王景暉，石靈萍，劉志壽

（甘肅臨夏州人民醫(yī)院 口腔科，甘肅 臨夏731100）

研究已證實(shí)[1]，口腔中約有500多種細(xì)菌，不注意口腔清潔者的口腔內(nèi)的細(xì)菌達(dá)到1萬(wàn)億個(gè)。一般而言，如果口腔細(xì)菌微生態(tài)破壞，則會(huì)使根尖周?chē)?yán)重?fù)p傷而無(wú)法恢復(fù)。臨床上反復(fù)根管治療仍不能有效清除的根內(nèi)感染為持續(xù)性根尖周感染。研究證實(shí)[2]，根管內(nèi)外微生物是引起持續(xù)性根尖周感染的主要原因。在此背景下，本研究即探討根管治療后并發(fā)根尖周炎對(duì)患者持續(xù)性根尖周感染病原菌的影響，為其研究提供可參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年1月-2014年10月來(lái)我院行根管治療的患者作為研究對(duì)象，男38例，女42例，年齡（60～75）歲，平均（64.3±3.1）歲，診斷符合1999年牙周病分類(lèi)國(guó)際研討會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[3]。根據(jù)治療后是否伴發(fā)根尖周炎分為并發(fā)組40例與未并發(fā)組40例，兩組性別、年齡等基本資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：患牙均為單根牙，根尖周炎穩(wěn)定期，無(wú)牙髓炎癥，探診深度（probing depth，PD）<3mm，無(wú)附著喪失（attachment loss，AL）及牙槽骨吸收。排除標(biāo)準(zhǔn)：根尖周炎急性發(fā)作期，PD≥6mm，AL≥4 mm，根尖X線片示有鄰面牙槽骨吸收，結(jié)締組織病，惡性腫瘤，吸煙史，近3個(gè)月行牙周治療或服用抗生素等。所有患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 研究方法

唾液采集前清水漱口，生理鹽水清除食物殘?jiān)?，吹干后棉球隔濕、碘酊棉球消毒。在無(wú)刺激條件下留取唾液。放于培養(yǎng)基，4℃厭氧袋中保存，1 h內(nèi)送檢行細(xì)菌培養(yǎng)。以1mm直徑取菌環(huán)于培養(yǎng)基上，給予相應(yīng)的溫度及pH值，培養(yǎng)48 h后取合適的菌落進(jìn)行鑒定。在×1 000顯微鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)菌細(xì)胞，共分為球菌、桿菌、梭狀菌、絲狀菌、彎曲菌和螺旋體6類(lèi)，以百分比表示。將轉(zhuǎn)種培養(yǎng)基分別接種于牛心腦浸液培養(yǎng)基和胰蛋白酶大豆血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)，條件：氮?dú)釴2為80%、二氧化碳CO2為10%和氫氣H2為10%的無(wú)氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)3～7 d。分析牙齦卟啉單胞菌（porphyromonas gingivalis，Pg）、核梭桿菌（fusobacterium nucleatum，F(xiàn)n）、福塞氏類(lèi)桿菌（bacteroides forsythus，Bf）和放線桿菌（actinobacillus pleuropneumoniae，Aa）的檢出率。并采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。數(shù)據(jù)資料經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)的計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布資料采用中位數(shù)表示，采用秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或者精確概率法。P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組患者致病菌分布情況

不同組患者致病菌分布情況結(jié)果顯示：并發(fā)組檢出20個(gè)菌門(mén)，未并發(fā)組檢出18個(gè)菌門(mén)。兩組患者檢出菌屬構(gòu)成比比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；并發(fā)組放線菌門(mén)構(gòu)成比明顯高于未并發(fā)組（P<0.05）；其他菌門(mén)構(gòu)成比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 不同組患者致病菌培養(yǎng)情況

不同組患者致病菌培養(yǎng)情況結(jié)果顯示：并發(fā)組Aa檢出率明顯高于未并發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但兩組Pg、Fn和Bf檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 不同組患者唾液ALP活性情況分析

不同組患者唾液ALP活性情況結(jié)果顯示：并發(fā)組患者唾液ALP活性明顯高于未并發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表3。

表1 不同組患者致病菌分布情況

表2 不同組患者致病菌培養(yǎng)情況

表3 不同組患者唾液ALP活性情況分析（μU/30 s，±s）

表3 不同組患者唾液ALP活性情況分析（μU/30 s，±s）

組別 例數(shù) ALP并發(fā)組 40 194.32±56.65未并發(fā)組 40 150.45±89.12 t值 3.938 P值 0.000

3 討論

臨床上根尖周病是指局限于根尖部的牙周組織，包括牙骨質(zhì)、牙周膜和牙槽骨的炎癥[3]。目前根尖周感染主要采用根管治療，其主要是通過(guò)清除根管內(nèi)的壞死或壞疸物質(zhì)，進(jìn)行適當(dāng)?shù)南?，并根管充填去除不良刺激，促進(jìn)尖周病變愈合。研究發(fā)現(xiàn)[4]，根管治療根尖周病的成功率為86.00%～98.00%，有部分患者根管治療療效不佳，甚至反復(fù)多次治療仍未痊愈，成為持續(xù)性根尖周感染。凌均柴等[5]研究認(rèn)為，根管中細(xì)菌滯留是引起持續(xù)性根尖周感染的主要原因。因此，更好的了解根管治療后是否并發(fā)根尖周炎患者根管內(nèi)的細(xì)菌情況，可促進(jìn)研究持續(xù)性根尖周感染的發(fā)生機(jī)制。

