蔡逸婷，黃盛，謝松業(yè)

(上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200080)

上海地區(qū)體檢者中篩查M2型抗線粒體抗體的陽(yáng)性率分析

蔡逸婷，黃盛，謝松業(yè)

(上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海200080)

目的通過(guò)分析成年體檢者M(jìn)2型抗線粒體抗體(AMA－M2)的陽(yáng)性率情況，評(píng)價(jià)AMA－M2對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)早期篩查的價(jià)值。方法收集健康體檢人群血清樣本6 658例，其中男3 845例，女2 813例，男女比例為1.37∶1，年齡(46±13)歲。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)定量檢測(cè)AMA－M2，并與血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)和γ－谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT)檢測(cè)結(jié)果同時(shí)分析。結(jié)果在6 658名健康體檢者中AMA－M2陽(yáng)性97例(1.46%)，其中男性和女性分別為44例(1.14%)和53例(1.88%)，男女之比為1∶1.2;≥46歲的女性AMA－M2陽(yáng)性率高于＜46歲的女性(P＜0.01)，97例AMA－M2陽(yáng)性且無(wú)任何疾病包括PBC相關(guān)臨床癥狀者中有8例伴ALP升高，GGT也升高。結(jié)論對(duì)健康體檢者應(yīng)高度重視AMA－M2與ALP/GGT甚至ALT與AST的關(guān)聯(lián)分析，AMA－M2篩查是高危人群早期發(fā)現(xiàn)PBC的有效途徑，按照美國(guó)肝臟病學(xué)會(huì)(AASLD)PBC診療指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測(cè)AMA－M2陽(yáng)性體檢者的AMA－M2和肝臟血清酶水平有助于提高PBC的早診率。

M2型抗線粒體抗體;原發(fā)性膽汁性肝硬化;健康體檢;陽(yáng)性率;自身免疫性疾病

原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)是一種原因不明的由自身免疫介導(dǎo)的慢性進(jìn)展性、肝內(nèi)小膽管進(jìn)行性破壞伴門(mén)脈炎癥性改變和肝內(nèi)膽汁淤積的疾病，最終導(dǎo)致肝纖維化和肝硬化[1]。PBC早期癥狀輕微，臨床表現(xiàn)不典型，極易誤診為病毒性肝炎而使病情遷延發(fā)展，造成嚴(yán)重后果。M2型抗線粒體抗體(M2 anti－mitochondrial antibody，AMA－M2)是PBC高度特異的血清學(xué)指標(biāo)[2]。有研究報(bào)道，在PBC無(wú)相關(guān)臨床癥狀和生化指標(biāo)異常的隱匿期，可檢測(cè)到AMA－M2呈陽(yáng)性[3]。因此，監(jiān)測(cè)血清AMA－M2成為發(fā)現(xiàn)早期PBC的重要指標(biāo)。根據(jù)PBC的以上特點(diǎn)，本研究對(duì)健康體檢者的AMA－M2篩查結(jié)果和其它相關(guān)肝功能生化指標(biāo)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)匯總，旨在分析AMA－M2篩查對(duì)早期發(fā)現(xiàn)PBC的作用。

材料和方法

一、材料

1.樣本選擇隨機(jī)收集上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院體檢中心2012年2月至2013年2月體檢血清樣本6 658例，受檢者年齡(46.1±12.7)歲，其中男3 845例，女2 813例，以每10年為一個(gè)年齡分布區(qū)間分為7組。同時(shí)收集受檢者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、γ－谷氨?；D(zhuǎn)移酶(gamma glutamyltrasferase，GGT)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)等血清酶學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)。

2.PBC診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2009年美國(guó)肝臟病學(xué)會(huì)(American Association for the Study of Liver Disease，AASLD)推薦的PBC診斷指南:(1)存在膽汁淤積的生化學(xué)證據(jù)，主要是ALP升高;(2) AMA/AMA－M2陽(yáng)性;(3)組織學(xué)上存在非化膿性膽管炎以及小葉間膽管損傷的表現(xiàn)。當(dāng)滿(mǎn)足以上3項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)中的2項(xiàng)時(shí)即可診斷PBC，肝臟穿刺活檢不是必須的[4]。

