張超賢, 郭李柯

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 1消化內(nèi)科，2口腔科，河南 衛(wèi)輝 453100)

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抵抗素基因啟動子-420C/G、細胞色素P4501A1-MspI多態(tài)性與吸煙的交互作用對非酒精性脂肪性肝病的影響

張超賢1△, 郭李柯2

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院1消化內(nèi)科，2口腔科，河南 衛(wèi)輝 453100)

目的： 探討抵抗素基因啟動子-420C/G、細胞色素P4501A1- MspI(CYP1A1- MspI)基因多態(tài)性與吸煙的交互作用與非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的關(guān)系。方法: 采用病例-對照研究的方法，以1 200例NAFLD患者及1 200例健康對照者的外周血白細胞為樣本，利用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)技術(shù)分析了抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1- MspI基因多態(tài)性。結(jié)果: -420C/G (GG)基因型和CYP1A1- MspI(m2/m2)基因型頻率分布分別為49.75%、50.08%(病例組)和24.00%、24.25%(對照組)，兩者經(jīng)χ2檢驗差異顯著(P<0.01)。-420C/G (GG)基因型者患NAFLD的風(fēng)險顯著增加。CYP1A1- MspI (m2/m2)基因型者患NAFLD的風(fēng)險也顯著增加?；蛲蛔兊膮f(xié)同分析發(fā)現(xiàn)-420C/G (GG)/ CYP1A1- MspI (m2/m2)基因型者在NAFLD組和對照組中的分布頻率分別為39.83%和12.83%，兩者經(jīng)χ2檢驗有顯著差異(P<0.01)。-420C/G (GG)/ CYP1A1- MspI (m2/m2)基因型者患NAFLD的風(fēng)險顯著增加。病例組的吸煙率顯著高于對照組的吸煙率(P<0.01)，吸煙與-420C/G (GG)和CYP1A1- MspI (m2/m2)基因型均有交互作用。結(jié)論: -420C/G (GG)、CYP1A1- MspI (m2/m2)基因型和吸煙是NAFLD的易患因素，基因多態(tài)性與吸煙的交互作用增加了NAFLD的發(fā)病風(fēng)險。

非酒精性脂肪性肝??； 抵抗素基因啟動子-420C/G； 細胞色素P4501A1-MspI； 基因多態(tài)性； 吸煙

非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)的確切發(fā)病機制目前尚不清楚，以二次打擊學(xué)說較為流行，該學(xué)說認(rèn)為胰島素抵抗會導(dǎo)致肝臟脂肪沉積，成為NAFLD發(fā)病過程中的一次打擊，而在肝臟脂肪沉積基礎(chǔ)上所發(fā)生的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)則形成二次打擊，最終導(dǎo)致NAFLD的發(fā)生[1-4]。香煙以燃燒過程中生成的尼古丁、3，4-苯并芘、一氧化碳等干擾脂質(zhì)代謝，激發(fā)自由基及活性氧生成，促進脂質(zhì)過氧化而參與NAFLD的發(fā)生、發(fā)展[5]。抵抗素(resistin)是一種主要由白色脂肪細胞分泌的肽類，其作用是對抗胰島素的效應(yīng)，引起胰島素抵抗，并且具有潛在炎性因子活性，是促進NAFLD的進展的重要因素[6-7]。細胞色素P450酶(cytochromes P450, CYP450)是一類參與內(nèi)源性和外源性化合物代謝的酶, 其1A1亞型(CYP1A1)是參與氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化過程中的關(guān)鍵酶，對 NAFLD的發(fā)生及發(fā)展起著重要作用[8]。抵抗素、CYP1A1基因具有多態(tài)性，即具有多個等位基因，不同的等位基因編碼的抵抗素或谷胱甘肽過氧化物酶活性有差異。從理論上推斷抵抗素或CYP1A1基因的多態(tài)性可使機體對外界環(huán)境(如吸煙)的反應(yīng)能力有所不同，這是決定機體NAFLD易感性的一個重要因素。抵抗素、CYP1A1基因多態(tài)性與NAFLD易感性的研究日漸增多[9-10]，但尚未見吸煙與上述基因多態(tài)性的聯(lián)合作用對NAFLD易感性影響的報道。為了研究抵抗素和谷胱甘肽過氧化物酶在豫北地區(qū)當(dāng)?shù)厝巳褐械姆植紶顟B(tài)，進而探索其和吸煙習(xí)慣相互作用與NAFLD高發(fā)的關(guān)系,我們在國內(nèi)首次開展了抵抗素和CYP1A1聯(lián)合基因多態(tài)性與NAFLD易感性關(guān)系的研究。

