郭洪梅， 蘇丹， 馬壽欣， 王傳春

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊261061）

大量中藥對機(jī)體的免疫增強(qiáng)作用與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，但不同類型的中藥對免疫內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用并不完全一致[1]。為進(jìn)一步改進(jìn)和篩選對豬圓環(huán)病毒有免疫增強(qiáng)作用的中藥，課題組根據(jù)前期的研究成果，課題組選取了三味有代表性的中藥，觀察了其對豬圓環(huán)病毒的抗病作用，現(xiàn)報(bào)道如下，供同仁參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物 所用中藥飲片黃芪、板藍(lán)根、補(bǔ)骨脂均購自北京同仁堂醫(yī)藥公司（濰坊店），按常規(guī)方法煎煮3次，合并煎液，再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至每毫升含生藥1g，離心取上清，分裝。藥液煮沸30min滅菌后，4℃冰箱保存。

1.2 動(dòng)物分組及給藥 28日齡非免疫健康三元雜交豬80頭，隨機(jī)分為5組，分別為中藥1組（黃芪）、中藥2組（板藍(lán)根）、中藥3組（補(bǔ)骨脂）、陰性對照組（注射疫苗，但不給藥）和空白對照組（不注射疫苗，也不給藥），每組16頭。除陽性對照組外，各組分別頸部肌肉注射PCV-2滅活疫苗2mL，空白對照組肌肉注射等量生理鹽水2mL。中藥試驗(yàn)組于免疫前3天開始給藥，添加比例為2%，連喂7天，陰性對照組和陽性對照組自由采食，試驗(yàn)期為30天。

分別在試驗(yàn)開始前、免疫后第28天前腔靜脈采血檢測相關(guān)指標(biāo)。

1.3 測定項(xiàng)目與方法

1.3.1 臨床癥狀：攻毒24h后觀察各組豬的精神、飲食、糞便等圓環(huán)病毒病的臨床癥狀變化。

1.3.2 病理變化：剖檢死亡豬，確定為豬圓環(huán)病毒病后，記錄病理變化情況。

1.3.3 死亡率：死亡總數(shù)：試驗(yàn)期間死亡，出現(xiàn)PCV臨床癥狀和／或尸體剖檢有PCV特征病變者，判定為感染死亡。

死亡率=死亡總數(shù)×100%／該組試驗(yàn)數(shù)。

1.3.4 血清抗體效價(jià)檢測 采用ELISA抗體效價(jià)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)用SPSS13.0forwindows統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，用卡方檢驗(yàn)比較死亡率差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 臨床癥狀觀察結(jié)果 各組在試驗(yàn)期間出現(xiàn)了豬圓環(huán)病毒的典型癥狀，表現(xiàn)為消瘦、黃疸、生長發(fā)育不良、呼吸困難、腹瀉、皮膚的炎癥等。陽性對照組，出現(xiàn)癥狀的時(shí)間較早，為試驗(yàn)開始后5天陸續(xù)發(fā)病，癥狀典型，死亡數(shù)也較試驗(yàn)組多。中藥試驗(yàn)組發(fā)病時(shí)間延遲，癥狀明顯較輕，出現(xiàn)死亡的時(shí)間延遲，耐過豬只恢復(fù)較快，尤其以中藥3組效果最好。

2.2 病理變化觀察結(jié)果 試驗(yàn)期間死亡豬主要的病理變化為消瘦、貧血、皮膚蒼白和黃疸，淋巴結(jié)腫大，切面為均勻的白色；肺部有灰褐色炎癥和腫脹，堅(jiān)硬似橡皮樣。嚴(yán)重者肝臟發(fā)暗，呈淺黃到橘黃色外觀，萎縮，肝小葉間結(jié)締組織增生；腎臟水腫，蒼白，被膜下有壞死灶；脾臟輕度腫大，質(zhì)地如肉；胰、小腸和結(jié)腸也常有腫大及壞死病變。

2.3 死亡率統(tǒng)計(jì)結(jié)果 各組死亡率由高到低依次為陽性對照組>陰性對照組>中藥2組>中藥1組>中藥3組。各用藥組相比，方3組的死亡率最低12.50%，比陽性對照組降低了43.75%，差異顯著（p＜0.05），比方1組降低12.50%，具體見表1。

