鄭淑華，黃瑞玉，穆小萍，盧春敏

(廣東省婦幼保健院檢驗科，廣東 廣州 511400)

卵巢腫瘤患者血清胱抑素C表達水平及臨床意義

鄭淑華，黃瑞玉，穆小萍，盧春敏

(廣東省婦幼保健院檢驗科，廣東 廣州 511400)

目的 檢測卵巢腫瘤患者血清胱抑素C的表達水平，分析其發(fā)生變化的原因及臨床意義。方法收集40例卵巢癌患者、40例卵巢良性腫瘤患者和40例健康體檢婦女的血清標本，采用乳膠增強免疫透射比濁法分別對標本進行血清胱抑素C的檢測，總體均值比較采用單因素方差分析，組間均值兩兩比較采用LSD分析。結(jié)果卵巢癌患者血清胱抑素C水平均比卵巢良性腫瘤患者和健康體檢婦女的血清水平顯著升高，差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而卵巢良性腫瘤者與健康體檢者比較則差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論卵巢癌患者血清胱抑素C水平顯著升高，提示胱抑素C參與了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)歸的過程。

卵巢腫瘤；侵襲；胱抑素C

胱抑素C(cystatin C，Cys C)屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族的成員，其生理功能可抑制半胱氨酸蛋白酶(如CatB、H、L和X)的活性，從而保護細胞免受不適當(dāng)?shù)膬?nèi)源性或外源性蛋白酶的水解，并參與細胞內(nèi)外蛋白水解過程的調(diào)控[1-2]。胱抑素C被認為與腫瘤細胞的增殖、分化和遷移有關(guān)，卵巢腫瘤組織內(nèi)蛋白酶抑制劑表達量的變化與腫瘤細胞向外浸潤與轉(zhuǎn)移有著非常密切的關(guān)系[3]。本文旨在檢測胱抑素C在卵巢良惡性腫瘤患者血清中的表達情況，探討其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展和侵襲過程中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月至2013年10月在我院婦科進行手術(shù)的卵巢腫瘤患者80例，經(jīng)手術(shù)后病理確診為卵巢癌和卵巢良性腫瘤各40例，均排除其他生理性和病理性原因影響胱抑素C濃度變化，患者年齡40～56歲，同時收集相同年齡階段的健康體檢婦女血清標本40例。

1.2 方法 上述三組研究對象均在早晨空腹抽血，立即離心分離血清，采用西門子AD1800全自動生化分析儀分別檢測血清Cys C、肌酐、空腹血糖、膽固醇和甘油三酯水平。Cys C檢測方法為膠乳增強免疫透射比濁法，試劑及校準品購自四川邁克公司，肌酐、空腹血糖、膽固醇和甘油三酯均采用氧化酶法，試劑及校準品均購自北京Human公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，所有計量數(shù)據(jù)以均值±標準差(±s)表示，總體均值比較采用單因素方差分析，組間均值兩兩比較采用LSD方法，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 三組受試者血清各項指標檢測結(jié)果 研究對象各項指標檢測結(jié)果均在本實驗室提供的參考范圍內(nèi)，可提示指標正常，排除由其他疾病影響患者血清胱抑素C水平的變化，見表1。

表1 三組受試者的血清各項指標檢測結(jié)果(±s)

表1 三組受試者的血清各項指標檢測結(jié)果(±s)

組別 空腹血糖(mmol/L)膽固醇(mmol/L)甘油三酯(mmol/L)肌酐(μmol/L)健康體檢組卵巢良性腫瘤組卵巢癌組4.37±0.19 4.59±0.23 4.51±0.17 4.18±0.21 4.12±0.13 4.37±0.16 0.93±0.36 1.06±0.27 1.17±0.21 53.08±5.91 49.89±6.07 54.75±5.29

2.2 三組受試者血清胱抑素C水平比較 卵巢癌組患者血清胱抑素C水平為(2.06±0.19)mg/L，而卵巢良性腫瘤組患者和健康體檢組婦女血清胱抑素C水平分別為(0.83±0.13)mg/L和(0.78±0.12)mg/L，組間均值兩兩結(jié)果比較顯示，卵巢癌組血清胱抑素C水平比后兩組明顯升高，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，而卵巢良性腫瘤組與健康體檢組比較則差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 三組受試者的血清胱抑素C水平分布頻率及均值分布 三組受試者胱抑素C水平分布頻率見圖1，三組受試者的胱抑素C水平均值分布見圖2。

