路妍妍，金海燕，田 耕

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510260）

自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中CXCR4的表達(dá)及意義

路妍妍，金海燕，田 耕

（廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510260）

目的探討趨化因子受體4(CXCR4)在自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法收集人正常妊娠(對(duì)照組)和自然流產(chǎn)蛻膜組織(自然流產(chǎn)組)各20例，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)CXCR4的表達(dá)。結(jié)果自然流產(chǎn)組CXCR4的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論自然流產(chǎn)患者蛻膜組織CXCR4表達(dá)增高，可能通過募集NK細(xì)胞引起免疫排斥而導(dǎo)致流產(chǎn)。

自然流產(chǎn)；蛻膜；趨化因子受體4

自然流產(chǎn)(Spontaneous abortion，SA)是常見的妊娠并發(fā)癥，危害婦女的身心健康。人類的妊娠有賴于絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕子宮內(nèi)膜將胚胎植入宮腔內(nèi)，再侵入血管內(nèi)皮從而使血管重建，滿足胎盤的血流供應(yīng)。新近研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子受體4(Chemokine receptor 4，CXCR4)參與血管重建過程，而血管重建障礙會(huì)導(dǎo)致病理妊娠[1]。目前未見自然流產(chǎn)的蛻膜中CXCR4的研究報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化檢測(cè)蛻膜CXCR4的表達(dá)，探索自然流產(chǎn)發(fā)生機(jī)制，為今后自然流產(chǎn)的診治提供基礎(chǔ)性研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年6月至2011年6月在廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院門診診斷自然流產(chǎn)的患者20例納入自然流產(chǎn)組，并選同期在我院進(jìn)行正常人工流產(chǎn)的患者20例作為對(duì)照組。兩組患者年齡均在20～35歲，身體健康，月經(jīng)規(guī)律(月經(jīng)周期28～30 d)，通過婦檢排除陰道炎、宮頸糜爛和宮頸息肉等其他妊娠合并癥，3個(gè)月內(nèi)未服用藥物，未放置宮內(nèi)節(jié)育器。

1.2 取材 吸宮術(shù)后迅速取蛻膜組織1 cm×1 cm×1 cm，10%中性甲醛水溶液內(nèi)固定24 h后脫水、包埋，制成蠟塊。

1.3 試劑與方法 鼠抗人CXCR4單克隆抗體購自Invitrogen試劑公司，免疫組織化學(xué)試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。采用免疫組織化學(xué)SP法測(cè)定CXCR4在組織中的表達(dá)情況，方法參照試劑盒說明書。常規(guī)將切片脫蠟至水，室溫下3%H2O2作用和正常羊血清工作液封閉各10 min；滴加鼠抗CXCR4單克隆抗體(1：50)，4℃孵育過夜；二抗工作液(生物素化羊抗小鼠IgG)室溫10 min；鏈酶素抗生物素—過氧化物酶溶液作用室溫10 min；二氨基聯(lián)苯胺顯色；脫水、透明、封片。用已知陽性組織切片作陽性對(duì)照，陰性對(duì)照以磷酸鹽緩沖液(PBS)取代CXCR4抗體。

1.4 結(jié)果判定 免疫陽性染色以細(xì)胞內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為準(zhǔn)。應(yīng)用申洪等(2)提出的陽性單位(Positive unit，PU)概念定量表達(dá)免疫組化陽性反應(yīng)程度，使用Leica QW550圖像分析系統(tǒng)，在10×20倍鏡下每個(gè)樣本隨機(jī)選擇10個(gè)陽性視場(chǎng)作為測(cè)試點(diǎn)，測(cè)定蛻膜基質(zhì)細(xì)胞和背景區(qū)域的平均灰度，分別為的為Gα和GB，Gmax＝256，為檢測(cè)儀的最大灰度。按公式PU=[(Gα-GB)/Gmax]×100計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組蛻膜CXCR4的表達(dá)主要分布在蛻膜基質(zhì)細(xì)胞的胞漿和胞核內(nèi)(見圖1和圖2)。對(duì)照組CXCR4PU值為(2.30±0.55)，自然流產(chǎn)組為(5.37±0.87)，組間比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值=13.35，P=0.00＜0.01)。

圖1 SA組蛻膜CXCR4的表達(dá)(200×)

圖2 正常妊娠組蛻膜CXCR4的表達(dá)(200×)

