趙春梅 ，劉發(fā)梅，周銘濤，楊和金，黃加文，蘇 梅

(云南省藥物研究所，云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心，云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點實驗室，云南 昆明650111)

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馬櫻花醇提物藥理作用研究及急性毒性試驗*

趙春梅 ，劉發(fā)梅，周銘濤，楊和金，黃加文，蘇 梅

(云南省藥物研究所，云南白藥集團(tuán)創(chuàng)新研發(fā)中心，云南省中藥和民族藥新藥創(chuàng)制企業(yè)重點實驗室，云南 昆明650111)

目的 觀察馬櫻花醇提物的藥理作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭體法、小鼠二甲苯耳廓腫脹和小鼠剪尾法及玻片法止血實驗，以及急性毒性試驗。結(jié)果 馬櫻花醇提物能減少醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，促進(jìn)小鼠剪尾止血時間，促進(jìn)小鼠凝血時間。小鼠LD50為20.23 g/kg·bw(相當(dāng)于生藥43.88 g/kg·bw)。結(jié)論 提示馬櫻花醇提物具有明顯的鎮(zhèn)痛、抗炎、止血作用，且具有一定毒性。

馬櫻花；鎮(zhèn)痛；抗炎；止血

馬櫻花(RhododendrondelavayiFranch.)為馬櫻杜鵑的花，隸屬杜鵑花科杜鵑花屬。常綠灌木至喬木；樹皮粗厚，呈灰棕色，葉長圓狀披針形，背面密被灰白色至淡褐色海綿狀薄絨毛?；ù厣谥?，呈傘形花序式的總狀花序，深玫瑰紅色；花可入藥。原產(chǎn)滇、黔、桂等省區(qū)，緬甸也有分布。

馬櫻花不僅是道美食，而且具有清熱解毒、涼血止血的功效，具有和血、治月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、跌打損傷、風(fēng)濕痛、吐血等藥性作用。對馬櫻花的藥理作用研究極少，因此，本文對馬櫻花的乙醇提取物進(jìn)行了藥理研究，探討其在鎮(zhèn)痛、抗炎、止血方面的藥理作用，為將來開發(fā)應(yīng)用馬櫻花提供實驗依據(jù)，現(xiàn)將實驗結(jié)果報道如下。

1 實驗材料

1.1 藥物 馬櫻花醇提取物，由云南省藥物研究所提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。提取率為46.1%。使用時用純水配制。藥效試驗給藥劑量以急性毒性試驗結(jié)果為依據(jù)確定。阿司匹林腸溶片，100mg/片，BayerScheringPharma生產(chǎn)，批號：BJ10778；云南白藥，云南白藥集團(tuán)股份有限公司，批號：ZAA1323；冰醋酸，天津市天達(dá)凈化材料精細(xì)化工廠，批號：020112；二甲苯，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，批號：20090831。

1.2 動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。許可證號：SCXK(粵)2013-0002。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)實驗室內(nèi)，室溫(25±2)℃，相對濕度40～70%，喂顆粒標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水和攝食。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)痛試驗 取小鼠48只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，組別及劑量如表1，按照表1劑量ig給藥，每日1次，連續(xù)8天。末次給藥后45min，ip0.6%冰醋酸0.1mL/10g/只，立即記錄15min內(nèi)的扭體反應(yīng)(小鼠出現(xiàn)腹部內(nèi)凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應(yīng)為準(zhǔn))次數(shù)，并計算其抑制率。實驗結(jié)果如下：

表1 馬櫻花醇提取物對醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的影響

注：與空白對照組比，*P<0.05，***P<0.001

馬櫻花醇提取物以5.0g/kg，10.0g/kg(相當(dāng)于生藥10.84g/kg，21.69g/kg)的劑量連續(xù)灌胃給藥8天，2組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：46.78%、46.07%，尤以10.0g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出鎮(zhèn)痛作用。