3.試劑AMA－M2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme－linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒，其包被靶抗原為克隆表達(dá)AMA－M2的3個(gè)靶抗原側(cè)鏈，即二氧酸脫氫酶復(fù)合體E2 (branched－chain oxo acid dehydrogenase complex E2，BCOADC－E2)、丙酮酸脫氫酶復(fù)合體E2 (pyruvate dehydrogenase complex E2，PDC－E2)、2－氧戊二酸脫氫酶復(fù)合體E2(oxoglutarate dehydrogenase complex，OGDC－E2)及其連接形成的三聯(lián)體BPO－E2融合蛋白。該試劑盒由上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司提供。

二、方法

1.樣本采集真空采血管采集受檢者清晨空腹靜脈血，離心后分離血清，部分樣本用于即時(shí)檢測(cè)，部分樣本分裝、標(biāo)記并－20℃保存。

2.AMA－M2檢測(cè)使用ELISA，檢測(cè)時(shí)復(fù)溫凍存樣本。嚴(yán)格按照試劑和說(shuō)明書(shū)操作。反應(yīng)完畢在Thermo Multiskan MK3型酶標(biāo)儀(芬蘭Thermo－Fisher公司)上讀取主波長(zhǎng)450 nm和參考波長(zhǎng)630 nm處的吸光度(A)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，用四參數(shù)回歸計(jì)算出待測(cè)樣本濃度值，濃度值≥25 RU/mL為陽(yáng)性。

3.血清酶活性測(cè)定血清樣本2 h內(nèi)在RocheMP800型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Roche公司產(chǎn)品)并用配套試劑測(cè)定ALT、AST、GGT和ALP活性。參考范圍根據(jù)《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)設(shè)定，ALT 5～40 IU/L，AST 8～40 IU/L，GGT 7～50 IU/L，ALP 35～120 IU/L。

三、臨床分類(lèi)

根據(jù)ALT、AST、GGT和ALP正常與否，將AMA－M2陽(yáng)性的體檢人群分為“肝功能正常組”和“肝功能異常組”，即轉(zhuǎn)氨酶和ALP均正常者為肝功能正常組，轉(zhuǎn)氨酶和/或ALP升高者為肝功能異常組。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全部數(shù)據(jù)輸入SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，定性資料采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析，非正態(tài)定量資料以中位數(shù)(四分位數(shù))表示，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、AMA－M2陽(yáng)性率

在篩查的6 658例受檢者中AMA－M2陽(yáng)性97例，陽(yáng)性率為1.46%;其中男性44例，陽(yáng)性率為1.14%;女性53例，陽(yáng)性率為1.88%;男女之比為1∶1.2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.19，P＜0.05);≥46歲人群的AMA－M2陽(yáng)性率明顯高于46歲以下人群(χ2=3.91，P＜0.05)，見(jiàn)表1。男性≥46歲人群AMA－M2陽(yáng)性率與＜46歲人群比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0，P＞0.05);女性≥46歲人群AMA－M2陽(yáng)性率與＜46歲人群比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.41，P＜0.01)。

二、AMA－M2陽(yáng)性者的肝臟酶學(xué)相關(guān)變化指標(biāo)

97例AMA－M2陽(yáng)性的受檢者中ALP升高8例，見(jiàn)表2。這8例ALP升高者GGT均升高，其中4例ALT和AST均升高。這8例體檢者均無(wú)PBC相關(guān)臨床表現(xiàn)，也無(wú)其他疾病相關(guān)表現(xiàn)，影像學(xué)或病理學(xué)方面研究有待進(jìn)一步的補(bǔ)充。

