周 倩，滕建北

(廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530001)

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正交實驗法優(yōu)選鯽魚膽揮發(fā)油提取工藝

周 倩，滕建北*

(廣西中醫(yī)藥大學(xué),廣西 南寧 530001)

目的：研究壯藥鯽魚膽揮發(fā)油提取工藝。方法：采用正交實驗設(shè)計L9(34),以提油率為指標，確定最佳提取工藝條件。結(jié)果：藥材最佳提取工藝條件為剪碎、浸泡2h,提取5h,加水12倍。結(jié)論：該提取工藝簡便易行。

鯽魚膽；揮發(fā)油；正交實驗

壯藥鯽魚膽為木犀科植物青藤仔JasminumnervosumLour.的莖、葉或花[1]。性涼，味微苦。清濕熱，解毒，斂瘡，用于痢疾、瘧疾、瘡瘍腫毒、潰爛不斂[2]。其化學(xué)成分主要有黃銅、揮發(fā)油、皂苷等。對鯽魚膽揮發(fā)油的提取條件研究尚未見報道。本文通過改進《中國藥典》揮發(fā)油提取方法，以揮發(fā)油提取量為指標，采用正交實驗對鯽魚膽揮發(fā)油提取條件進行優(yōu)化，為進一步研究其質(zhì)量標準提供基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 材料

鯽魚膽藥材采自廣西，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園高級園藝師朱意麟老師鑒定為木犀科植物青藤仔JasminumnervosumLour.的莖、葉或花。無水硫酸鈉為分析純。

1.2 儀器

揮發(fā)油提取器(相對密度小于1)；萬能粉碎機；BP211D電子分析天平(德國賽多利斯公司)；標準篩；HDM2000型調(diào)溫恒溫電熱套，國華牌；CG-16W高速微量離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 單因素實驗

通過前期的實驗研究得知，鯽魚膽揮發(fā)油量與鯽魚膽藥粉的粉碎度、提取時間、浸泡時間等有關(guān)，因此首先通過單因素實驗考察鯽魚膽揮發(fā)油的工藝條件。

2.1.1 提取時間與揮發(fā)油量的關(guān)系 準確稱取已剪碎的鯽魚膽100g，按固液比(1∶10)加入一定比例的水，室溫下浸泡4h,最后按照不同的提取時間進行水蒸氣蒸餾提取。得到提取時間與揮發(fā)油量的關(guān)系見圖1。

2.1.2 浸泡時間與揮發(fā)油量的關(guān)系 原料預(yù)先浸泡，主要是利用水的作用將植物細胞溶脹，降低精油擴散到水中的阻力，以利于精油的浸出。準確稱取已剪碎的鯽魚膽藥材100g,按固液比(1∶10)加入一定比例的水，室溫下浸泡一段時間，再進行水蒸氣蒸餾提取4h。得到浸泡時間與揮發(fā)油量的關(guān)系如圖2。

圖1 提取時間與揮發(fā)油量的關(guān)系

圖2 浸泡時間與揮發(fā)油量的關(guān)系

一般情況下，中草藥浸泡時間越長，出油率越高，理論認為浸泡可使植物細胞間隙變大，組織細胞充分膨脹，加速細胞內(nèi)、外液動態(tài)交換而有利于揮發(fā)油的提取[3]。但從圖2可以看出，浸泡1h反而比浸泡3h高，這可能是因為鯽魚膽藥材提取時廣西氣溫偏高，浸泡時間過長，引起原料發(fā)生部分水解所致。

2.1.3 加水量與揮發(fā)油量的關(guān)系 準確稱取已剪碎的鯽魚膽100g,按固液比加入一定比例的水，室溫下浸泡1h后再進行水蒸氣蒸餾提取4h。得到加水量與揮發(fā)油量的關(guān)系如圖3所示。

圖3 加水量與揮發(fā)油量的關(guān)系

由圖3可知，加水量在8倍時鯽魚膽揮發(fā)油的提取率最高，并隨加水量的增加，揮發(fā)油量逐漸減少，可以認為加水量過多導(dǎo)致溶液易爆沸，影響提取效果，導(dǎo)致?lián)]發(fā)油溢出。而8倍的加水量又恰好浸沒藥材，故出油率最佳。

2.1.4 粉碎度與揮發(fā)油量的關(guān)系 準確稱取已粉碎至一定粒度的鯽魚膽100g,按固液比(1∶8)加入一定比例的水，室溫下浸1h后再進行水蒸氣蒸餾提取4h。得到粉碎度與揮發(fā)油量的關(guān)系見圖4。

圖4 粉碎度與揮發(fā)油量的關(guān)系

一般情況下，中草藥粉末的表面積越大即粉末越細，提取率越高，但由于鯽魚膽藥材放置時間過久造成揮發(fā)油損失，且藥材越細，揮發(fā)油吸附作用增強使鯽魚膽藥材粉聚成團不易過篩，造成揮發(fā)油量下降。

