陳 薇，童秀峰，黎安玲，胡漢寧

（1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430071；2.鄂州市梁子湖區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 鄂州 436060）

血FFA、Hcy和Cys-C測(cè)定在糖尿病腎病早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值

陳 薇1，童秀峰2，黎安玲1，胡漢寧1

（1.武漢大學(xué)中南醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 武漢 430071；2.鄂州市梁子湖區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 鄂州 436060）

目的 研究游離脂肪酸(FFA)、同型半胱氨酸(Hcy)、胱抑素C(Cys-C)等指標(biāo)血清水平與2型糖尿病(T2DM)各階段的關(guān)系以及應(yīng)用價(jià)值。方法選擇T2DM患者150例，根據(jù)24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)分為單純糖尿病組(SDM組)54例、早期糖尿病腎病期組(EDN組)56例和臨床糖尿病腎病期組(CDN組)40例，同時(shí)選擇同期進(jìn)行健康體檢確定為健康者42例作為對(duì)照組。所有研究對(duì)象均測(cè)定血清中FFA、Hcy、Cys-C等指標(biāo)含量，采用方差分析和應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果CDN組、EDN組血清中FFA、Hcy、CysC水平均高于SDM組和對(duì)照組(P＜0.05)，且血清中FFA、Hcy、CysC水平CDN組＞EDN組＞SDM組＞對(duì)照組，各組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；T2DM患者血清FFA、Hcy、CysC水平與UAER呈正相關(guān)(r= 0.718，0.417，0.361；P＜0.05)。結(jié)論糖尿病患者FFA、Hcy、CysC水平與糖尿病腎病的發(fā)展進(jìn)程有關(guān)，各項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)早期診斷糖尿病腎病有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

糖尿病腎病；游離脂肪酸；同型半胱氨酸；胱抑素C

2型糖尿病(T2DM)是由遺傳和環(huán)境因素相互作用的常見(jiàn)慢性代謝綜合征，是人類最為普遍的內(nèi)分泌疾病。然而糖尿病腎病(DN)是糖尿病常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，DN晚期患者可出現(xiàn)腎功能衰竭，嚴(yán)重者危及患者的生命，DM患者如能早期發(fā)現(xiàn)腎損傷在可逆期進(jìn)行干預(yù)治療能延緩病情的發(fā)展，由此可見(jiàn)DN的早期診斷至關(guān)重要。FFA是反映脂代謝紊亂的一個(gè)關(guān)鍵指標(biāo)[1]，研究表明，F(xiàn)FA濃度的升高與T2DM的易感性[2]密切相關(guān)，也有研究報(bào)道[3-5]Hcy和Cys-C水平是衡量腎小球?yàn)V過(guò)功能的特異性指標(biāo)。據(jù)此，本研究檢測(cè)分析T2DM患者血清中FFA、Hcy、Cys-C和尿微量白蛋白的排泄率(UAER)等指標(biāo)，分析上述指標(biāo)在T2DM患者DN發(fā)生過(guò)程中早期診斷的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年3月至2013年12月在本院內(nèi)分泌科、腎內(nèi)科就診并確診為DM或DN病的患者150例，入選患者均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)及Mogensen于1983年提出糖尿病腎病分期標(biāo)準(zhǔn)。排除腫瘤、感染、自身免疫性疾病、原發(fā)性腎病、近期使用腎毒性藥物和心肝腎等疾病。根據(jù)UAER進(jìn)行分組，UAER≤30 mg/24 h者確定為單純T2DM組(SDM組)，共54例，其中男性32例，女性22例，年齡平均(55.7±5.98)歲；UAER30～300 mg/24 h者確定為早期糖尿病腎病組(EDN組)，共56例，其中男性32例，女性24例，年齡平均(61.39±9.79)歲；UAER＞300 mg/24 h為臨床糖尿病腎病組(CDN組)，共40例，其中男性17例，女性23例，年齡平均(60.30±10.21)歲。同時(shí)選擇同期進(jìn)行健康體檢確定為健康者作為對(duì)照組，共42例，其中男性25例，女性17例，年齡平均(57.30±6.71)歲。各組間性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。各患者組檢測(cè)前12 h均不服用降糖降脂藥物。

