吸附樹脂、聚酰胺色譜乙醇梯度洗脫法進行分離，最終在大孔吸附樹脂柱60%及70%乙醇洗脫部位得到含有大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的洗脫物，聚酰胺色譜柱50%及70%乙醇洗脫部位得到大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷粗品。

4 討論

在本實驗中，由于柱子均為較大型號，在上樣之前，要確保柱子在打開的情況下，溶液的流通性良好，不產(chǎn)生堵塞現(xiàn)象，關(guān)閉柱子的情況下，不出現(xiàn)大量的溶液外漏現(xiàn)象，因此，使用前的密閉性和流通性檢查很重要。另外，由于大孔吸附樹脂和聚酰胺洗脫能力均隨乙醇濃度的增加而增加，因此，通過乙醇不同濃度由低到高進行梯度洗脫，能分離出不同的化合物，在本實驗中最終分離出大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷。

5 結(jié)論

通常蒽醌類化合物的分離由于氧化鋁可與其產(chǎn)生絡(luò)合而多采用硅膠柱色譜法，但從虎杖中分離大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的實驗中發(fā)現(xiàn)，硅膠可破壞該成分，使分離復雜化并使提取率降低，因此，通過本實驗尋找到了適宜進行大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷分離純化的方法。

[1] 陳萬生，徐江平，殷學平.大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的新用途：中國，99119950226[P].

[2] 張喜云.虎杖的化學成分、藥理作用與提取分離[J].天津藥學，1999,11(3)，13-14.

[3] 裴蓮花，吳學，金光洙.虎杖化學成分及藥理作用研究現(xiàn)狀[J].延邊大學醫(yī)學學報，2006,29(2)：147-149.

[4] 黃遠芬，李蓓蓓，羅霄山.虎杖及其有效成分藥理研究進展[J].廣東藥學，2000,10(6)：13-15.

[5] 湯毅，鄒恒琴.虎杖的化學及藥理作用研究概況[J].中藥材，1993,16(1)：42-44.

[6] 馮雷.虎杖研究新進展[J].醫(yī)藥論壇雜志，2003,24(9)：78-79.

[7] 牟淑慧.大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷制備方法的探索[D].北京：北京中醫(yī)藥大學,2007.

(責任編輯：魏 曉)

2014-12-20

雷蒙蒙(1987-)，女，陜西省渭南職業(yè)技術(shù)學院助教，研究方向為中藥學教學與科研。

R284.2

A

1673-2197(2015)21-0036-02

10.11954/ytctyy.201521015