2.2 最佳工藝條件

2.2.1 正交設(shè)計 通過以上的單因素實驗結(jié)果，以揮發(fā)油提取率為評定指標，選擇鯽魚膽粉碎度(A)、浸泡時間(B)、加水量(C)和提取時間(D)為考察因素，每個因素3個水平，選用L9(34)正交表，實驗安排見表2。

表1 鯽魚膽揮發(fā)油提取工藝因素水平

2.2.2 正交實驗結(jié)果 準確稱取 鯽魚膽藥材100g，按照表1正交設(shè)計進行實驗，并準確讀取揮發(fā)油體積。結(jié)果見表2。

通過極差分析可以看出，4個因素中A因素和D因素即粉碎度和提取時間對實驗結(jié)果影響最大，為主要因素，其影響次序依次為：A=D>B>C,鯽魚膽揮發(fā)油提取的最佳工藝條件為A2B3C1D2，即提取時間5h,浸泡時間3h,加水量800mL,粉碎度為50目。

表2 正交實驗結(jié)果

通過SPSS軟件對實驗結(jié)果進行方差分析，結(jié)果見表4、表5。

表4 方差分析

從表4的方差分析結(jié)果可知，4個因素均對實驗結(jié)果無顯著性影響。但從表5的單因素統(tǒng)計量表結(jié)果可知，最佳水平組合是A3B2C3D2，即提取時間5h,浸泡時間為2h,加水量為1 200mL,粉碎度為剪碎。

2.3 驗證性實驗

為了更準確地選擇最優(yōu)條件，結(jié)合正交試驗結(jié)果表2中測定結(jié)果最高的組合A2B3C1D2和通過直觀分析及SPSS軟件分析的最佳組合A3B2C3D2，對這兩個工藝進行驗證性實驗，見表6。

驗證性實驗表明, A3B2C3D2提取效率比A2B3C1D2較高，所以選擇的最優(yōu)組合為A3B2C3D2，即提取時間5h,浸泡時間為2h,加水量為1 200mL,粉碎度為剪碎。

3 討論

通過正交實驗和驗證實驗表明鯽魚膽揮發(fā)油的提取工藝是科學(xué)可行的。鯽魚膽最佳的提取工藝是：將鯽魚膽藥材剪碎，加入蒸餾水1 200mL,室溫下浸泡時間2h,水蒸氣蒸餾5h,在此工藝條件下可得到鯽魚膽揮發(fā)油0.21mL。根據(jù)擴散定律：藥材粉碎得愈細，浸出效果愈高[4]。但通過本實驗發(fā)現(xiàn)，藥材粉碎過篩越細，揮發(fā)油得率并沒有提高，可能是由于藥材放置時間過久，以及在粉碎過篩過程中揮發(fā)油損失所致。

表5 單因素統(tǒng)計

表6 驗證性實驗 (n=3)

[1] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:174-175.

[2] 廣西壯族自治區(qū)革命委員會衛(wèi)生局.廣西本草選編(上冊)[M].南寧：廣西人民出版社，1974:828-829.

[3] 鄭勇，張志蘭.正交實驗法優(yōu)選豆蔻揮發(fā)油提取工藝[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17(4)：596.

[4] 張兆旺.中藥藥劑學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2003:97.

(責(zé)任編輯：余 婷)

Optimization of Extracting Technology for Volatile Oil fromJasminumnervosumLour. by Orthogonal Test

Zhou Qian,Teng Jianbei*

(Guangxi University of Traditional Chinese Medicine.Nanning,Guangxi 530001,China)

Objective:To study the extraction process ofJasminumnervosumLour. Methods:Using orthogonal design L9(34),by means of clathrate rate definite the best condition of clathrate process. Results:The optimal extraction process was as follows: cut up medicine were soaked in 2h, extraction in 5h,the highest extraction rate was 12 times with imbitition. Conclusion:the extraction process is simple and easy.

JasminumnervosumLour.; Volatile oil; Orthogonal desgin

2015-05-25

廣西科技廳課題(2011GXNSFF018006)；廣西壯瑤藥重點實驗室(桂科基字[2014]32號)；壯瑤藥協(xié)同創(chuàng)新中心(桂教科研[2013]20號)

周倩(1990-)，女，廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向為中藥制劑分析與檢驗。

通訊簡介：滕建北(1972-)，男，博士，廣西中醫(yī)藥大學(xué)副教授、碩士生導(dǎo)師，研究方向為中藥民族藥品種、品質(zhì)與資源開發(fā)。E-mail：tengjianbei@163.com

R284.1

A

1673-2197(2015)21-0027-03

10.11954/ytctyy.201521012