1.2 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

1.2.1 血標(biāo)本采集及相關(guān)指標(biāo)測(cè)定方法 所有研究對(duì)象均空腹12 h后采集靜脈血3 ml，1 h內(nèi)分離血清。以酶法測(cè)定血清FFA，試劑由日本積水醫(yī)療株式會(huì)社提供；以循環(huán)酶法測(cè)定血清Hcy，試劑由四川邁克生物科技有限公司提供；以免疫增強(qiáng)比濁法檢測(cè)血清Cys-C，試劑由上海景源醫(yī)療器械有限公司提供；以酶法檢測(cè)血中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)，試劑由寧波瑞源醫(yī)療有限公式提供。上述各指標(biāo)檢測(cè)均采用美國(guó)貝克曼-AU5400全自動(dòng)生化分析儀。

1.2.2 尿標(biāo)本的收集及UAER測(cè)定方法 受檢者留取24 h尿總量，以甲苯防腐，混勻尿液標(biāo)本，測(cè)量并記錄24 h尿量，取20 ml測(cè)定微量白蛋白(UmAlb)含量，計(jì)算UAER[UAER=UmAlb(mg/L)×24 h尿總量(L)]，UmAlb含量采用德國(guó)西門子BNP全自動(dòng)特種蛋白分析儀及原裝試劑檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。多組間均數(shù)比較采用方差分析，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行LSD兩兩比較分析。各檢測(cè)指標(biāo)間的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組檢測(cè)FFA、Hcy、CysC等指標(biāo)水平的比較 CDN組血清中各指標(biāo)水平均高于其他各組(P＜0.05)；EDN組血清中FFA、Hcy、CysC水平以及UAER均高于SDM組和對(duì)照組(P＜0.05)；SDM組血清中FFA、Hcy、CysC水平以及UAER高于對(duì)照組(P＜0.05)；各組間UAER、血清FFA、Hcy、CysC水平呈梯度升高；血清BUN、Cr水平僅在CDN組出現(xiàn)升高，SDM組與EDN組間均無(wú)變化(P＞0.05)，對(duì)腎損傷診斷敏感性差。組間方差分析與LSD兩兩比較分析詳見(jiàn)表1。

表1 各組FFA、HCY、Cys-C等指標(biāo)水平的比較(±s)

表1 各組FFA、HCY、Cys-C等指標(biāo)水平的比較(±s)

注:a與對(duì)照組比較，P＜0.05；b與單純DM組比較，P＜0.05；c與早期DN組比較，P＜0.05。

組別對(duì)照組(n=42) SDM組(n=54) EDN組(n=56) CDN組(n=40)F值P值Cr(μmol/L) 64.45±12.33 68.80±19.46 70.18±30.6 159.3±23.6abc15.89＜0.05 UAER(mg/24 h) 9.79±8.1 19.03±7.1ac158.1±129.3ab407.8±89.6abc198.5＜0.05 FFA(μmol/L) 378.3±117.1 535.6±149.5ac629.1±251.1ab750.5±251.1abc25.83＜0.05 Hcy(μmol/L) 7.99±1.7 11.2±2.2ac14.9±3.7ab18.17±4.1abc9.03＜0.05 CysC(mg/L) 0.75±0.45 0.97±0.45ac1.65±0.37ab2.35±0.37abc57.73＜0.05 BUN(mmol/L) 4.35±0.66 4.51±1.00 5.01±0.98 6.35±1.41abc3.67＜0.05

2.2 Pearson相關(guān)性分析 匯總各組所有T2DM病患者各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析：以血清中FFA、Hcy、CysC、UAER、Cr為因變量，以UAER為自變量，分別進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示FFA、Hcy、CysC分別與UAER呈正相關(guān)(r=0.718，0.417，0.361，P＜0.05)。

3 討論

DN是糖尿病發(fā)展進(jìn)程中最為常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，其早期病情呈隱匿狀態(tài)不易被發(fā)現(xiàn)，DN診斷與分期標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[6-7]，當(dāng)UAER＞30 mg/24 h時(shí)則認(rèn)為存在腎損傷，并將UAER 30～300 mg/24 h作為DN早期診斷的主要檢查指標(biāo)，此階段如能得到及時(shí)的干預(yù)治療腎損傷可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，然而UAER持續(xù)＞300 mg/24 h或出現(xiàn)常規(guī)蛋白尿，則導(dǎo)致不可逆性的腎損傷，最終導(dǎo)致腎功能衰竭[8]，由此可見(jiàn)DN早期診斷非常重要。以往臨床上常規(guī)腎功能檢測(cè)主要是以UAER、Cr作為觀察指標(biāo)，了解患者腎功能的損傷情況，但在早期腎損傷時(shí)血中UAER、Cr不易發(fā)生改變，仍可處在正常水平，只有在嚴(yán)重腎小球損傷，出現(xiàn)濾過(guò)功能障礙才可出現(xiàn)異常，一般腎小球?yàn)V過(guò)率降低50%以下時(shí)，其濃度才明顯升高[9]，從而導(dǎo)致最佳時(shí)機(jī)的治療時(shí)機(jī)被延誤。