2.2 抗炎試驗 選用小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，每組雌雄各6只，分組及給藥情況見表2。各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)9天，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20mL/kg體重。末次給藥后30min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05mL，左耳不涂為對照。致炎后1h脫頸椎處死動物，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。實驗結(jié)果見表2。

表2 馬櫻花醇提取物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

注：與空白對照組比，**P<0.01，***P<0.001

馬櫻花醇提取物以5.0g/kg，10.0g/kg(相當(dāng)于生藥10.84g/kg，21.69g/kg)的劑量連續(xù)灌胃給藥9天，2組均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，抑制率分別為：31.04%、37.96%，尤以5.0g/kg，10.0g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出抗炎作用。

2.3 止血試驗(剪尾法) 取小鼠48只，體重(20±2)g，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，按照劑量ig給藥，每日1次，連續(xù)4天。末次給藥后45min，將小鼠四肢固定在操作臺上用剪刀將小鼠尾尖剪斷2mm，待血液溢出時，用秒表開始計時，每隔30s用濾紙吸去血滴直至血液不再溢出為止，計算止血時間，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗。實驗結(jié)果見表3。

表3 馬櫻花醇提物對剪尾法所致小鼠止血時間的影響

注：與空白對照組比，**P<0.01，***P<0.001

馬櫻花醇提物以2.50g/kg，5.00g/kg(相當(dāng)于生藥5.42g/kg，10.84g/kg)的劑量連續(xù)灌胃給藥4天，2組均能不同程度促進(jìn)小鼠剪尾止血時間，促進(jìn)率分別為：13.93%、45.77%，尤以5.00g/kg作用顯著，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出止血作用。

2.4 止血試驗(玻片法) 選用18～22g小鼠48只，按體重隨機(jī)分為4組，每組雌雄各6只，各組均預(yù)先每日灌胃給藥1次，連續(xù)5天，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20mL/kg體重。末次給藥45min后毛細(xì)管眼眶取血，滴于載波片，血滴直徑約5mm，立即用秒表記時。每隔30s用清潔的7號注射針頭自血滴邊緣向里輕輕撥動，觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止即為凝血時間。結(jié)果見表4。

表4 馬櫻花醇提物對玻片法所致小鼠凝血時間的影響

注：與空白對照組比，***P<0.001

馬櫻花醇提物以2.50g/kg，5.00g/kg(相當(dāng)于生藥5.42g/kg，10.84g/kg)的劑量連續(xù)灌胃給藥5天，2組均能不同程度縮短小鼠摘眼球凝血時間，促進(jìn)率分別為：56.41%、53.85%，尤以2.50g/kg，5.00g/kg作用顯著，與空白對照組相比較具有顯著性差異(P<0.001，P<0.001)。顯示出止血作用。

2.5 小鼠急性毒性實驗

2.5.1 正式實驗 給予供試品前動物禁食不禁水約5h50min～6h30min。將合格的動物稱重，按性別和體重分群，淘汰體重偏差較大的動物，再隨機(jī)分為7組，即溶媒對照組和不同給藥供試品組，每組10只，雌雄各5只。

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，將馬櫻花醇提物28.00g/kg·bw作為起始劑量，以 0.9的組距向下增加5個劑量組，即25.20g/kg·bw、22.68g/kg·bw、20.41g/kg·bw、18.38g/kg·bw、16.54g/kg·bw馬櫻花醇提物劑量組，另設(shè)溶媒對照組，溶媒對照組同法給予純水。

2.5.2 試驗結(jié)果與分析

2.5.2.1 毒性反應(yīng) 小鼠灌胃給予供試品馬櫻花醇提物后，在4h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，在4h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為驚厥、抽搐、運(yùn)動失調(diào)。至給藥第3天恢復(fù)。死亡動物解剖觀察，多數(shù)動物出現(xiàn)肺充血現(xiàn)象。給藥組動物的毒性反應(yīng)見表5。

