陳靜穎 谷 燕 黃 維 李 豪

（馬鞍山師范高等專科學(xué)校，安徽 馬鞍山243000）

銀杏是最古老的高等植物之一，是我國特有的多用途經(jīng)濟(jì)樹種。銀杏葉中富含黃酮類化合物[1-2]，主要由黃酮及其苷、雙黃酮、兒茶素三類組成，對心腦血管疾病有很好的療效[3-4]。因此，銀杏黃酮相關(guān)的功能性食品和藥品等新興產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，帶動了我國的銀杏種值業(yè)，對于發(fā)展銀杏葉深加工業(yè)也有非常積極的意義。

從銀杏葉中提取黃酮，常用的溶劑有水和乙醇等。水提取法簡便易行，但提取效率低[5]。乙醇提取產(chǎn)品得率高，但其較高的成本使其應(yīng)用受到一定限制[6]。微波具有加熱快速均勻，高效清潔等的優(yōu)點(diǎn)，近年來在水解蛋白，提取多酚、多糖有效成分的應(yīng)用已有研究[7-8]。本文將微波應(yīng)用于提取操作，利用正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝，為銀杏葉中黃酮類物質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)及其應(yīng)用提供一些參考思路。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

銀杏葉：本地采摘的2-3年成熟葉片；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他試劑均為分析純。

微波爐：格蘭仕，MP-70209FW型；離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠，TDL-5-A；干燥箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司，DHG-9620A；722型分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 工藝流程銀杏葉→清洗切絲→干燥→稱重→乙醇水溶液浸潤→微波處理→離心→測定吸光度計(jì)算提取率。1

.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，配置成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入60%乙醇溶液至10ml，再依次加入1ml 5%NaNO2溶液，搖勻、放置5min后加入1ml10%Al(NO3)3溶液，搖勻、放置5min后加入1mol/L NaOH溶液1ml，加60%乙醇定容至刻度，搖勻、放置20min后在500nm處測定吸光度值。

1.2.3 樣品液中總黃酮的測定

稱取銀杏葉絲5.0g，加入乙醇適量，在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)條件下微波輔助提取，過濾，得到粗黃酮提取液。按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法在500nm下測定其吸光值，計(jì)算含量，并計(jì)算提取率。

提取液中總黃酮的濃度（mg/ml）×提取液體積（ml）

1.2.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝

選取微波功率、料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)以及提取時(shí)間為主要影響因素，以黃酮類化合物提取率為指標(biāo)，按照正交表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)(見表1)。

表1 正交因素水平表

1.2.5 與其他方法比較

分別采用水提取法、有機(jī)溶劑（乙醇）提取法和微波（乙醇）提取法對銀杏葉中黃酮苷進(jìn)行提取，以黃酮類化合物提取率為指標(biāo)，比較提取效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以吸光度值為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度（mg/m l）為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=12.536C-0.0047，R2=0.9995，線性范圍0.02～0.10mg/mL。

2.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝

正交試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。分析可得，影響銀杏葉中黃酮類化合物提取率的因素主次順序?yàn)椋何⒉üβ剩疽掖俭w積分?jǐn)?shù)＞微波時(shí)間＞料液比，最佳工藝條件組合是：微波功率680W，料液比1：20，乙醇體積分50%，微波時(shí)間20min。

在此條件下，進(jìn)行4次驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，在正交試驗(yàn)最優(yōu)條件下，黃酮提取率可達(dá)7.89±0.09mg/g。其相對偏差較小，說明優(yōu)化條件重現(xiàn)性良好，結(jié)果真實(shí)可靠。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 與其他方法比較

水提取法、有機(jī)溶劑（乙醇）法和微波（乙醇）法分別對黃酮類化合物的提取率如圖1所示。從圖可知，在三種方法中，微波（乙醇）法的提取率最高，其值達(dá)到水提效率的4倍左右，比單用乙醇提取，效率提高近50%。

圖1 不同方法對銀杏葉總黃酮提取率的比較A.水提取法；B.乙醇提取法；C.微波提取法

3 結(jié)論

3.1 通過正交試驗(yàn)優(yōu)化，得到微波法提取的最佳工藝條件為：微波功率680W，料液比1：20，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，微波時(shí)間20min，提取率可達(dá)7.89mg/g。

3.2 利用水提取法、有機(jī)溶劑（乙醇）提取法和微波（乙醇）提取法對銀杏葉中黃酮苷進(jìn)行提取，微波法的提取率最高，且能降低提取劑用量。

3.3 利用微波法（乙醇）提取銀杏葉中黃酮苷，其提取率高，節(jié)能環(huán)保，廣泛適用于銀杏類功能食品的加工。

［1］楊小明,葉允榮,王萍,等.銀杏葉提取物和銀杏酸的抗菌活性研究[J].食品科學(xué),2004,25(4)：68-72.

［2］柳閩生,陳曄,徐常龍.銀杏葉有效成分的研究與資源的開發(fā)利用[J].江西林業(yè)科技,2006,(2)：28-31.

［3］周俊,周德生.天然黃酮類化合物對心腦血管的藥理研究進(jìn)展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2010,8(6)：725-72.

［4］劉蕊.黃酮類化合物的藥理作用研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2010,23(2)：234-236.

［5］胡敏,張艷紅,等.銀杏黃酮昔的水浸提方法研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),1997,24(4)：31-34.

［6］崔旭海.銀杏葉黃酮類化合物提取分離技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品工程,2008(4)：7-11.

［7］胡如桂,張晶晶,張全斌,等.微波水提黃芪皂苷的工藝研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2007(05)：1074-1075.

［8］范會平,符鋒,Giuseppe Mazza,等.微波提取法對櫻桃、獼猴桃和枸杞多糖特性的影響[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),2009(10)：355-357.