材 料 和 方 法

1 研究對象及相關(guān)資料

2010年5月～2013年7月在我院門診和病房診治的NAFLD患者1 200例，NAFLD的診斷參照中華醫(yī)學(xué)會肝臟病學(xué)分會脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。對照組1 200例為健康體檢人群，排除2型糖尿病、肥胖、高血壓、高脂血癥及其它代謝性疾病，排除飲酒史。2組在年齡、性別、民族和籍貫無顯著差異，無血緣關(guān)系，吸煙狀況本文分為不吸煙者、吸煙者(將每天1～5支，持續(xù)3年以上或每天5支以上持續(xù)1年以上定義為吸煙者)。每人各抽取靜脈血2～3 mL，置乙二胺四乙酸鈉抗凝管, 分離白細胞層。用QIAampDNA提取試劑盒(QIAgen)提取白細胞DNA，DNA置-30℃低溫冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2 基因測定

2.1 抵抗素基因啟動子-420C/G多態(tài)性分析[12]上游引物序列為5’-GTTTGCATCAGCCACCCT-3’，下游引物序列為5’-GCACCGCAGCTCTTTCTT -3’ (由上海生工生物技術(shù)有限公司合成)，PCR反應(yīng)體系包括基因組DNA 1 μL,上、下游引物各0.5 μL，Taq DNA聚合酶Mix液(TaKaRa)25 μL。反應(yīng)條件為94 ℃ 5 min；94℃ 45 s， 55 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，40個循環(huán)；最后72 ℃ 7 min。PCR產(chǎn)物長度為286 bp，經(jīng)Bio-Rad染色瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)擴增結(jié)果后，以限制性內(nèi)切酶EarⅠ酶切，37 ℃孵育4 h，取酶切產(chǎn)物4 μL經(jīng)Bio-Rad染色瓊脂糖凝膠電泳后，酶切產(chǎn)物放入紫外線凝膠成像儀觀測，可見3種帶型: CC純合子為179 bp和107 bp的2條區(qū)帶，GG純合子為286 bp的1條區(qū)帶，CG雜合子為286 bp、179 bp和107 bp的3條區(qū)帶，見圖1。

Figure 1.The PCR product electrophoretogram of resistin gene promoter -420C/G. M: marker; Lane 1, 2: G/G; Lane 3, 4: C/G; Lane 5, 6: C/C.

2.2 CYP1A1-MspI多態(tài)性分析[13]引物序列為5’-CAGTGAAGAGGTGTAGCCGCT-3’和5’-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-3’(由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成)。PCR反應(yīng)體系總量25 μL,包括10×緩沖液2.5 μL、1 mmol/L dNTP 2.5 μL、引物各15 pmol、TaqDNA聚合酶2.5 U、模板DNA 2 μL(Promega)。擴增參數(shù)為94 ℃ 4 min；94 ℃40 s，55 ℃ 40 s，72 ℃ 50 s，循環(huán)35次；72 ℃ 7 min。取PCR擴增產(chǎn)物5 μL于1.5%瓊脂糖凝膠中，100 V電泳1 h，溴化乙錠(ethydium bromide，EB)染色30 min，紫外分析儀觀察PCR擴增結(jié)果。電泳板瓊脂糖由大連寶生物工程有限公司生產(chǎn)。取PCR產(chǎn)物10 μL,加入MspI內(nèi)切酶(TaRaKa)，酶切反應(yīng)體系總量30 μL,包括PCR產(chǎn)物10 μL、10×反應(yīng)緩沖液2 μL、MspI內(nèi)切酶10 U，37 ℃ 3 h。酶切后產(chǎn)物點樣于1.5%瓊脂糖凝膠中，100 V電泳1 h，EB染色30 min，分析結(jié)果。酶切后分為3種基因型：野生型(m1/m1)為340 bp單一條帶，雜合型(m1/m2)為340、200、140 bp 3條區(qū)帶，突變純合型(m2/m2)為200、140 bp 2條區(qū)帶,見圖2。

Figure 2.The PCR product electrophoretogram of CYP1A1 gene digested with Msp I restriction enzyme. M: marker; Lane 1, 2: m1/m2; Lane 3, 4: m2/m2; Lane 5, 6: m1/m1.