圖1 三組受試者血清Cys C水平分布頻率（mg/L）

圖2 三組受試者血清Cys C水平均值分布圖(mg/L，±2s)

3 討論

卵巢惡性腫瘤是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著婦女生命安全。近年來，隨著腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移機制的深入研究，已發(fā)現(xiàn)半胱氨酸內(nèi)源性抑制劑的Cystatin家族成員與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]，胱抑素C(cystatin C，Cys C)抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的研究正日益受到人們關(guān)注。Cys C屬半胱氨酸蛋白酶抑制劑超家族成員，分子量僅為13 kDa的非糖基化分子，包含120個氨基酸殘基，由機體有核細胞恒定產(chǎn)生，與性別、年齡、肌肉量、飲食無關(guān)[1-2]。Cys C是一種蛋白酶抑制劑，儲存于組織內(nèi)，能通過與半胱氨酸蛋白酶(如CatB、H、L和X)結(jié)合而抑制其活性，從而保護機體細胞免受內(nèi)源性或外源性蛋白酶的水解，并參與細胞內(nèi)外蛋白水解的調(diào)控過程[3-4]。目前已發(fā)現(xiàn)多種腫瘤的患者組織及血清中出現(xiàn)各種蛋白酶及其抑制劑的異常表達，均與腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移相關(guān)，組織蛋白酶與其抑制劑之間平衡狀態(tài)的失調(diào)已被認為與腫瘤的惡變和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3-4]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，Cys C與腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)，在卵巢囊液中，Cys C檢測結(jié)果顯示惡性腫瘤患者比良性腫瘤患者要明顯高得多[5]，血清Cys C被認為是與惡性腫瘤細胞增殖分化和浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的一項指標。在卵巢癌腫瘤組織中，細胞外胱氨酸蛋白酶含量明顯增高，而細胞內(nèi)抑制劑則無變化或僅有輕度升高，出現(xiàn)卵巢惡性腫瘤組織中胱氨酸蛋白酶與其抑制劑分泌不平衡的現(xiàn)象，隨之機體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，使Cys C水平相應(yīng)升高，以抑制腫瘤組織中升高的胱氨酸蛋白酶的水解活性，從而抑制卵巢腫瘤細胞的生長、侵襲和遠處轉(zhuǎn)移[6-7]。

為了解Cys C在卵巢腫瘤患者血清中的表達情況，以及分析其與卵巢腫瘤良惡性的關(guān)系，本資料收集相同例數(shù)的卵巢癌和卵巢良性腫瘤患者，通過檢測其血清Cys C水平，并與正常健康體檢婦女比較，發(fā)現(xiàn)卵巢癌患者血清中Cys C的濃度明顯高于卵巢良性腫瘤患者和健康體檢婦女，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，并且與其他學(xué)者研究結(jié)果一致[8]。表明卵巢癌細胞超表達Cys C蛋白質(zhì)編碼基因，在卵巢癌發(fā)展過程中胱氨酸蛋白酶與其抑制劑分泌出現(xiàn)失衡現(xiàn)象，從而促進卵巢癌細胞的生長侵襲和遠處轉(zhuǎn)移[9]。卵巢癌腫瘤組織中Cys C的高表達，可能是由于機體反饋調(diào)節(jié)機制的作用，在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中，卵巢腫瘤組織細胞及其微環(huán)境大量表達各類半胱氨酸組織蛋白酶，導(dǎo)致細胞內(nèi)溶酶體中各類半胱氨酸組織蛋白酶類分泌釋放出來，并與腫瘤細胞表面結(jié)合，發(fā)揮生物學(xué)功能，溶解組織蛋白，引起腫瘤細胞生長、遷徙、侵襲、血管發(fā)生和轉(zhuǎn)移[9]，而腫瘤組織中半胱氨酸蛋白酶上調(diào)表達會反饋性引起Cys C表達的增多，于是Cys C發(fā)揮其抑制功能抑制了半胱氨酸蛋白酶的活性，使其無法對正常細胞和細胞外基質(zhì)進行降解和破壞作用，從而降低了卵巢癌細胞向外擴散和侵襲的能力[10]。

