顏宇飛，張慶五

(上海市控江醫(yī)院檢驗科，上海200093)

EDTA-K2抗凝劑對外周血淋巴細(xì)胞形態(tài)的影響

顏宇飛，張慶五

(上海市控江醫(yī)院檢驗科，上海200093)

目的研究不同時間段乙二胺四乙酸二鉀(EDTA－K2)抗凝劑對外周血淋巴細(xì)胞形態(tài)的影響。方法根據(jù)年齡將患者分為2組:兒童組55例和成人組70例。將所有受試者外周血在沒有抗凝的情況下推血片2張，然后置于含EDTA－K2的血常規(guī)管中，分別于5、15、30、60、120 min各推片2張，以瑞姬染色，用光學(xué)顯微鏡對淋巴細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行觀察。結(jié)果兒童組在1 h和2 h后異型淋巴細(xì)胞比例明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，成人組在2 h后異型淋巴細(xì)胞比例增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論經(jīng)EDTA－K2抗凝的血液標(biāo)本應(yīng)盡快完成淋巴細(xì)胞的檢測。

EDTA－K2抗凝劑;異型淋巴細(xì)胞;瑞姬染色;光學(xué)顯微鏡

乙二胺四乙酸(EDTA)鹽均可與鈣離子形成螯合物，從而阻止血液凝固。國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)建議血細(xì)胞計數(shù)用EDTA－K2作為抗凝劑。在日常住院患者血常規(guī)檢測中，會遇見自動血液分析儀對淋巴細(xì)胞報警(Atypical Lymph?或Abn Lymph/L－Blasts?)，提示有異型淋巴細(xì)胞或原始淋巴細(xì)胞出現(xiàn)，這種現(xiàn)象在兒科患者中尤為明顯。為此我們做了相關(guān)分析，以進(jìn)一步探討EDTAK2抗凝劑對外周血淋巴細(xì)胞形態(tài)的影響。

材料和方法

一、對象

隨機選取2013年10月至2014年2月上?？亟t(yī)院門診血常規(guī)患者125例，其中55例兒童(0～6歲)，70例成人(18～65歲)。

二、儀器和試劑

1.儀器日本OLYMPUS－CX21型雙目光學(xué)顯微鏡。

2.試劑和耗材威海鴻宇醫(yī)療器械有限公司的EDTA－K2抗凝管，批號13090191。珠海貝索生物技術(shù)公司的瑞姬染液，批號409081。珠海貝索生物技術(shù)公司的高級鏡油，批號HX950972。JIANG FAN公司的載玻片和推玻片。

三、方法

將所有患者的外周血在沒有抗凝的情況下推片2張，然后置于含EDTA－K2的血常規(guī)管中，分別以5 min、15 min、30 min、1 h、2 h為檢測時間點，并將血標(biāo)本置于室溫中，待進(jìn)行下一時間點的檢測，檢測時再推片2張，進(jìn)行干燥、固定和染色。血片由2位從事血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗的主管技師根據(jù)《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[1]和《白細(xì)胞分類計數(shù)參考方法》[2]中規(guī)定方法操作，先用低倍鏡觀察，再用油鏡作白細(xì)胞分類計數(shù)，分類200個白細(xì)胞，特別注意淋巴細(xì)胞形態(tài)變化。將分類中異型淋巴細(xì)胞結(jié)果取均值。

四、統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗，結(jié)果呈正態(tài)分布，因此數(shù)據(jù)以x－±s表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

兒童組經(jīng)EDTA－K2抗凝1 h、2 h后外周血異型淋巴細(xì)胞比例與未抗凝外周血異型淋巴細(xì)胞差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);成人組經(jīng)EDTA－K2抗凝2 h后外周血異型淋巴細(xì)胞比例與未抗凝外周血異型淋巴細(xì)胞差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。常見外周血異型淋巴細(xì)胞，兒童與成人都以Ⅱ型異型淋巴細(xì)胞為主，Ⅰ型與Ⅲ型較少見。見圖1。

表1 放置不同時間外周血異型淋巴細(xì)胞結(jié)果(±s，%)

組別無抗凝劑抗凝5 min抗凝15 min抗凝30 min抗凝1 h抗凝2 h兒童5.68±2.955.62±2.925.70±2.815.69±2.936.13±2.466.78±2.79成人4.34±2.464.35±2.484.33±2.504.37±2.394.35±2.705.83±2.68