3 統(tǒng)計學(xué)處理

Hardy-Weinberg平衡檢驗研究樣本的群體代表性 ，以P>0.05為符合 Hardy-Weinberg規(guī)律。用比值比(OR)值和95%可信區(qū)間 (95% CI)評價相對風(fēng)險，病例組和對照組之間的基因型頻率和等位基因頻率采用2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。條件Logistic回歸模型分析交互作用；根據(jù)Khoury等[14]提出的交互作用模型和交互系數(shù)(γ=βeg/βe)判斷基因-環(huán)境交互作用模型以及交互作用類型。判定依據(jù)1： γ>1，表示基因?qū)Νh(huán)境暴露的效應(yīng)有放大作用，正向交互作用；γ<1，表示基因?qū)Νh(huán)境暴露的效應(yīng)有減弱作用，負向交互作用； γ=1，表示基因?qū)Νh(huán)境暴露沒有交互作用。在病例對照研究中，γ 為兩變量lgOR的比值。判定依據(jù)2：OReg=ORe×ORg為相乘模型；OReg>ORe×ORg為超相乘模型；OReg

結(jié) 果

1 NAFLD組和對照組的一般資料分析

如表1所示，NAFLD組和對照組性別、年齡分布無顯著差異；NAFLD組吸煙率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 NAFLD組和對照組的一般資料

**P<0.01vscontrol group.

2 抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1-MspI基因型、等位基因頻率及相關(guān)遺傳模型關(guān)聯(lián)分析

經(jīng)Hardy-Weinberg 平衡檢驗，-420C/G各基因型在對照組中的分布均符合Hardy-Weinberg 規(guī)律(P>0.05)，說明研究群體具有代表性(表2)。CC+CG、 GG基因型頻率在病例組和對照組有顯著差異(P<0.01)；等位基因G在NAFLD組和對照組之間的分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且OR值大于1，說明含等位基因G的個體發(fā)生NAFLD 的風(fēng)險相對較高；采用顯性和隱性2種遺傳模型進行分析發(fā)現(xiàn)在隱性模型中，兩位點的不同基因型在病例、對照組之間的分布差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明GG純合型個體具有NAFLD 易感性。結(jié)果表明：-420C/G(C→G突變)可能增加NAFLD的患病風(fēng)險(表2)。CYP1A1-MspI 3種基因型、等位基因頻率及相關(guān)遺傳模型關(guān)聯(lián)亦符合上述規(guī)律(表3)。

3 抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1-MspI基因多態(tài)性NAFLD發(fā)病中的交互作用

-420C/G (GG)/ CYP1A1-MspI(m2/m2)在NAFLD組占39.83%，而對照組僅占12.83%，-420C/G (GG)和CYP1A1-MspI(m2/m2) 在NAFLD發(fā)病中存在正向交互作用，交互系數(shù)γ1=β1*2/β2=3.3250和γ2=β1*2/β1=3.3385均大于1，OR1*2>OR1×OR2為超相乘模型(表4)。

表2 抵抗素基因啟動子-420C/G基因型與等位基因分布及其遺傳模型分析

aAdjusted according to age, gender and smoking status.

表3 CYP1A1- MspI基因型與等位基因分布及其遺傳模型分析

aAdjusted according to age, gender and smoking status.

表4 抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1- MspI多態(tài)性在NAFLD發(fā)病中的交互作用

aAdjusted according to age, gender and smoking status;bOR value by simple CYP1A1- MspI homozygous mutants exposure (OR1);cOR value by simple -420C/G homozygous mutants exposure (OR2);dOR value by 2 interacting genes in homozygous mutant (OR1*2).

4 抵抗素基因啟動子-420C/G、CYP1A1-MspI多態(tài)性與吸煙在NAFLD發(fā)病中的交互作用

攜帶-420C/G (CC+CG) 基因吸煙者ORe為1.4225(95% CI：0.9965～2.4670)，單獨攜帶-420C/G (GG)型的ORg為1.3195(95% CI：0.9327～2.6453)，兩者同時存在時，交互作用OReg為5.5270(95% CI：3.3347～7.6040)，交互系數(shù)γ=βeg/βe=3.9190>1，OReg>ORe×ORg為超相乘模型(表5)。攜帶CYP1A1-MspI (m2/m2)者同時吸煙交互作用OReg為5.5191(95% CI：3.6901～7.1052)，交互系數(shù)γ=βeg/βe=3.9284>1，OReg>ORe×ORg為超相乘模型(表6)。

表5 抵抗素基因啟動子-420C/G多態(tài)性和吸煙在NAFLD發(fā)病中的交互作用

aAdjusted according to age and gender;bOR value by simple smoking exposure (ORe);cOR value by simple homozygous mutant type exposure (ORg);dOR value by the interaction of smoking and homozygous mutant (OReg).