FFA是機(jī)體脂肪分解的產(chǎn)物，生理狀態(tài)下處在較低的水平，病理性升高[10]的狀態(tài)下FFA對(duì)細(xì)胞膜具有很強(qiáng)的毒性作用，由于能增強(qiáng)細(xì)胞因子毒性，引起血管損傷，抑制外周葡萄糖的利用，促進(jìn)糖異生，并與胰島素抵抗密切相關(guān)；故此FFA比其他血脂指標(biāo)更早也更明顯地反映機(jī)體脂代謝紊亂水平以及對(duì)腎臟血管內(nèi)壁細(xì)胞的毒性作用。表明FFA可能通過(guò)氧化應(yīng)激反應(yīng)參與了DN患者腎臟的早期損傷過(guò)程。本研究結(jié)果顯示，糖尿病各組患者血中的FFA水平均高于正常對(duì)照者(P＜0.05)，值得注意的是SDM組與對(duì)照組間出現(xiàn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異意義較大，認(rèn)為SDM組患者已經(jīng)出現(xiàn)腎損傷，此時(shí)呈隱匿狀態(tài)。Cys-C是體內(nèi)有核細(xì)胞產(chǎn)生，且穩(wěn)定的釋放進(jìn)入血中，Cys-C可經(jīng)腎小球自由的濾過(guò)而被清除，在腎近曲小管進(jìn)行重吸收。但重吸收后不進(jìn)入血液，而是完全被代謝分解，因此，其血中濃度完全由腎小球?yàn)V過(guò)功能決定，不依賴任何外來(lái)因素，以及年齡、性別、體重指數(shù)等其他因素的影響，由此可見(jiàn)是一種理想的反映腎小球?yàn)V過(guò)率變化的具有同源性的標(biāo)志物，是可以用來(lái)替代血Cr監(jiān)測(cè)的一種內(nèi)源性生物指標(biāo)[11]。

研究結(jié)果表明，EDN患者血清CysC水平顯著高于SDM組，但此時(shí)的血UAER、Cr與對(duì)照組比較無(wú)顯著變化，說(shuō)明CysC水平升高同樣是DM患者早期腎損害的篩查指標(biāo)。Hcy是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物，高Hcy血能促進(jìn)糖尿病微血管并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展，同時(shí)Hcy產(chǎn)生超氧化物質(zhì)或過(guò)氧化物質(zhì)，加快脂質(zhì)過(guò)氧化作用，導(dǎo)致這些氧化物質(zhì)在血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)堆積增加，當(dāng)出現(xiàn)在腎臟微血管時(shí)則可直接引起腎組織損害和凋亡，通過(guò)細(xì)胞因子及炎癥過(guò)程，促發(fā)慢性腎病進(jìn)展[12]。有研究發(fā)現(xiàn)血中Hcy水平每增高5 mmol/L，UAER出現(xiàn)的危險(xiǎn)性增加30%[13]。本研究表明各組間Hcy水平變化與FFA水平變化一致，說(shuō)明Hcy檢測(cè)也是有利于腎損傷的早期診斷。

本次研究通過(guò)對(duì)EDN組和CDN組患者各指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析結(jié)果顯示UAER與FFA、Hcy、Cys-C相互之間均具有高度的正相關(guān)性(P＜0.01)，各指標(biāo)之間有著密切的聯(lián)系，其相關(guān)程度隨病程發(fā)展而增高，而UAER與BUN、Cr之間只是在CDN階段具有相關(guān)性(P＜0.05)，表明不同分期DN患者UAER、FFA、Hcy、Cys-C各指標(biāo)之間均存在著緊密的關(guān)聯(lián)性，各指標(biāo)之間預(yù)示可能存在促進(jìn)DN病程發(fā)展的共同因素，表明了多因素相互作用致病的結(jié)果，證實(shí)了FFA、Hcy、Cys-C的水平變化在病程發(fā)展中起著重要的作用。

綜上所述，DN患者血清FFA、Hcy、CysC水平顯著升高，比傳統(tǒng)腎功能檢測(cè)指標(biāo)UAER、Cr出現(xiàn)更早，且與UAER水平變化顯著正相關(guān)，所以定期聯(lián)合監(jiān)測(cè)FFA、Hcy、CysC，有利于對(duì)DN的早期診斷和早期治療。

[1]Rickels MR,Naji A,Teff KL.Insulin sensitivity glucose effectiveness and free fatty acid dynamics after human islet transplantation for type I diabetes[J].J Clin Endocrinol Metab,2006,91(6): 2138-2144.