討論

淋巴細(xì)胞在病毒、藥物等外源刺激下引起應(yīng)激反應(yīng)，發(fā)生一些變化，如原始細(xì)胞和幼稚化，細(xì)胞體積變大、核體積增大、胞質(zhì)變多且顏色加深、出現(xiàn)空泡、核不規(guī)則、染色質(zhì)疏松、偶見核仁或絲狀分裂等，此類細(xì)胞為異型淋巴細(xì)胞。正常人外周血中異型淋巴細(xì)胞為0～2%，＞5%有臨床意義，＞10%時有診斷意義。近年研究發(fā)現(xiàn)，異型淋巴細(xì)胞與多種病毒感染等有關(guān)，如EB病毒、巨細(xì)胞病毒、柯薩奇病毒、腺病毒、弓形體病、藥物過敏、自身免疫性疾病等，但是較少有報道異型淋巴細(xì)胞與EDTA－K2抗凝劑有關(guān)。

以往外周血白細(xì)胞分類都用未抗凝外周血直接推片染色分類，不存在抗凝劑對淋巴細(xì)胞影響。隨著全自動血細(xì)胞分析儀的普及，不同種類抗凝劑的應(yīng)用，使傳統(tǒng)的工作模式發(fā)生了改變。由于從病房護(hù)士采血送至檢驗科需要一段時間，送到檢驗科后由于標(biāo)本量大，從第一個血常規(guī)標(biāo)本檢測到最后一個血常規(guī)標(biāo)本檢測可能要長達(dá)1～3 h不等。李艷等[3]指出，EDTA－K2抗凝血異型淋巴細(xì)胞增高的原因可能有:(1)血液與玻璃管接觸活化;(2)抗凝劑刺激、活化和退化;(3)標(biāo)本放置時間過長，細(xì)胞退化、活化;(4)體內(nèi)、外溫差、活化等因素使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。本次研究證明，兒童組外周血異型淋巴細(xì)胞在EDTA－K2抗凝1 h后明顯增高，個別患者在2 h后異型淋巴細(xì)胞比例接近10%。如將此數(shù)據(jù)給臨床，可誤診為“傳染性單核細(xì)胞增多癥”[4]，給治療產(chǎn)生明顯影響。在成人組中，異型淋巴細(xì)胞在EDTA－K2抗凝2 h后才有明顯增高，有接近10%的患者未發(fā)現(xiàn)，這可能是由于成人淋巴細(xì)胞相比兒童不易活化。眾所周知，異型淋巴細(xì)胞Downey分型可分為Ⅰ型(泡沫型/漿細(xì)胞樣)、Ⅱ型(不規(guī)則型/單核細(xì)胞樣)和Ⅲ型(未成熟型/幼稚型)[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，兒童與成人都以Ⅱ型異型淋巴細(xì)胞增高為主，Ⅰ型與Ⅲ型較少見，與楊秋連等[6]的研究結(jié)果一致。

綜上所述，EDTA－K2抗凝劑在1 h以后就會將部分正常淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)楫愋土馨图?xì)胞，兒童患者更為明顯，這會對臨床檢測結(jié)果產(chǎn)生明顯影響。解決方法有:(1)送來的血常規(guī)標(biāo)本應(yīng)盡快檢測，兒科的標(biāo)本盡量先行檢測;(2)全自動血液分析儀如有異型淋巴細(xì)胞報警，須推片后手工鏡檢;(3)在鏡檢時，如遇到異型淋巴細(xì)胞＞10%的情況，須采未經(jīng)抗凝的外周血推片后再復(fù)檢，以減少EDTA－K2抗凝劑對淋巴細(xì)胞形態(tài)的影響，保證分類結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:123－135.

[2]WS/T 246－2005.白細(xì)胞分類計數(shù)參考方法[S].

[3]李艷，叢玉隆，袁桂清.加強形態(tài)學(xué)臨床檢驗專家座談會紀(jì)要[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2005，28 (2):147－148.

[4]張之南，沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].3版.北京:北京科學(xué)出版社，2007:154.

[5]吳曉芝，閻佩珩，尚紅.血液病診斷與鑒別診斷圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2009:38－39.

[6]楊秋連，劉軍.EDTA－K2對外周血異型淋巴細(xì)胞計數(shù)的影響[J].臨床醫(yī)學(xué)與檢驗雜志，2011，8 (12):1463～1466.

1673－8640(2015)03－0287－02

R446.11

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.021

2014－03－21)

(本文編輯:范基農(nóng))

顏宇飛，男，1980年生，主管技師，主要從事臨床檢驗工作。