表6 CYP1A1-MspI多態(tài)性和吸煙在NAFLD發(fā)病中的交互作用

aAdjusted according to age and gender;bOR value by simple smoking exposure (ORe);cOR value by simple homozygous mutant type exposure (ORg);dOR value by the interaction of smoking and homozygous mutant (OReg).

討 論

抵抗素是一種由脂肪細胞特異分泌的多肽類激素。與代謝密切相關(guān)，可減弱脂肪細胞、骨骼肌細胞以及肝細胞對胰島素的敏感性，是導(dǎo)致肝臟胰島素抵抗、促進肝臟脂肪沉積的的一種重要細胞因子[15-17]。抵抗素γ的表達受基因的控制和環(huán)境因素的誘導(dǎo)，其表達和誘導(dǎo)表達水平均有顯著個體差異。人抵抗素基因定位于19p13.2，內(nèi)含子邊界序列均高度保守，其mRNA含476 個堿基對，其編碼區(qū)含有326個堿基對，編碼108個氨基酸。人的抵抗素基因存在多種單核苷酸多態(tài)性現(xiàn)象，如-420C/G、+299 G/A和-638G/A等。其中-420C/G 被認(rèn)為是影響抵抗素基因表達的主要多態(tài)性位點，可影響啟動子的活性，增加血液和組織中抵抗素的表達，從而影響其生物學(xué)效應(yīng)。抵抗素基因-420C/G多態(tài)性具有3種基因型: -420C/G(CC)、-420C/G(CG)和-420C/G(GG)，國內(nèi)外已有研究報道認(rèn)為-420C/G位點的多態(tài)性與代謝綜合征有關(guān)[18-19]。本研究發(fā)現(xiàn)-420C/G(GG)基因型者發(fā)生NAFLD的風(fēng)險顯著增加，其OR等于3.1351， 95% CI為1.9255～5.3184。與上述研究結(jié)果一致。-420C/G(GG)基因型者易患NAFLD的機理還不清楚，相關(guān)研究顯示G等位基因可能通過活化抵抗素基因轉(zhuǎn)錄過程，增加抵抗素表達，降低胰島素敏感性[20]，從而最終引起肝臟內(nèi)脂質(zhì)沉積，增加NAFLD發(fā)生的危險性。

在非酒精性脂肪肝的兩次打擊學(xué)說中, CYP1A1介導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化發(fā)揮重要的作用, 其作用機制與肝細胞內(nèi)微粒體氧類物質(zhì)和自由基的生成有關(guān)。肝細胞內(nèi)蓄積游離脂肪酸可誘導(dǎo)CYP1A1 活性增加，促進微粒體氧應(yīng)激，隨著CYP1A1 表達的增強，抗氧化劑(如SOD、GSH、維生素E)的含量均顯著下降。由于脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的增強而抗氧化能力下降，導(dǎo)致自由基的生成增多。自由基氧化細胞膜的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)最終導(dǎo)致肝細胞結(jié)構(gòu)與功能的損害可造成肝毒性和線粒體的損傷，同時由CYP1A1 產(chǎn)生的活性氧通過擴散作用，激活肝星狀細胞形成肝纖維化[21]。CYP1A1基因定位于人類染色體15q 22224，包含7個外顯子和6個內(nèi)含子。CYP1A1的表達受基因的控制和環(huán)境因素的誘導(dǎo)，其本底表達和誘導(dǎo)表達水平均有顯著個體差異。其3′端非翻譯區(qū)的T6235C置換產(chǎn)生1個MspⅠ酶切位點即MspI多態(tài)性，突變基因的存在可能是通過與該基因調(diào)節(jié)區(qū)其它多態(tài)性的連鎖而影響CYP1A1的誘導(dǎo)性。CYP1A1不僅因介導(dǎo)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)在NAFLD進展中發(fā)揮重要作用，而且同時是參與藥物、毒物、前致癌物代謝主要Ⅰ相代謝酶，大多數(shù)環(huán)境致癌物在體內(nèi)都需要CYP1A1代謝激活后才有致癌性， 所以在理論上因CYP1A1基因變異導(dǎo)致CYP1A1轉(zhuǎn)錄或活性增強皆有可能增加惡性腫瘤和NAFLD的易感性。國內(nèi)外已有研究報道認(rèn)為MspI位點的多態(tài)性與膽囊癌、肺癌等腫瘤的易感性有關(guān)[22-23]。MspI多態(tài)性具有3種基因型: 野生型(m1/m1)、雜合型(m1/m2)、突變純合型(m2/m2)，本研究發(fā)現(xiàn)CYP1A1(m2/m2)基因型者發(fā)生NAFLD的風(fēng)險顯著增加，與上述研究結(jié)果一致。CYP1A1(m2/m2)基因型者易患癌或NAFLD的機理還不清楚，相關(guān)研究證明m2基因型的酶活性高于m1基因型[24]。因此，m2/m2純合子易患癌或NAFLD的原因可能是此種基因型者體內(nèi)CYP1A1活性高，可發(fā)揮更大的促脂質(zhì)過氧化或促致癌物形成作用。