本研究分析根管內(nèi)致病菌分布情況發(fā)現(xiàn)，并發(fā)組檢出20個(gè)菌門(mén)，未并發(fā)組檢出18個(gè)菌門(mén)。兩組厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)、放線菌門(mén)所占比例均比較高，在前3位。但并發(fā)組放線菌門(mén)構(gòu)成比明顯高于未并發(fā)組，其他菌門(mén)構(gòu)成比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?？梢?jiàn)是否并發(fā)根尖周炎對(duì)根管內(nèi)菌類(lèi)分布產(chǎn)生影響，放線菌門(mén)比例增高可能增加并發(fā)根尖周炎發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。王娟等[6]進(jìn)行類(lèi)似研究發(fā)現(xiàn)，檢出132種細(xì)菌，分屬于21個(gè)菌門(mén)和96個(gè)菌屬。在門(mén)水平，伴根尖周炎組群落的主要菌門(mén)為厚壁菌門(mén)[32%（18 534/58 688）]、變形菌門(mén)[27%（15 626/58 688）]、放線菌門(mén)[15%（8 685/58 688）]和梭桿菌門(mén)[8%（4 761/58 688）]；無(wú)根尖周炎組群落的主要菌門(mén)為厚壁菌門(mén)[3l%（16 941/55 480）]、變形菌門(mén)[27%（14 748/55 480）]、梭桿菌門(mén)[10%（5 307/55 480）]和放線菌門(mén)[9%（4761/55 480）]，兩組比較伴根尖周炎組放線菌門(mén)比例明顯高于無(wú)根尖周炎組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與本研究結(jié)果相似。

本研究進(jìn)一步分析致病菌培養(yǎng)情況發(fā)現(xiàn)，并發(fā)組Aa檢出率明顯高于未并發(fā)組?？梢?jiàn)Aa比例的增高可能與持續(xù)性根尖周感染存在相關(guān)性。李欣[7]通過(guò)變性梯度凝膠電泳技術(shù)分析根管治療后伴發(fā)根尖周炎對(duì)根管內(nèi)細(xì)菌影響發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是否伴發(fā)根尖周炎根管內(nèi)均可檢測(cè)到細(xì)菌定植，但不同菌類(lèi)構(gòu)成比有差異，但該研究未進(jìn)一步通過(guò)定性分析了解細(xì)菌種類(lèi)。SETZER等[8]通過(guò)基因豐度檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，放線菌屬在伴根尖周炎組菌群中的豐度和檢出率分別為6.00%和100.00%，而在無(wú)根尖周炎組中分別為2.00%和50.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。分析認(rèn)為臨床上Aa感染可表現(xiàn)為慢性肉芽腫，可伴有瘺道形成，其可有硫磺顆粒形成[9]，與持續(xù)性根尖周感染有相似表現(xiàn)。目前關(guān)于Aa在持續(xù)性根尖周感染中的作用機(jī)制尚不明確，其可能與Aa的黏附力、共聚能力以及逃避宿主免疫反應(yīng)有關(guān)。Aa有發(fā)達(dá)的菌絲，可以與其他細(xì)菌發(fā)生共聚而形成生物膜樣屏障，進(jìn)而可以避免根管治療中沖洗等操作的影響[10]；此外生物膜樣屏障亦可保護(hù)Aa進(jìn)而逃避宿主免疫反應(yīng)[11]。有研究認(rèn)為[12]，Aa較強(qiáng)的生存能力可以使其在根管治療后根管內(nèi)低營(yíng)養(yǎng)環(huán)境中長(zhǎng)期生存。

ALP是一種能夠?qū)?duì)應(yīng)底物去磷酸化的磷酸酶，可以進(jìn)行去磷酸化作用，在堿性環(huán)境下最為有效[13]。本研究分析不同組患者唾液ALP活性情況發(fā)現(xiàn)，并發(fā)組患者唾液ALP活性明顯高于未并發(fā)組。分析可能與Aa可以促進(jìn)牙周組織溫度、pH值升高，抑制正常有益菌活性，引起ALP分泌增加。

綜上所述，本研究顯示，根管治療后伴發(fā)根尖周炎可引起根管內(nèi)細(xì)菌比例改變，放線菌與根管治療后持續(xù)性根尖周感染存在相關(guān)性。

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