于建超,梁玉紅,賈 寧
(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,甘肅 蘭州730070;2.武威市涼州區(qū)畜牧獸醫(yī)局,甘肅 武威733000;3.武威市涼州區(qū)中壩鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,甘肅 武威733000)
雞馬立克氏病(MAREK`S DISEASE MD)是由皰疹病毒引起的禽的一種傳染病,是雞最嚴(yán)重的傳染病之一,其主要病理特征是患禽全身淋巴組織增生引起的淋巴細(xì)胞瘤[1]。MD存在于世界上所有養(yǎng)禽國家和地區(qū),其危害隨著養(yǎng)雞業(yè)的集約化而增大,受害雞群的損失從1%到30%以上不等,個別雞群可達(dá)50%以上。[2]我國從20世紀(jì)70年代中期開始先后建立了大、中型機(jī)械化或半機(jī)械化養(yǎng)雞場,在此期間因從國外引種和各地種苗的頻繁轉(zhuǎn)運(yùn),使得MD在國內(nèi)廣為流傳。[3]本論文從MD流行情況、病理學(xué)研究入手,繼而對病理變化、診斷方法、防制方法等進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。根據(jù)馬立克氏病臨床癥狀、病理變化、病原診斷的研究,并通過臨床癥狀和病理變化以及結(jié)合血清學(xué)診斷技術(shù),快速準(zhǔn)確的診斷疾病,以進(jìn)行相應(yīng)的預(yù)防和治療,對于預(yù)防和減輕該病的再度發(fā)生避免造成的重大的經(jīng)濟(jì)損失有非常重要的意義,同時(shí)也為養(yǎng)雞場制定長期而有效的綜合防制措施提供依據(jù)。
1.1 被檢病料
被研究雞為該養(yǎng)殖場發(fā)現(xiàn)的10例疑似患馬立克氏病的被診患雞(♂)。采用頸動脈放血致死后立即開腹,進(jìn)行病理學(xué)剖檢,并采取組織材料。在放血前取被檢雞富含羽髓的翅羽或身體其他部位的大羽(或新生羽)數(shù)根。
1.2主要試劑和藥品
瓊脂糖、雞馬立克氏病病毒(MDV)抗原、MDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。
1.3主要儀器和設(shè)備
自動雙重純水儀、高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿、電子天平、臺式高速離心機(jī)。
2.1臨床診斷觀察患雞的精神狀態(tài)、發(fā)育情況、運(yùn)動情況、采食量、糞便情況、皮膚、黏膜是否有異常等進(jìn)行綜合分析。
2.2剖檢病變
對患雞和病死雞進(jìn)行剖檢,詳細(xì)記錄剖檢變化。主要觀察皮膚、外周神經(jīng)、心、肝、脾、肺、腎、法氏囊、腺胃、腸道等器官的病理變化。
2.3瓊脂免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
瓊脂平板的制備按馬立克氏病技術(shù)操作規(guī)程(GB/T 18643-2002)操作。在已制備好的瓊脂平板上,用打孔器按中央1個空,周圍6個孔,孔徑3mm的標(biāo)準(zhǔn)打孔。打孔完小心挑出孔內(nèi)凝膠,在酒精燈上封底。
取富含羽髓的羽毛數(shù)根,擠壓出羽髓與1.5ml離心管中,離心分離出羽液,作為被檢樣品待用。用微量移液器分別取4份被檢樣品,注入外周的2、3、5、6號孔;向1、4號孔加注MDV標(biāo)準(zhǔn)抗原;中心孔加注MDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清。以上孔均以加滿不溢出為度。加樣完畢,蓋上平皿蓋,做好標(biāo)記、編號,放入濕盒內(nèi),置于37℃溫箱中感作24h,觀察并記錄結(jié)果[4]。
3.1臨床診斷結(jié)果
10例被診患雞的臨床癥狀都有其共同點(diǎn):病雞進(jìn)神沉郁、生長發(fā)育緩慢、下痢、食欲下降、明顯消瘦,最終衰竭死亡。有的病雞沒有出現(xiàn)癥狀就已經(jīng)死亡了。有的雞出現(xiàn)走路不穩(wěn),有一側(cè)或兩側(cè)腿麻痹的現(xiàn)象。有的病雞羽毛凌亂,雞冠和肉髯顏色蒼白。有的病雞腹瀉可見白色或黃色的稀糞沾染于尾部。病側(cè)肌肉萎縮,爪子彎曲,翅膀也松弛無力、下垂,嚴(yán)重的不能站立,趴在地面,頸斜眼閉(圖1-1)。有的病雞一側(cè)肢和羽翼麻痹,呈劈叉狀,或縮頸仰頭,呈觀星狀,患雞呼吸困難。有的病雞一側(cè)眼睛失明,瞳孔邊緣不整齊,虹膜正常色澤消失呈灰白色(圖1-2)。有的病雞眼瞼水腫、虹膜發(fā)炎,瞳孔縮小,眼球凹陷。
圖1-1病雞爪子彎曲,走路不穩(wěn)
圖1-2病雞虹膜呈灰白色
3.2剖檢病變結(jié)果
幾乎在全身各個組織器官都能見到淋巴細(xì)胞性腫瘤。內(nèi)臟發(fā)生病變時(shí)主要表現(xiàn)組織器官體積明顯增大,嚴(yán)重時(shí)其實(shí)質(zhì)可被腫瘤組織部分或者完全取代;如果呈局灶性增生時(shí),呈灰白色結(jié)節(jié)狀,質(zhì)地堅(jiān)硬,切面平滑。受損器官依次是:肝、脾、肺、心、腸系膜、腎、腺胃、腸道、虹膜、骨骼肌和皮膚等。
