楊鈞，張藝芳，何愛(ài)武，李青

陜西中藥研究所藥理研究部，陜西咸陽(yáng) 712000

隨著我國(guó)人們生活水平的日益提高和人口老齡化，糖尿病患病率迅速升高，對(duì)糖尿病的防治已經(jīng)成為了醫(yī)藥學(xué)工作者的重要課題。安替胰抗為陜西新藥技術(shù)開(kāi)發(fā)中心開(kāi)發(fā)的擬用于降低血糖的保健品，主要用于高血糖人群的降糖保健或者輔助用藥。為了觀察其不同樣品的降血糖作用，進(jìn)行安替胰抗對(duì)四氧嘧啶致小鼠高血糖動(dòng)物模型的影響作用研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF昆明小鼠，雌雄兼用，體重18～22 g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08-005號(hào)。

1.2 藥物

四氧嘧啶（sigma公司）、安替胰抗 1、2、3 號(hào)樣品均由陜西新藥技術(shù)開(kāi)發(fā)中心提供；鹽酸苯乙雙胍片（降糖靈片）：25mg/片，山東省莒南制藥廠，批號(hào)070203。

1.3 儀器

PB203-N電子精密天平，梅特勒—托利多；羅康全活力型血糖檢測(cè)儀，德國(guó)羅氏診斷有限公司；羅康全活力型血糖試紙 批號(hào)：22961131，德國(guó)羅氏診斷有限公司。

2 方法

安替胰抗對(duì)四氧嘧啶型高血糖小鼠降糖作用的研究預(yù)實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，60只小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只，雌雄各半。分別IP四氧嘧啶（少量多次配制，臨用時(shí)用冷藏的生理鹽水配制，黑色塑料紙包裹容器，置冰浴上）160mg/kg，180mg/kg，200mg/kg，220mg/kg，IP容量均為0.1ml/kg。IP前12 h禁食不禁水，注射后3 d，用血糖儀檢測(cè)血糖（測(cè)前12 h禁食不禁水），所有動(dòng)物均尾靜脈采血，觀測(cè)血糖升高水平及成模率，最后確定糖尿病小鼠造模IP四氧嘧啶的最佳劑量應(yīng)為200mg/kg。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，隨機(jī)挑選10只小鼠，雌雄各半，作為為正常對(duì)照組。正常對(duì)照組小鼠，IP同容量生理鹽水。其余小鼠均IP四氧嘧啶200mg/kg，3 d后測(cè)定小鼠的血糖水平，測(cè)前12 h禁食不禁水。從IP四氧嘧啶小鼠中挑選血糖值大于11.1 mmol/L小鼠[1]按血糖水平平均分為模型對(duì)照組、安替胰抗1、2、3號(hào)樣品組、陽(yáng)性藥物組，每組10只，雌雄各半。

正常對(duì)照組、模型對(duì)照組ig同容量生理鹽水，陽(yáng)性對(duì)照組 ig 鹽酸苯乙雙胍（75mg/kg）,安替胰抗 1、2、3 號(hào)樣組分別 ig 安替胰抗 1、2、3 號(hào) 0.9、4.0、1.5 g/kg， 給藥容量均為20ml/kg。1次/d，連續(xù)28 d。分別于給藥14、28天測(cè)定小鼠血糖值，觀測(cè)血糖水平的變化。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察小鼠情況，同時(shí)每周稱量一次體重，觀測(cè)體重增長(zhǎng)情況。所有數(shù)據(jù)均采用T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[2-4]。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)模型小鼠一般情況及體重的影響

給藥過(guò)程中，模型對(duì)照組小鼠與正常對(duì)照組小鼠比較，各鼠均逐漸出現(xiàn)毛發(fā)枯槁，發(fā)黃、身體消瘦、多尿等癥狀，安替胰抗1、2號(hào)樣品組則部分小鼠出現(xiàn)以上變化，安替胰抗3號(hào)樣則基本無(wú)此情況出現(xiàn)。造模后動(dòng)物體重會(huì)發(fā)生增長(zhǎng)緩慢的情況，1、2、3號(hào)樣均對(duì)體重增長(zhǎng)均有一定的改善作用，以3號(hào)樣為最佳。