表5 馬櫻花醇提物小鼠灌胃給藥急性毒性試驗急性毒性癥狀及動物死亡情況

5.2 死亡情況 給藥當(dāng)天連續(xù)觀察4h動物死亡情況，以后每天觀察1次，連續(xù)14d，28.00g/kg·bw劑量組給藥當(dāng)日出現(xiàn)動物死亡，給藥當(dāng)日死亡6只動物，給藥第2天死亡4只動物，共死亡10只動物；25.20g/kg·bw劑量組給藥當(dāng)天死亡5只動物，第2天死亡3只動物，共死亡8只動物；22.68g/kg·bw馬櫻花醇提物劑量組給藥當(dāng)天死亡3只動物，第2天死亡4只動物，共死亡7只動物；20.41g/kg·bw劑量組給藥當(dāng)天死亡1只動物，第2天死亡4只動物，共死亡5只動物；18.38g/kg·bw劑量組給藥第2天死亡3只動物，共死亡3只動物；16.54g/kg·bw劑量組給藥當(dāng)天未出現(xiàn)動物死亡，第2天死亡2只動物，共死亡2只動物；動物死亡時間及死亡數(shù)顯示出隨劑量的降低而減慢和減少，顯示出劑量-反應(yīng)關(guān)系。

5.3 體重 試驗期間，于給藥第3、7、14d對各劑量組存活動物稱重，存活小鼠體重均持續(xù)增長。

5.4 解剖觀察 觀察14天結(jié)束后脫頸椎處死的動物進(jìn)行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質(zhì)地等，馬櫻花醇提物各劑量組、溶媒對照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

2.5.3 評價與結(jié)論 在本實驗條件下，對馬櫻花醇提物不同劑量進(jìn)行24h內(nèi)小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗，可見動物于4h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，在4h內(nèi)出現(xiàn)毒性反應(yīng)，主要表現(xiàn)為驚厥、抽搐、運(yùn)動失調(diào)。至給藥第3天恢復(fù)。死亡動物解剖觀察，多數(shù)動物出現(xiàn)肺充血現(xiàn)象。中毒癥狀和動物死亡數(shù)顯示出劑量-反應(yīng)關(guān)系。試驗結(jié)束對存活動物進(jìn)行大體解剖觀察，各組動物臟器、器官的體積、顏色、質(zhì)地等均未見明顯異常。馬櫻花醇提物24h內(nèi)小鼠灌胃給藥LD50為20.23g/kg·bw(相當(dāng)于生藥43.88g/kg·bw)，95%可信限為25.18～37.80g/kg·bw(相當(dāng)于生藥54.62～82.00g/kg·bw)。提示毒性作用可能涉及中樞神經(jīng)、神經(jīng)肌肉及自主神經(jīng)。

3 討論與小結(jié)

馬櫻花是云南民間常用藥。具有清熱解毒、涼血止血的功效，馬櫻花藥理作用的活性成分及其作用機(jī)制研究較少。為了探討和開發(fā)馬櫻花的藥用價值，本文對其進(jìn)行了鎮(zhèn)痛、抗炎、止血藥理作用的實驗研究。結(jié)果表明，急性毒性實驗顯示，馬櫻花醇提物24h內(nèi)小鼠灌胃給藥LD50為20.23g/kg·bw(相當(dāng)于生藥43.88g/kg·bw)，表明其具有一定毒性。馬櫻花能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，可顯著縮短小鼠止血、凝血時間，說明馬櫻花具有鎮(zhèn)痛作用、抗炎作用、止血作用。本實驗結(jié)果為馬櫻花將來產(chǎn)品研發(fā)和臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。

[1]國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會，中華本草[M].第十六卷，上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：27.

30種云南常用有毒民族藥材的安全性、藥效學(xué)及生藥學(xué)研究(NO：2012CG003)。< class="content">作者簡介：趙春梅(1973-)，女，云南昆明市人，副高級工程師，從事藥理研究。

趙春梅(1973-)，女，云南昆明市人，副高級工程師，從事藥理研究。

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