陶興魁 陳 峰 趙志祥 張曼曼 操 莉

（宿州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，安徽 宿州 234000）

0 引言

藍(lán)莓（Blueberry）又名越橘、藍(lán)漿果，屬杜鵑科（Ericaceae）越橘屬（Vaccinium）。藍(lán)莓果實風(fēng)味獨(dú)特，營養(yǎng)豐富，含有豐富的維生素、礦物質(zhì)和抗氧化物質(zhì)，特別是其中所含的花青素、兒茶酸，有防治高血壓、疏通毛細(xì)血管和緩解視力疲勞的作用，被譽(yù)為“漿果之王”，被國際糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品之一[1-2]。對于藍(lán)莓莖段誘導(dǎo)植株再生的研究比較多，并且獲得了豐厚的成果，技術(shù)比較成熟[3-5]，但以藍(lán)莓外植體誘導(dǎo)愈傷組織的研究幾乎沒有。韓婷婷等以WPM1/2為適宜培養(yǎng)基使矮叢藍(lán)莓Blomidon品種的試管苗葉片誘導(dǎo)愈傷率高達(dá)100%[6]。因此，本實驗以藍(lán)莓幼莖作為外植體，研究不同植物激素誘導(dǎo)藍(lán)莓愈傷組織的情況，為藍(lán)莓組培快繁提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

以高叢藍(lán)莓瑞卡幼莖作為外植體，以改良WPM培養(yǎng)基為培養(yǎng)基，設(shè)定蔗糖濃度為 30g/L，瓊脂 8g/L，PH 為 5.5，在宿州學(xué)院東區(qū)組培室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 材料處理

剪下藍(lán)莓幼莖后流水沖洗2h，之后在無菌操作臺上進(jìn)行消毒和滅菌。用70%酒精消毒30s，無菌水沖洗3次，0.05%氯化汞滅菌6～8min，無菌水沖洗8次，然后將幼莖用無菌濾紙吸干水分，備用。

1.2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)

將幼莖的兩端分別減去一小部分，橫放于含有不同濃度激素組合的改良WPM培養(yǎng)基中，每瓶接種5～6個莖段，分別添加TDZ，ZT，6-BA，2,4-D 各 0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L 五個濃度梯度做單因素五水平實驗，每種濃度接種10瓶，45d后統(tǒng)計出愈率和愈傷組織長勢，旨在選出幼莖誘導(dǎo)愈傷組織最適宜的植物激素，并探討每種植物激素對愈傷組織誘導(dǎo)的影響。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的TDZ對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

表1 不同濃度的TDZ對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

統(tǒng)計結(jié)果表明，TDZ對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的效果不好，愈傷率很低，而且基本全部褐化。

2.2 不同濃度的ZT對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

表2 不同濃度的ZT對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

實驗結(jié)果表明，ZT對藍(lán)莓莖段誘導(dǎo)愈傷組織效果不好，當(dāng)濃度大于1.0 mg/L時開始出芽，當(dāng)濃度大于1.5 mg/L時愈傷組織褐化現(xiàn)象嚴(yán)重。

2.3 不同濃度的2,4-D對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

表3 不同濃度的2,4-D對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

實驗結(jié)果表明，當(dāng)2,4-D濃度為0.5～1.0 mg/L時誘導(dǎo)處的愈傷組織均為綠色、疏松顆粒狀愈傷組織，當(dāng)濃度大于1.5時，隨著2,4-D濃度的增大愈傷率隨之提高，但褐化率也隨之增大。

2.4 不同濃度的6-BA對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

表4 不同濃度的6-BA對藍(lán)莓幼莖愈傷組織誘導(dǎo)的影響

統(tǒng)計結(jié)果表明，當(dāng)6-BA濃度為0.5 mg/L時，無愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生，當(dāng)6-BA濃度大于1.0mg/L時有愈傷組織產(chǎn)生，但有芽誘導(dǎo)產(chǎn)生而且還有褐化現(xiàn)象。

從以上實驗得知：TDZ對藍(lán)莓幼莖誘導(dǎo)愈傷組織時褐化現(xiàn)象嚴(yán)重，并且濃度越大褐化越嚴(yán)重，當(dāng)其濃度在1.0mg/L以上時褐化率超過50%，同時愈傷率也不高；低濃度的ZT對藍(lán)莓幼莖誘導(dǎo)愈傷組織效果不好，高濃度時出現(xiàn)出芽和褐化現(xiàn)象；使用6-BA時對愈傷組織誘導(dǎo)作用最小，愈傷率很低，褐化率也較低。使用2,4-D時愈傷率最高，褐化率也較低，當(dāng)其濃度為1.0mg/L時誘導(dǎo)效果最好，誘導(dǎo)出的愈傷組織為淡黃色的疏松顆粒狀較大的愈傷組織。

［1］修英濤,常鳳英,姜河,等.我國藍(lán)莓(越橘)栽培研究現(xiàn)狀及發(fā)展措施[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2003(3):21-23.

［2］劉慶忠,趙紅軍,鄭亞芹,等.高灌藍(lán)莓微體繁殖技術(shù)研究初報[J].落葉果樹,2001(5):1-3.

［3］王連潤,馬鈞,胡忠榮,李坤明.藍(lán)莓離體快速繁殖研究[J].紅河學(xué)院學(xué)報,2009(10):17-18.

［4］周歷萍,王淑珍,來文國.藍(lán)莓組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J].杭州農(nóng)業(yè)與科技,2011(3):30-31.

［5］王淑珍,來文國.南高叢藍(lán)莓組培再生技術(shù)研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2011,(21):119-120.

［6］韓婷婷,孫周平.矮叢藍(lán)莓葉片的愈傷組織誘導(dǎo)及植株再生[J].西北植物學(xué)報,2010,30(3):0615-0620.