三、AMA－M2濃度與肝臟酶的相關(guān)性

將97例AMA－M2陽(yáng)性者以150 RU/mL為界分為低濃度(AMA－A2＜150 RU/mL)和高濃度(AMA－A2≥150 RU/mL)兩組[5]，AMA－M2高濃度組ALT、AST、ALP和GGT的陽(yáng)性率均高于AMA－M2低濃度組(P＜0.01)。AMA－M2高濃度組和低濃度組GGT陽(yáng)性率明顯高于其它3項(xiàng)指標(biāo)(P＜0.01)。AMA－M2高濃度組各肝功能指標(biāo)平均濃度亦稍高于AMA－M2低濃度組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。見(jiàn)表3。

四、其它指標(biāo)

97例AMA－M2陽(yáng)性的受檢者未發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒檢測(cè)和其他免疫性檢測(cè)異常。

討論

PBC在世界各地均有分布，西方國(guó)家患病率較高，約為(1.9～40.2)/10萬(wàn)，年發(fā)病率約為(0.39～1.5)/10萬(wàn)，且隨著疾病重視度的提高和新型高特異性自身抗體(AMA－M2)的推廣使用，報(bào)道的PBC患病率呈逐年增加趨勢(shì)[6－8]。英國(guó)研究機(jī)構(gòu)報(bào)道PBC的患病率從1987年的23.0/10萬(wàn)提高到1994年的32.2/10萬(wàn)，女性發(fā)病率為94.0/10萬(wàn)[9];美國(guó)的發(fā)病率則由2.7/10萬(wàn)提高到40.2/10萬(wàn)，女性發(fā)病率為65.4/10萬(wàn)[6]。LIU等[10]對(duì)8 000余例中國(guó)南方體檢人群篩查發(fā)現(xiàn)，中國(guó)人群中PBC的總體患病率達(dá)49.2/10萬(wàn)，而40歲以上的女性患病率達(dá)155.8/10萬(wàn)，約是普通人群的3倍。

AMA－M2是PBC特異的早期診斷指標(biāo)，SHIBATA和MATTALIA等[11－12]分別用間接免疫熒光法和ELISA篩查了健康體檢員工的AMA和AMA－M2，結(jié)果二者的陽(yáng)性率分別為0.64%和0.5%，他們認(rèn)為健康體檢人群監(jiān)測(cè)AMA－M2有助于早期發(fā)現(xiàn)PBC。本研究97例AMA－M2陽(yáng)性者中女性有53例(1.88%)，男性有44例(1.14%)，男、女比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。本研究把46歲以下人群分為一組，主要是因?yàn)榻y(tǒng)計(jì)下來(lái)這一年齡段人群發(fā)病率無(wú)明顯差異，而46歲以上年齡每10年分為一組，可以看到尤其是女性的發(fā)病率呈增加的趨勢(shì)比較明顯。男性≥46歲人群AMA－M2陽(yáng)性率與＜46歲人群比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而女性≥46歲人群與＜46歲人群比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且共有36例46歲以上的女性AMA－M2陽(yáng)性，該人群的陽(yáng)性率達(dá)2.66%，約為全人群的2倍，符合中老年女性是PBC高危人群的現(xiàn)有流行病學(xué)特性。在LIU等[10]研究的8 000余名健康體檢人群中，AMA(間接免疫熒光法檢測(cè))篩查的陽(yáng)性率為0.43%，低于本研究。除與樣本量、檢測(cè)方法有關(guān)外，人群間的差異可能是陽(yáng)性率差異的主要原因，更大樣本量的調(diào)查、分析將有助于揭示AMA－M2在高危健康人群中檢測(cè)的本質(zhì)意義。

目前，PBC的診斷主要參照2009年AASLD推薦的PBC診斷指南[4]。在本研究中，共有8例受檢者ALP升高，且GGT均升高，其中4例ALT和AST均升高，但8例受檢者均主訴無(wú)PBC相關(guān)臨床癥狀，在后續(xù)的研究中，需結(jié)合影像學(xué)和/或病理學(xué)等檢查最終確診是否為PBC。

