彭 亮,李詒光,2*,陳 杰*,饒 毅,季巧遇,魏惠珍

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué),江西 南昌 330006;2.江中藥業(yè)股份有限公司,江西 南昌 330096)

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不同產(chǎn)地、不同品種絞股藍(lán)總黃酮含量比較研究

彭 亮1,李詒光1,2*,陳 杰1*,饒 毅1,季巧遇1,魏惠珍1

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué),江西 南昌 330006;2.江中藥業(yè)股份有限公司,江西 南昌 330096)

目的：以絞股藍(lán)中總黃酮含量為指標(biāo)，建立絞股藍(lán)總黃酮含量測定方法，并比較不同產(chǎn)地、不同品種絞股藍(lán)中總黃酮含量差異，為考察藥材內(nèi)在質(zhì)量提供依據(jù)。方法：采用紫外可見分光光度法，以蘆丁為對照品，在波長401nm處對絞股藍(lán)總黃酮進(jìn)行含量測定。結(jié)果：蘆丁在0.109 2～0.546 0mg 范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系(R2=0.999 8)，平均回收率為98.13%，RSD為1.52 % (n=6)。結(jié)論：該方法簡便可行、重復(fù)性好，適用于絞股藍(lán)總黃酮含量測定。不同產(chǎn)地絞股藍(lán)中總黃酮含量存在差異，且絞股藍(lán)中總黃酮含量與絞股藍(lán)品種無相關(guān)性，該結(jié)果可為絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

絞股藍(lán)；總黃酮；提取工藝；含量研究

絞股藍(lán)為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草本植物Gynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino.的根莖或全草[1-3]，又名七葉膽、天堂草、公羅鍋底、遍地生根等。該屬植物基源復(fù)雜、品種繁多，全世界約有16種和3變種，我國有14種和3變種[4]，廣泛分布于陜西、湖北、安徽、福建、云南、廣西等地。其味苦微甘，性涼；歸肺、脾、腎經(jīng)。具有清熱解毒、化痰止咳、益氣健脾、養(yǎng)陰生津、養(yǎng)心安神等功效[5]?，F(xiàn)代研究表明，絞股藍(lán)含有皂苷、多糖和黃酮類成分，此外還含有少量的氨基酸、維生素和微量元素等，其中黃酮類成分是絞股藍(lán)的主要化學(xué)成分，具有抗氧化、清除自由基、抗癌防癌、改善心腦血管循環(huán)和調(diào)節(jié)血壓等作用[6-7]。目前，關(guān)于絞股藍(lán)的研究報道，無論是成分提取還是藥效研究都主要集中在皂苷類成分上，而對于黃酮類成分的研究報道則相對較少[8]，且有關(guān)不同產(chǎn)地、不同品種絞股藍(lán)總黃酮含量差異化研究也未見文獻(xiàn)報道，為進(jìn)一步研究絞股藍(lán)藥材，本文建立了絞股藍(lán)中黃酮提取及含量測定方法，并比較了不同產(chǎn)地、不同品種絞股藍(lán)中總黃酮含量差異，以期為絞股藍(lán)藥材質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV-1800紫外可見分光光度計(日本島津)；SK5200LH超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(Mettler Toledo上海衡器有限公司)；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 試藥

絞股藍(lán)藥材經(jīng)鑒定為葫蘆科絞股藍(lán)屬多年生草本植物Gynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino的根莖或全草，藥材來源見表1。蘆丁對照品(批號為110827-200707，中國食品藥品檢定研究院)。石油醚、甲醇等其它試劑均為分析純。

表1 絞股藍(lán)藥材樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液制備

取干燥至恒重的蘆丁對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解制成濃度為0.109 2mg·mL-1的對照品溶液。

2.2 供試品溶液制備

取絞股藍(lán)藥材干燥粉末(過4號篩)約1.0g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚( 60～90℃)適量，加熱回流至提取液無色，棄去石油醚液，藥渣連同濾紙揮干溶劑，將藥渣移入具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL，回流提取2次，每次1.0h，過濾，合并濾液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 統(tǒng)計分析

2.4 最大吸收波長

將顯色后的對照品和供試品溶液于200～700nm 波長范圍內(nèi)掃描，對照品和供試品在401nm附近均有最大吸收。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制定

精密吸取蘆丁對照品溶液1、2、3、4、5mL，分別置于10.0mL具塞試管中，各加甲醇至5.0mL，加5%亞硝酸鈉0.5mL，搖勻，放置6min，加10%硝酸鋁0.5mL，搖勻，放置6min，加4%NaOH溶液4.0mL，搖勻，放置15min，以空白溶劑校正零點(diǎn)，于401nm波長處測定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)Y，對照品量取樣量(mg)為橫坐標(biāo)X進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程為：Y=1.201 5X-0.004 8，R2=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁在0.109 2～0.546 0mg范圍內(nèi)與吸光度成良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一份蘆丁對照品溶液，按“2.5”項(xiàng)下方法操作，在同一條件下連續(xù)5次測得吸光度為0.259、0.255、0.261、0.257、0.263。結(jié)果RSD為1.22%，表明該方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取絞股藍(lán)藥材樣品 (陜西平利-1)，按 “2.2”項(xiàng)下方法操作，分別在0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h測得吸光度為0.403、0.398、0.408、0.396、0.412、0.414。結(jié)果RSD為1.82%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批絞股藍(lán)藥材樣品 (陜西平利-1) 5份，每份1.0g，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.5”項(xiàng)下操作，在同一條件下分別測定吸光度，并代入回歸方程計算樣品中總黃酮含量分別為4.20%、4.16%、4.27%、4.13%、4.31%。結(jié)果樣品中總黃酮平均含量為4.21%，RSD為1.77%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的絞股藍(lán)藥材樣品 (陜西平利-1) 6份，每份0.5g，精密稱定，每份分別精密加入一定量的蘆丁對照品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.5”項(xiàng)操作，在同一條件下分別測定吸光度，計算回收率 (以蘆丁計)。結(jié)果蘆丁平均回收率為98.13%，RSD為1.52%，表明該方法回收率良好，見表2。