表1 各組死亡率數(shù)和死亡率

2.4 各組豬抗體效價(jià)測定結(jié)果 各免疫組試驗(yàn)結(jié)束后抗體水平均高于攻毒以前，只有陽性對照組抗體水平隨著養(yǎng)殖時(shí)間的延長而降低。試驗(yàn)結(jié)束后，各組抗體效價(jià)由高到低依次中藥3組＞中藥2組＞中藥1組＞陰性對照組＞陽性對照組，3個(gè)中藥組均顯著高于陽性對照組和陰性對照組（P＜0.05），且陰性對照組顯著高于陽性對照組（P＜0.05），詳見表2。

表2 各期血清抗體效價(jià)測定結(jié)果 （OD 值）

3 討論

3.1 中藥免疫增強(qiáng)劑對PCV2的保護(hù)作用 黃芪常用中藥之一，可以實(shí)衛(wèi)而斂汗、榮筋骨、生肌肉[2]。現(xiàn)代研究認(rèn)為，黃芪可以顯著地增強(qiáng)機(jī)體的增強(qiáng)非特異性免疫功能和特異性免疫功能[3]。對非特異性免疫功能而言，黃芪可以通過誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生7-干擾素來介導(dǎo)NK細(xì)胞活性的作用增強(qiáng)；對于特異性免疫功能而言，黃芪能明顯增強(qiáng)細(xì)胞免疫，促進(jìn)PHA、COnA、PWM引起的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化[4]。板藍(lán)根具有清熱解毒、涼血消腫、利咽等作用，其免疫作用表現(xiàn)為能顯著增加正常動(dòng)物的脾重、白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞數(shù)[5]。補(bǔ)骨脂在中醫(yī)看來具有補(bǔ)腎壯陽、補(bǔ)脾健胃，可以納氣止瀉，是味熱性藥物，通過提高白細(xì)胞百分率增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能。三者都有提高機(jī)體免疫力的作用，因此中藥組的死亡率均低于陰性對照組和陽性對照組[6]。

另外，補(bǔ)骨脂的溫?zé)崽攸c(diǎn)及補(bǔ)腎壯陽的作用是黃芪和金銀花所不及的，因此添加補(bǔ)骨脂的試驗(yàn)組保護(hù)率最好，高于其余兩個(gè)中藥組。

3.2 中藥免疫增強(qiáng)劑對PCV2免疫功能的影響 抗體效價(jià)是反映體液免疫狀態(tài)的主要指標(biāo)。抗體水平高，機(jī)體對病毒感染的抵抗力往往就越強(qiáng)，豬群受感染程度也更輕[8]。該試驗(yàn)證明，3個(gè)中藥都能夠顯著提高機(jī)體的抗體水平，這與所選中藥具有增強(qiáng)免疫的作用有關(guān)。尤其是補(bǔ)骨脂，其療效于PCV2的證候一致，患豬表現(xiàn)為皮炎、花斑腎等，中醫(yī)認(rèn)為以上癥狀的出現(xiàn)是脾腎兩虛所導(dǎo)致的[9、10]。因此，選擇中藥防治疫病時(shí)須結(jié)合機(jī)體的中醫(yī)證候辨證施治，方能取得最佳效果。

[1] 王建紅，王敏璋，伍慶華，等.中醫(yī)藥調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)研究進(jìn)展[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，11(12)：794-796.

[2] 黃吉春，程基焱，劉廣益，等.中藥對神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控研究現(xiàn)狀和前景[J].四川解剖學(xué)雜志，2003，11(3)：25-27.

[3]OtaB，VeraB，F(xiàn)rankWPOptimumconditionsforthe chickenlymphocytetransfonnationtest[J].AvianDis，1 992，(36)：945-955.

[4]ReynoldsDL，MaraqaAD.Protectiveimmunity againstNewcastledisease：Ther01ecell1T1ediated immunitv[J].AvianDis，2000，(44)：145-154.

[5]李祥瑞，金紅，王秀麗，等.以MTT比色法檢測雞脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化效果[J].畜牧與獸醫(yī)，1996，28(1)：3～5.

[6]徐為燕，主編.獸醫(yī)病毒學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998：222～225.

[7]鄭鐵鎖，王貴平，胡元亮，等.復(fù)方中藥對雛雞外周血T淋巴細(xì)胞增殖的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2010，42(2)：110～111.

[8]陸承平主編.獸醫(yī)微生物學(xué)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，2001.

[9]孫萬邦，主編.醫(yī)學(xué)免疫學(xué)與微生物學(xué)[M].高等教育出版社，2005.

[10]PapanicolaouDA，WilderRL，ManolagasSC，et a1.Thepathophysiologicrolesofinterleukin.6in humandisease.AnnInternMed，1998，128(2)：127～37.

[1l]陳杰.家畜生理學(xué)[M].第三版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003：371-460