本次研究應(yīng)用Khoury等[14]交互作用模型理論，探詢抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1-MspI多態(tài)性與吸煙的交互作用，及其對NAFLD發(fā)生的意義。本研究發(fā)現(xiàn)-420C/G與CYP1A1-MspI突變型的交互作用增加了NAFLD的發(fā)病風(fēng)險。-420C/G (GG) 和CYP1A1-MspI (m2/m2)基因型對NAFLD的發(fā)生風(fēng)險有相互放大效應(yīng)；通過對吸煙狀況的分析發(fā)現(xiàn)，吸煙者患NAFLD的風(fēng)險明顯高于不吸煙者；吸煙與-420C/G(GG)和CYP1A1-MspI (m2/m2)基因型的交互作用OR值分別為5.5270、5.5191，γ值分別為3.9190、3.9284，均明顯大于1，提示-420C/G(GG)和CYP1A1-MspI(m2/m2)基因型與吸煙暴露在NAFLD發(fā)生中均有正向交互作用，攜帶-420C/G(GG)或和CYP1A1-MspI (m2/m2)基因型者吸煙的危害效應(yīng)更大；兩基因型與吸煙暴露交互作用OReg均大于ORe×ORg，顯示上述兩純合突變基因與吸煙交互作用機制在NAFLD發(fā)生中可能為超相乘模型。長期吸煙可使細胞內(nèi)葡萄糖代謝的氧化與非氧化通路顯著減弱，脂肪組織氧化增多，血漿游離脂肪酸水平升高，而游離脂肪酸又可被肝臟和脂肪組織攝取而合成甘油三酯，從而發(fā)生中心脂肪堆積形成腹型肥胖，導(dǎo)致胰島素抵抗的發(fā)生。煙草中的尼古丁還會引起交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮，導(dǎo)致兒茶酚胺和其它升糖激素釋放增多，而兒茶酚胺是胰島素作用的強效拮抗劑，它通過損傷胰島素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和內(nèi)在活性，使葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白合成減少，從而使胰島素作用減弱，為NAFLD發(fā)病過程中的第一次打擊創(chuàng)造了條件[25-26]。通常情況下生物體內(nèi)的活細胞均可產(chǎn)生氧自由基，因存在著包括GPx-1在內(nèi)的自由基清除系統(tǒng)，可及時清除體內(nèi)過剩的自由基，維持自由基的動態(tài)平衡，香煙含多種化合物，多環(huán)類的苯并芘能接受電子而形成自由基，另香煙煙氣中有一氧化碳、二氧化碳、一氧化氮、烷基和烷氧基等多種有害自由基。長期吸煙的人，過量氧自由基通過血液進入肝細胞，促使肝細胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化及啟動新的自由基反應(yīng)，最終導(dǎo)致脂肪肝。這可能是吸煙可單獨增加及與抵抗素基因啟動子-420C/G (GG)、CYP1A1-MspI (m2/m2)協(xié)同增加NAFLD發(fā)生風(fēng)險性的重要原因。

NAFLD是涉及環(huán)境因子和多種基因相互作用的復(fù)雜過程，本研究提示攜帶抵抗素基因啟動子-420C/G和CYP1A1-MspI (m2/m2)突變基因型的個體屬NAFLD高危險人群, NAFLD防治方案中應(yīng)加以重視，雖然尚不能通過改變其NAFLD易感的基因型來防治NAFLD，但可以根據(jù)其與環(huán)境病因相互作用的特點，采取相應(yīng)的控制環(huán)境病因的措施如戒煙或基因調(diào)控以達到有效預(yù)防NAFLD的目的。

[1] do Nascimento JH, Epifanio M, Soder RB, et al. MRI-diagnosed nonalcoholic fatty liver disease is correlated to insulin resistance in adolescents[J]. Acad Radiol, 2013, 20(11):1436-1442.