3 討論

蛻膜淋巴細(xì)胞和基質(zhì)、滋養(yǎng)細(xì)胞均表達(dá)多種趨化因子及受體。趨化因子是一組相對(duì)分子質(zhì)量為8 000～12 000、至少存在2個(gè)保守的半胱氨酸的、含70～90個(gè)氨基酸的分泌型單鏈蛋白質(zhì)，能夠趨化細(xì)胞定向移動(dòng)，通過趨化因子受體介導(dǎo)其功能。CXCR4是一個(gè)高度保守的G蛋白偶聯(lián)受體，編碼352個(gè)氨基酸[3]。CXCLl2/CXCR4是一對(duì)獨(dú)特的趨化因子受體-配體，它們之間廣泛地表達(dá)于多種細(xì)胞和組織，包括免疫細(xì)胞、心臟、腦、肝等，在免疫、微循環(huán)及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中起著非常重要的作用，還參與新生血管形成、造血生成、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移等過程[4]。

有研究顯示早孕蛻膜NK細(xì)胞表面除CXCR3和CXCR4高表達(dá)外，其他趨化因子受體都呈低表達(dá)，可能趨化NK細(xì)胞在局部聚集調(diào)節(jié)母胎界面免疫平衡[5-6]。我們的研究發(fā)現(xiàn)蛻膜基質(zhì)細(xì)胞表達(dá)CXCR4，同Ren等[7]的研究一致。Ren等[7]發(fā)現(xiàn)CXCL12/ CXCR4信號(hào)通路參與調(diào)節(jié)人早孕期滋養(yǎng)細(xì)胞和蛻膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖與侵襲。侵蝕性滋養(yǎng)細(xì)胞可表達(dá)CXCR4且表達(dá)持續(xù)到取代蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞后。CXCR4通過調(diào)節(jié)VEGF參與血管重建過程，而血管重建障礙會(huì)導(dǎo)致病理妊娠。

自然流產(chǎn)的發(fā)生率約占全部妊娠的15%～20%，是產(chǎn)科常見病理性妊娠。自然流產(chǎn)病因復(fù)雜，目前仍約有40%原因不明。自然流產(chǎn)蛻膜中細(xì)胞因子表達(dá)增高。多種趨化因子在蛻膜中表達(dá)，起著趨化免疫活性細(xì)胞的作用。本實(shí)驗(yàn)觀察到自然流產(chǎn)組CXCR4表達(dá)增高。蛻膜中最重要的免疫細(xì)胞是CD56+CD16-NK細(xì)胞。NK細(xì)胞在蛻膜中以表達(dá)CXCR4等趨化因子受體為主。蛻膜表達(dá)趨化因子CXCR4可能招募NK細(xì)胞到母胎界面調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)[8]。有研究顯示NK抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入遷移，在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者中滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲力和遷移力低下[9]。自然流產(chǎn)中CXCR4表達(dá)增高，可能募集NK細(xì)胞，調(diào)節(jié)母胎界面的免疫排斥反應(yīng)，從而導(dǎo)致流產(chǎn)。

綜上所述，早孕蛻膜組織中表達(dá)CXCR4，調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕。自然流產(chǎn)中CXCR4表達(dá)增高，可能通過調(diào)控母一胎界面NK細(xì)胞的聚集，影響早孕期免疫微環(huán)境變化，抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入遷移，從而引起流產(chǎn)。

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Expression and significance of CXCR4 in decidua of patients with spontaneous abortion.

LU Yan-yan,JIN Hai-yan,TIAN Geng.
Department of Gynecology and Obstetrics,the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the expression of chemokine receptor 4(CXCR4)and its clinical significance in decidua of patients with spontaneous abortion.MethodsThe expression of CXCR4 protein in decidua tissue of 20 patients with spontaneous abortion(spontaneous abortion group)and 20 healthy pregnant women(control group)were detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of CXCR4 in spontaneous abortion group was significantly higher than that in the control group(P＜0.01).ConclusionThe increased expression of CXCR4 in decidua tissue of patients with spontaneous abortion may cause immune rejection by the recruitment of NK cells and lead to abortion.

Spontaneous abortion;Decidua;Chemokine receptor 4

R714.21

A

1003—6350（2015）13—1892—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0682

2014-11-28)

廣州醫(yī)學(xué)院校基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：2010C44)

路妍妍。E-mail：yanlup2006@163.com