表2 絞股藍(lán)藥材中蘆丁回收率測定結(jié)果 (n=6)

2.10 樣品中總黃酮含量測定

分別取各產(chǎn)地藥材1.0g，精密稱定，平行2份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，按“2.5”項(xiàng)操作，在同一條件下分別測定吸光度，計算各產(chǎn)地絞股藍(lán)中總黃酮含量，結(jié)果見表3。

2.11 不同產(chǎn)地絞股藍(lán)黃酮含量比較

將收集到的絞股藍(lán)樣品以品種為分類依據(jù)，分別對七葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣本黃酮含量和五葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣本黃酮含量進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果，七葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣本 (陜西平利-1、湖北十堰、湖北神農(nóng)架、廣西桂林、福建古田) 黃酮含量差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表4；五葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣本 (陜西平利-2、陜西平利-3、陜西平利-4、云南昆明、安徽亳州) 黃酮含量差異顯著，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，見表5。

表3 絞股藍(lán)藥材中總黃酮含量測定結(jié)果 (n=2)

表4 七葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣品總黃酮含量 (±s)

表5 五葉絞股藍(lán)5個產(chǎn)地樣品總黃酮含量 (±s)

2.12 不同品種絞股藍(lán)黃酮含量比較

將收集到的絞股藍(lán)樣品以品種為依據(jù)分為七葉絞股藍(lán)組和五葉絞股藍(lán)組，兩組進(jìn)行比較分析。結(jié)果，五葉絞股藍(lán)所含黃酮含量高于七葉絞股藍(lán)，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表6。

表6 七葉絞股藍(lán)和五葉絞股藍(lán)總黃酮含量 (±s)

注：*P<0.05或**P<0.01表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 討論

由表3可知，10個不同產(chǎn)地絞股藍(lán)總黃酮含量在1.70%～7.95% ，不同產(chǎn)地絞股藍(lán)黃酮含量差異較大，可能與產(chǎn)地生長環(huán)境有關(guān)。五葉絞股藍(lán)總黃酮平均含量(5.17%)稍高于七葉絞股藍(lán)(3.69%)，但無顯著性差異 (P>0.05)，提示絞股藍(lán)黃酮含量與品種無相關(guān)性。 考慮到絞股藍(lán)藥材中脂溶性成分對紫外測定干擾較大，故用70%甲醇提取藥材前，先用石油醚進(jìn)行脫脂處理，除去部分脂溶性成分，減少在紫外測定中的干擾。

[1] 何顯忠,邱江沁.絞股藍(lán)化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2008(5):84.

[2] 孫萬森,吳喜利,喬成林,等.絞股藍(lán)總皂苷防治多臟器損傷的藥理研究進(jìn)展[J].中成藥報,2009,30(2):241.

[3] 李金青,楊洪軍.絞股藍(lán)的藥理作用研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2009,3(7):189-190.

[4] 丁樹利,朱兆儀,李勇.絞股藍(lán)及同屬植物的生藥學(xué)研究[J].中藥學(xué)雜志,1994,29(2):79.

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[6] 楊靜.絞股藍(lán)化學(xué)成分的研究[J].陜西中醫(yī),2000,21(8):3771.

[7] 陰建.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京:中醫(yī)古籍出版社,1999:524.

[8] 吳宗群,王艷.絞股藍(lán)的化學(xué)成份和藥理作用研究現(xiàn)狀[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2011,9(1):116-117.

(責(zé)任編輯：余 婷)

Study of Total Flavounes Content inGynostemmaPentaphyllum(Thunb.) Makino From Different Producing Areas and Different Varieties

Peng Liang1,Li Yi-Guang1,2*,Chen Jie1*,Rao Yi1,Ji Qiao-Yu1,Wei Hui-Zhen1

(1.Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330006,China; 2.Jiangzhong Pharmaceutical Corporation,Nanchang 330096,China)

Objective:Take the content of total flavounes as index,to establish a method for assaying the flavounes and compare the diversity of total flavounes content inGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino from different producing areas and different varieties,to provide basis for the study of its internal quality.Methods:The UV spectrophotometry was used to determine the contents of total flavounes.The detection wavelength was 401 nm and rutin as reference substance.Results:Good linear relationship with absorbability occurred when rutin in the range of 0.109 2～0.546 0mg (R2=0.999 8),and the average recovery was 98.13% (RSD=1.52%,n=6).Conclusion:The established method is simple,accurate and can be used for the determination of flavounes content.The total flavounes content exist differences inGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino from different producing areas,but the content of total flavounes have no correlation with varieties.The results can able to provide reference for quality control ofGynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino.

GynostemmaPentaphyllum(Thunb.) Makino;Total Flavounes;Extraction;Determination

2015-06-07

彭亮(1990-),男,江西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生,研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。E-mail:602982740@qq.com

李詒光,男,博士,江中藥業(yè)股份有限公司主任中藥師,研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量評價與開發(fā)。E-mail:lyg@jzjt.com

R284

A

1673-2197(2015)21-0033-03

10.11954/ytctyy.201521014