AMA－M2陽(yáng)性是診斷PBC的重要依據(jù)之一，但AMA－M2陽(yáng)性也可在慢性肝炎、藥物性肝損傷和其他自身免疫性疾病中出現(xiàn)，對(duì)于可指示PBC的AMA－M2滴度臨界值仍然存在爭(zhēng)議[13－15]。本研究顯示，AMA－M2高濃度(≥150 RU/mL)組中，ALT、AST、ALP和GGT的陽(yáng)性率均高于AMA－M2低濃度(＜150 RU/mL)組(P＜0.05)。值得注意的是GGT的陽(yáng)性率明顯高于其它3項(xiàng)指標(biāo)(P＜0.01)。一般認(rèn)為肝硬化時(shí)血清GGT的改變?nèi)Q于肝內(nèi)病變有無(wú)活動(dòng)及其病因。在非活動(dòng)期多屬正常，若伴有炎癥和進(jìn)行性纖維化則往往上升。原發(fā)性或繼發(fā)性膽汁性肝硬化則往往早期有GGT升高。通過(guò)本研究也顯示，雖然GGT并不是PBC的診斷指標(biāo)，但確與PBC密切相關(guān)，是肝臟受損的重要指標(biāo)。但并非無(wú)臨床表現(xiàn)或肝功能異常的AMA－M2低滴度陽(yáng)性者可排除PBC的診斷。METCALF等[3]對(duì)AMA－M2陽(yáng)性的健康體檢者進(jìn)行10余年的隨訪發(fā)現(xiàn)，有76%無(wú)癥狀的AMA－M2陽(yáng)性體檢者10年內(nèi)最終出現(xiàn)PBC的臨床表現(xiàn)，83%肝功能異常顯示存在持續(xù)性的膽汁淤積，且臨床分期均屬于第Ⅰ～Ⅲ期。因此，在健康體檢中心篩查AMA－M2是早期發(fā)現(xiàn)PBC的重要途徑。

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(本文編輯:姜敏)

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《檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)》編輯部

Analysis on the positive rate of M2 anti-mitochondrial antibodies in physical examine screening in Shanghai

CAI Yiting，HUANG Sheng，XIE Songye.(Department of Clinical Laboratory，Shanghai First People's Hospital，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200080，China)

ObjectiveTo investigate the early screening significance of M2 anti－mitochondrial antibodies(AMA－M2) for primary biliary cirrhosis(PBC)in physical examine，through analyzing the positive rate of AMA－M2.MethodsSerum samples were collected from 6 658 healthy subjects(3 845 males and2 813 females)，and the sex ratio was1.37∶1.Their age was46±13.AMA－M2 was quantitatively determined by enzyme－linked immunosorbent assay(ELISA).Serum alanine aminotransferase(ALT)，aspartate aminotransferase(AST)，alkaline phosphatase(ALP)and gamma glutamyltransferase (GGT)were determined，and the results were analyzed cemparatively.ResultsAMA－M2 were detected in 97 of 6 658 healthy subjects(1.46%)，including44 males(1.14%)and53 females(1.88%)，and the sex ratio was1∶1.2.AMAM2 positive rate of females above 46 years old was higher than those below 46 years old(P＜0.01).The 8 of 97 AMA－M2 positive cases without PBC clinical feature had increasing ALP and GGT.ConclusionsPhysical examination should pay attention to the correlation analysis of AMA－M2 with ALP/GGT and ALT with AST.AMA－M2 screening is an effective mean to high risk population in the early detection of PBC.According to American Association for the Study of Liver Disease (AASLD)PBC liver disease diagnostic criteria，positive AMA－M2 and serum liver enzyme help with improving the early detection rate of PBC.

M2 anti－mitochondrial antibody;Primary biliary cirrhosis;Physical examination;Positive rate; Autoimmunity disease

1673－8640(2015)03－0214－05

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.002

2014－06－19)

蔡逸婷，女，1968年生，學(xué)士，副主任技師，主要從事肝炎、腫瘤標(biāo)志物和病毒的實(shí)驗(yàn)室檢查及自身免疫性疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷工作。