[2]Paolisso G,Tataranni PA,Foley JE,et al.A high concentration of fasting plasma non-esterified fatty acids is risk factor for development of NIDDM[J].Diabetologia,1995,38(10):1213-1217.

[3]鄭利平.血清游離脂肪酸、胱抑素C與Ⅱ型糖尿病腎病關(guān)系研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,41(1):128-129.

[4]馮文忠,安 云,張仁虎.CTGF,胱抑素C和尿β2-MG聯(lián)合檢測(cè)在糖尿病腎病早期病變中的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013, 28(2):96-98.

[5]劉 菊,梅群超.2型糖尿病微血管病變患者血漿同型半胱氨酸、胱抑素C水平及血液流變學(xué)指標(biāo)變化[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2012,22 (3):39-41.

[6]Mogensen CE,Schmitz A,Christensen CK.Comparative renal pathophysiology relevant to IDDM and NIDDM patient[J].Diabetes Metabol Rrv,1988,4:453-483.

[7]聶春巖,陳莉明.糖尿病腎病的診斷[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志,2010, 30(5):422-424.

[8]李春霖,龔燕平,田 慧.糖適平與胰島素對(duì)老年男性Ⅱ型糖尿病早期腎病患者降糖療效以及腎功能影響的對(duì)比觀察[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè),2005,2(3):6-8.

[9]王鴻利,仲人前.實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004: 118.

[10]胡漢寧,童秀峰,陳 薇,等.丙型肝炎患者血清游離脂肪酸水平與丙肝病毒RNA載量及肝損傷的關(guān)系[J].微循環(huán)學(xué)雜志,2013, 23(4):51-52.

[11]Weinert LS,Camargo EG,Soares AA,et al.Glomerular filtration rate estimation:performance of serum cystatin C-based prediction equations[J].Clin Chem Lab Med,2011,49(11):1761-1771.

[12]Massy ZA,Ceballos I,Chadefaux-vekemens B,et al.Homocystine oxidative stress and endothelium function in uremic patients[J]. Kidney Iat(Suppl),2001,78:243-245.

[13]Bostom A,Brosnan JT,Hall B,et al.Net uptake of plasma homocysteine by the rat kidneyin vitro[J].Atheerosclerosis,1995,116(1): 59-62.

Application value of serum FFA,Hcy and Cys-C levels in diagnosing diabetic nephropathy at early stage.

CHEN Wei1,TONG Xiu-feng2,LI An-ling1,HU Han-ning1.1.Department of Clinical Laboratory,Zhongnan Hospital of Wuhan University,Wuhan 430071,Hubei,CHINA;2.Department of Clinical Laboratory,Liangzihu Hospital of Ezhou, Ezhou 436060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo establish the relationship between indexes of serum free fatty acids(FFA),homocysteine(Hcy)and Cystatin-C(Cys-C)levels with Type 2 diabetes mellitus(T2DM)at each stage,and to determine their application values.MethodsOne hundred and fifty T2DM patients were selected and divided into three groups according to the levels of urinary albumin excretion rates(UAER):simple diabetic mellitus group(SDM group,n= 54),early diabetic nephropathy group(EDN group,n=56),clinical diabetes nephropathy group(CDN group,n=40). Forty-two healthy subjects of the same period determined by physical examination were enrolled as the control group. FFA,Hcy and Cys-C and other indexes in serum were determined for all subjects.T-test and variance analysis and Pearson correlation analysis were applied to make statistical analysis of all indexes.ResultsSerum FFA,Hcy,Cys C levels in CDN group and EDN group were significantly higher than SDM group and the control group(P＜0.05),and the levels from high to low was CDN group,EDN group,SDM group,the control group,with statistically significant difference between any two groups(P＜0.05).In T2DM patients,the FFA,Hcy,Cys C levels were found positively correlated with UAER(r=0.718,0.417,0.361;P＜0.05).ConclusionThe FFA,Hcy and CysC levels of T2DM patients are related with the development process of diabetic nephropathy.Joint detection of all indexes has significant clinical application value in the early diagnosis of diabetic nephropathy.

Diabetic nephropathy;Free fatty acid;Homocysteine;Cystatin C

R587.2

A

1003—6350（2015）03—0375—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.03.0134

2014-06-18)

湖北省自然科學(xué)基金(編號(hào)：2012FFB04411)

胡漢寧。E-mail：648250627@qq.com