(1)外周神經(jīng)及大腦 10例病雞外周神經(jīng)都有不同程度的病變,主要表現(xiàn)在坐骨神經(jīng)、腰薦神經(jīng)叢、迷走神經(jīng)、肋間神經(jīng)和臂神經(jīng)。變化主要是水腫,多為單側(cè)性腫粗,神經(jīng)彈性降低,橫紋消失。腰薦神經(jīng)叢和臂神經(jīng)叢,病變多為單側(cè)的,受害神經(jīng)多因局灶性或彌散性細(xì)胞增生而變粗,可達(dá)正常的2-3倍甚至更大,呈灰色或黃色,伴隨水腫發(fā)生時(shí),則呈現(xiàn)白色(圖2-1)。
圖2-1 病雞兩側(cè)神經(jīng)不對稱
(2)肝臟:10例病雞的肝臟均出現(xiàn)不同程度的腫大,質(zhì)地變脆,可見粟粒大的灰白色腫瘤彌漫性的分布在肝臟表面,突出于表面(圖2-2)。有的肝表面或?qū)嵸|(zhì)內(nèi)可見粗大、隆起的腫瘤結(jié)節(jié),切面平整、光滑,肝小葉結(jié)構(gòu)模糊。
(3)心臟:在心外膜下、心臟的表面、冠狀溝和心肌纖維間分布著大小不等的灰白色腫瘤結(jié)節(jié),有脂肪樣光澤,呈彌漫性增生,心肌蒼白(圖2-3)。
(4)脾臟:體積腫大,增大2-6倍不等,表面也可見針尖大小或黃豆大小的腫瘤結(jié)節(jié),呈灰白色,病灶質(zhì)地均勻(圖2-4)。病變嚴(yán)重的脾組織基本被腫瘤組織所取代。
(5)腺胃:體積腫大、腺胃壁增厚、質(zhì)地堅(jiān)實(shí),漿膜下和胃壁切面上游大小不等的白色腫瘤,漿膜蒼白,切開后可見黏膜出血,有2例胃壁有灰白色腫塊(圖2-5)。
(6)肺臟:有6例肺臟散在大小不等的灰白色腫瘤結(jié)節(jié),呈彌漫性分布,病變肺組織堅(jiān)實(shí),切面質(zhì)地均勻。嚴(yán)重的病例可見大部分或全部肺組織被腫瘤組織所取代。
(7)法氏囊:均可見法氏囊萎縮,其皺褶大小,薄厚不均,有的可見腫瘤結(jié)節(jié)。
(8)骨骼肌:病變最常見于胸部肌肉,病變肌肉可見條紋狀和結(jié)節(jié)狀的腫瘤,肌纖維失去光澤,呈橙黃色或灰白色。
圖2-2病雞肝臟明顯腫大
圖2-3病雞心臟表面分布灰白色結(jié)節(jié)
圖2-4病雞脾臟高度腫大, 有白色結(jié)節(jié)
圖2-5腺胃腫大,黏膜上有腫瘤結(jié)節(jié)
3.3瓊脂免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)結(jié)果
將瓊脂板置于燈光下進(jìn)行觀察,MDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與加了MDV標(biāo)準(zhǔn)抗原的陽性對照孔有清晰的白色沉淀線。MDV標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與加了10份被撿樣的孔之間均有白色沉淀線產(chǎn)生,但編號為5、7、9的這3孔之間的沉淀線不是很明顯。這與實(shí)驗(yàn)預(yù)期的結(jié)果一致,證明這10例患雞的羽髓中都含有MDV。(圖3-1)
圖3-1羽髓瓊脂擴(kuò)散結(jié)果
MD是一種常見的雞的具有傳染性的腫瘤性疾病,以外周神經(jīng)和各種器官和組織不同程度的腫瘤增生為特征。在對其進(jìn)行診斷時(shí),要與禽白血病、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥等鑒別診斷,必需進(jìn)行血清學(xué)檢測,必要時(shí)可做分子生物學(xué)檢測來幫助確診。本試驗(yàn)在對病雞進(jìn)行臨床癥狀觀察后懷疑為馬立克氏病,隨后進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查、病理解剖結(jié)果作為初步診斷的依據(jù),最后采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)對病雞樣品中的病原進(jìn)行了檢測,確診患雞為感染MDV引起的MD。在病理學(xué)觀察中還發(fā)現(xiàn)一些細(xì)菌性的病變,這可能是由于MD還是一種免疫抑制性疾病,可導(dǎo)致機(jī)體免疫力降低,從而引發(fā)細(xì)菌性感染的情況。
雞MD的血清學(xué)檢測最常用的就是瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),徐世謙等[5]認(rèn)為在發(fā)病初期羽髓抗原檢出率高,發(fā)病中后期血清抗體的檢出率高,羽髓抗原的檢出率反而降低。本試驗(yàn)檢測結(jié)果表明:這10例病雞處于不同的發(fā)病階段,編號為5、7、9的病雞處于發(fā)病后期,這也與病理剖檢觀察結(jié)果一致。
[1]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)(第五版)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社.2006,357-362.
[2]錢雍生.雞馬立克氏病的綜合防制措施[J].四川畜牧獸醫(yī),2001,28(131,12):41-42.
[3]吳志明,劉蓮芝,李桂喜.動物疫病防控知識寶典[M].中國農(nóng)業(yè)出版社.2006:204-209.
[4]于致茂,梁榮.最新實(shí)用雞病診斷與防治[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000.
[5]徐世謙,蔣宏偉,羅小榮.雞馬立克氏病臨床診斷技術(shù)與綜合防制措施[J].畜牧獸醫(yī)雜志,2004,23(5):30-32.