3.2 對(duì)模型小鼠血糖值的影響

結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，模型動(dòng)物制作均成功，各組與正常對(duì)照組比較均有極顯著性差異（P＜0.01），安替胰抗1、2號(hào)樣對(duì)模型動(dòng)物血糖值影響不大，而3號(hào)樣在給藥14、28 d均能顯著降低模型動(dòng)物血糖值（P＜0.05），隨著給藥時(shí)間的增加，其對(duì)抗四氧嘧啶所致小鼠高血糖效果越佳。

表1 安替胰抗對(duì)四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖值的影響[（±s)，n=10]

表1 安替胰抗對(duì)四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖值的影響[（±s)，n=10]

注：組間進(jìn)行 t檢驗(yàn)， 與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 劑量（g/kg）正常對(duì)照組模型對(duì)造組安替胰抗1號(hào)安替胰抗2號(hào)安替胰抗3號(hào)鹽酸苯乙雙胍血糖值（mmol/L）給藥前 給藥第14天 給藥第28天--0.9 4.0 1.5 0.075(5.09±1.02)△△(19.41±2.06)**(19.94±2.44）**(18.39±2.82)**(18.49±1.53)**(19.21±2.15)**(5.28±0.82)△△(21.37±1.89)**(20.19±2.35)**(19.65±2.17)**(18.06±1.84)**△△(13.64±1.67)**△△(5.23±0.63)△△(23.21±2.64)**(21.16±2.62)**(21.02±3.57)**(13.02±1.32)**△△(10.97±1.69)**△△

4 討論

四氧嘧啶是一種特異性β細(xì)胞毒劑，可選擇性破壞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島β細(xì)胞，引發(fā)實(shí)驗(yàn)性糖尿病[5]，此法制作模型血糖值維持高值時(shí)間較長(zhǎng)，比較穩(wěn)定。造模過(guò)程中，因四氧嘧啶容易分解，故配制過(guò)程較為關(guān)鍵，應(yīng)多次少量配制，使用中避光保溫，保證模型成功率，另外腹腔注射四氧嘧啶用量會(huì)影響模型成功率。我們進(jìn)行了預(yù)試，綜合造模成功率及四氧嘧啶用量，發(fā)現(xiàn)采用200mg/kg劑量造模最為經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定。

從該實(shí)驗(yàn)情況分析，安替胰抗1、2號(hào)樣對(duì)于四氧嘧啶導(dǎo)致的高血糖小鼠均無(wú)顯著療效。但是在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察到2組小鼠基本活動(dòng)自如，毛發(fā)光滑，與正常對(duì)照組比較體重增加程度前期基本相同，血糖值與模型對(duì)照組比較相對(duì)穩(wěn)，不再上升。安替胰抗3號(hào)樣，動(dòng)物體重穩(wěn)定，毛發(fā)正常。另外觀測(cè)到小鼠飲水量比前期有明顯下降，血糖值與模型對(duì)照組比較在給藥第14、28 d有極顯著下降（P＜0.01），并且隨給藥時(shí)間的增加，其對(duì)抗四氧嘧啶所致的血糖升高效果越佳，有一定的時(shí)效關(guān)系。其確切作用還需進(jìn)一步研究，明確其量效關(guān)系及作用機(jī)理，進(jìn)行進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。

[1]李儀奎,金若敏,王欽茂,等.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].2版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006：604.

[2]嵇揚(yáng)，張癸榮，王文俊.建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究[J].中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21(7):1125-1126.

[3]周晶,孟林,黃建安,等.地骨皮對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用[J].中成藥,2001,6(23):424-425.

[4]嵇揚(yáng),陳善,張癸榮,等.枳蓂水提取液對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和肝糖原含量的影響[J].中藥材,2002,3(25):190-191.

[5]Brodof BN.Diabetes Mellitus and Obesity[M].Baltlmone Condon：Williams Wilkigs,1982：273.