[2] Nomura K, Yamanouchi T. The role of fructose-enriched diets in mechanisms of nonalcoholic fatty liver disease[J]. J Nutr Biochem, 2012, 23(3):203-208.

[3] 戴 寧，鄒 原，王慧芳，等. 紅景天苷對非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝組織氧化應(yīng)激的抑制作用[J]. 中國病理生理雜志, 2013, 29(9):1704-1708.

[4] 林妙霞，李澤楷，羅敏琪，等. 非酒精性脂肪性肝病與代謝綜合征的關(guān)系研究[J]. 中國病理生理雜志, 2010, 26(12):2465-2466.

[5] Liu Y, Dai M, Bi Y, et al. Active smoking, passive smoking, and risk of nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD): a population-based study in China[J]. J Epidemiol, 2013, 23(2):115-121.

[6] Boyraz M, Cekmez F, Karaoglu A, et al. Serum adiponectin, leptin, resistin and RBP4 levels in obese and metabolic syndrome children with nonalcoholic fatty liver disease[J]. Biomark Med, 2013, 7(5):737-745.

[7] 李 焱，何 娟，李芳萍，等. 抵抗素在肝臟胰島素抵抗中的作用及其機制[J]. 中國病理生理雜志, 2009, 25(4):688-692.

[8] 馮雯琪, 劉群英, 曾志華,等. 電針對非酒精性脂肪肝大鼠肝細胞色素P4501A1和脂質(zhì)過氧化的影響[J]. 針刺研究, 2009, 34(2):89-92.

[9] Zhang LY, Jin YJ, Jin QS,et al. Association between resistin +299A/A genotype and nonalcoholic fatty liver disease in Chinese patients with type 2 diabetes mellitus[J]. Gene, 2013, 529(2):340-344.

[10]Jiang W, Wang L, Kondraganti SR, et al. Disruption of the gene for CYP1A2,which is expressed primarily in liver, leads to differential regulation of hepaticand pulmonary mouse CYP1A1 expression and augmented human CYP1A1 transcriptional activation in response to 3-methylcholanthreneinvivo[J]. J Pharmacol Exp Ther, 2010, 335(2):369-379.

[11]葛均波，徐永健，梅長林，等. 內(nèi)科學(xué)[M]. 第8版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2013:408-409.

[12]Hossein-Nezhad A, Varzaneh FN, Mirzaei K, et al. A polymorphism in the resistin gene promoter and the risk of multiple sclerosis[J]. Minerva Med, 2013, 104(4):431-438.

[13]Tan C, Xu HY, Zhang CY, et al. Effect of CYP1A1 MSPI polymorphism on the relationship between TP53 mutation and CDKN2A hypermethylation in non-small cell lung cancer[J]. Arch Med Res, 2011, 42(8):669-676.

[14]Khoury MJ, Wagener DK. Epidemiological evaluation of the use of genetics to improve the predictive value of disease risk factors[J]. Am J Hum Genet, 1995, 56(4):835-844.

[15]Lebensztejn DM, Wojtkowska M, Skiba E, et al. Serum concentration of adiponectin, leptin and resistin in obese children with non-alcoholic fatty liver disease [J]. Adv Med Sci, 2009, 54(2):177-182.

[16]李 焱，何 娟，李芳萍，等. 重組腺病毒介導(dǎo)的高抵抗素血癥對小鼠糖代謝的影響[J]. 中國病理生理雜志, 2009, 25(5):944-948.

[17]牟 嬌，賈德福，何作云，等. 羅格列酮對2型糖尿病大鼠血漿resistin的影響及對腎小球硬化的干預(yù)研究[J]. 中國病理生理雜志, 2009, 25(8):1635-1639.

[18]Boumaiza I, Omezzine A, Rejeb J, et al. Association between four resistin polymorphisms, obesity, and metabolic syndrome parameters in Tunisian volunteers [J]. Genet Test Mol Biomarkers, 2012, 16(12):1356-1362.