由此可見，細胞外半胱氨酸組織蛋白酶類與半胱氨酸蛋白酶抑制劑C水平的平衡對卵巢腫瘤患者來說非常重要，Cys C能抑制細胞內(nèi)外半胱氨酸蛋白酶的水解活性，在卵巢癌腫瘤細胞的生長、血管生成、浸潤和轉(zhuǎn)移中起重要作用，。血清Cys C雖非卵巢腫瘤特異性標志物，但作為腫瘤生化輔助診斷指標仍有一定的應(yīng)用價值，若結(jié)合其他相關(guān)卵巢腫瘤標志物檢測，可提高陽性檢出率，有望成為臨床卵巢癌診斷和預(yù)后檢測的指標。

[1]Ognibene A,Mannucci E,Caldini A,et al.Cystatin C reference values and aging[J].Clin Biochem,2006,39:658-661.

[2]Weinert LS,Prates AB,do Amaral FB,et al.Gender does not influence cystatin C concentrations in healthy volunteers[J].Clin Chem Lab Med,2010,48:405-408.

[3]Mohamed MM,Sloane BF.Sloane.Cysteine cathepsins:multifunctional enzymes in cancer[J].Nature Reviews,2006,6(10):764-775.

[4]Rakashanda S,Rana F,Rafiq S,et al.Role of proteases in cancer:A review[J].Biotechnology and Molecular Biology Review,2012,7 (4):90-101.

[5]Eva K,Leon F,Chris M,et al.Cathepsins B,L and cystatin C in cyst Xuid of ovarian tumors[J].Cancer Res Clin Oncol,2010,136: 771-778.

[6]Kolwijck E,Kos J,Obermajer N,et al.The balance between extracellular cathepsins and cystatin C is of importance for ovarian cancer[J].Eur J Clin Invest,2010,40(7):591-599.

[7]Elena AG,Valentina AL,Ivan VB,et al.Evaluation of serum procathepsin B,cystatin B and cystatin C as possible biomarkers of ovarian cancer[J].Int J Circumpolar Health,2013,doi:10.3402/ijch. v72i0.21215.

[8]孫繼興,楊雅靜,趙 剛,等.惡性腫瘤患者血清中胱抑素C水平測定及臨床相關(guān)研究[J].職業(yè)與健康,2010,26(17): 2030-2031.

[9]Nishikawa H,Ozaki Y,Nakanishi T,et al.The role of cathepsin B and cystatin C in the mechanisms of invasion by ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol,2004,92(3):881-886.

[10]Keppler D.Towards novel anti-cancer strategies based on cystatin function[J].Cancer Lett,2006,235:159-176.

Variance of serum cystatin C levels in patients with ovarian cancer and its significance.

ZHENG Shu-hua, HUANG Rui-yu,MU Xiao-ping,LU Chun-min.Department of Clinial Laboratory,Guangdong Women and Children Hospital,Guangzhou 511400,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo determine the levels of cystatin C in patients with ovarian cancer,and to analyze the reason of variance and its significance.MethodsForty ovarian cancer patients,40 ovarian benign tumor patients,and 40 healthy individuals were included in the study.Serum cystatin C was detected by the method of Emulsion Enhanced Turbidimetric Immuno-Assay.All data were statistically analyzed using the One-Way ANOVA and LSD method.ResultsThe levels of cystatin C in ovarian cancer group were significantly higher than those in both ovarian benign tumor group and healthy group(P＜0.01).And there was no statistically significant difference between data of the ovarian benign tumor group and healthy group(P＞0.05).ConclusionThe significant increase of cystatin C level in patients with ovarian cancer indicates that cystatin C is actually involved in the development of ovarian cancer.

Ovarian cancer;Invasion;Cystatin C

R737.31

A

1003—6350（2015）17—2551—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.17.0924

2014-12-21)

鄭淑華。E-mail：489611421@qq.com