[19]Bik W, Ostrowski J, Baranowska-Bik A, et al. Adipokines and genetic factors in overweight or obese but metabolically healthy Polish women[J]. Neuro Endocrinol Lett, 2010, 31(4):497-506.

[20]Norata GD, Ongari M, Garlaschelli K, et al. Effect of the -420C/G variant of the resistin gene promoter on metabolic syndrome, obesity, myocardial infarction and kidney dysfunction[J]. J Intern Med, 2007, 262(1):104-112.

[21]譚 麗, 管小琴. 維生素E、硒對非酒精性脂肪肝大鼠肝細胞色素P4501A1及脂質(zhì)過氧化的干預(yù)作用[J]. 世界華人消化雜志, 2007, 15(28):2977-2982.

[22]Sharma KL, Agarwal A, Misra S, et al. Association of genetic variants of xenobiotic and estrogen metabolism pathway (CYP1A1 and CYP1B1) with gallbladder cancer susceptibility[J]. Tumour Biol, 2014, 35(6):5431-5439.

[23]Li W, Song LQ, Tan J. Combined effects of CYP1A1 MspI and GSTM1 genetic polymorphisms on risk of lung cancer: an updated meta-analysis[J]. Tumour Biol, 2014, 35(9):9281-9290.

[24]Sergentanis TN, Economopoulos KP, Choussein S, et al. Cytochrome P450 1A1 (CYP1A1) gene polymorphisms and cervical cancer risk: a meta-analysis[J]. Mol Biol Rep, 2012, 39(6):6647-6654.

[25]Jia WP. The impact of cigarette smoking on metabolic syndrome[J]. Biomed Environ Sci, 2013, 26(12):947-952.

[26]Yalcinkaya E, Celik M, Gursoy E. Determining the combined effects of smoking and obesity on insulin resistance and inflammation[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2014,18(5):760.

Interaction of polymorphisms in resistin gene promoter -420C/G, cytochromes P4501A1 gene MspI and cigarette smoking on nonalcoholic fatty liver disease

ZHANG Chao-xian1, GUO Li-ke2

(1DepartmentofGastroenterology,2DepatmentofStomatology,TheFirstAffiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Weihui453100,China.E-mail:nn21882001@aliyun.com)

AIM: To investigate the interaction of polymorphisms of resistin gene promoter -420C/G, cytochromes P4501A1-MspI and cigarette smoking in nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). METHODS: The genetic polymorphisms in resistin gene promoter -420C/G and CYP1A1-MspI were analyzed by the technique of polymerase chain reaction (PCR) in peripheral blood leukocytes of 900 NAFLD cases and 900 healthy persons. RESULTS: The frequencies of -420C/G (GG) and CYP1A1-MspI (m2/m2) were 49.75% and 50.08% in NAFLD cases and 24.00% and 24.25% in healthy controls, respectively. Statistical tests showed a significant difference in the frequencies between the 2 groups (P<0.01). The risk of NAFLD with -420C/G (GG) was significantly higher than that of controls. Individuals who carried with CYP1A1-MspI (m2/m2) had a high risk of NAFLD. Combined analysis of the polymorphisms showed that the percentages of -420C/G (GG)/CYP1A1-MspI (m2/m2) in NAFLD and control groups were 39.83% and 12.83%, respectively (P<0.01). The people who carried with -420C/G (GG)/CYP1A1-MspI(m2/m2) had a high risk in NAFLD group. The cigarette smoking rate in NAFLD group was signi-ficantly higher than that in control group (P<0.01), and the statistic analysis suggested an interaction between cigarette smoking and -420C/G (GG) and CYP1A1-MspI (m2/m2), which increased the risk of NAFLD.CONCLUSION: -420C/G (GG), CYP1A1-MspI (m2/m2) and cigarette smoking are the risk factors in NAFLD. The interactions between genetic polymorphisms in -420C/G, CYP1A1- MspI (m2/m2) and cigarette smoking increase the risk of NAFLD.

Nonalcoholic fatty liver disease; Resistin gene promoter -420C/G; Cytochromes P4501A1-MspI; Genetic polymorphism; Cigarette smoking

1000- 4718(2015)03- 0485- 07

2014- 09- 30

2014- 12- 05

R363; R575

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.03.018

△通訊作者 Tel: 0373-4402216； E-mail： nn21882001@aliyun.com