郭明鋒

(浙江省消防總隊醫(yī)院，浙江杭州310011)

●醫(yī)學研究

粒細胞巨噬細胞刺激因子對大鼠創(chuàng)面JNK通路的作用

郭明鋒

(浙江省消防總隊醫(yī)院，浙江杭州310011)

目的:研究粒細胞巨噬細胞刺激因子(GM-CSF)對大鼠創(chuàng)面愈合的影響及對JNK信號通路的作用。方法:將30只鼠隨機分為治療組和對照組，每組各15只。于其背部制作約2cmx2cm全層皮膚缺損創(chuàng)面。治療組大鼠創(chuàng)面外涂重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子(rhGM-CSF)凝膠，對照組創(chuàng)面涂抹不舍任何藥物的凝膠基質。觀察傷后創(chuàng)面愈合率、GM-CSF含量和JNK信號通路中蛋白表達量。結果:治療組傷后不同時間的創(chuàng)面愈合率均明顯高于對照組，P＜0．05。治療組GM-CSF含量在不同的時相點均明顯高于對照組(P＜0．05)。蛋白印跡結果表明治療組大鼠創(chuàng)面p-JNK表達量顯著升高，并且各時相點均高于對照組(P＜0．05)。結論:GM-CSF能促進大鼠創(chuàng)面組織愈合，其機制可能與JNK信號通路激活有關。

粒細胞巨噬細胞集落刺激因子;JNK信號通路;創(chuàng)面愈合

粒細胞巨噬細胞刺激因子(GM-CSF)是一種多功能細胞因子，研究顯示［1］，GM-CSF具有促進創(chuàng)面愈合的作用，尤其是對于難愈性創(chuàng)面和慢性創(chuàng)面有顯著療效，但作用機制尚不明了。皮膚的創(chuàng)傷愈合是一個十分復雜精細的生物學過程，涉及到多條細胞信號傳導通路［2］。我們對創(chuàng)傷愈合過程中JNK信號通路的變化進行初步研究，旨在為創(chuàng)面愈合治療尋找新的藥物靶點。

一、材料與方法

(一)主要試劑與儀器。

p-JNK和JNK抗體，外用型重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子凝膠和外用型凝膠基質，ELlSA試劑盒。

(二)方法。

將30只鼠(上海中國科學院實驗動物中心，體重180-220g)隨機分為治療組和對照組，每組各15只。于其背部制作約2cmx2cm全層皮膚缺損創(chuàng)面。治療組大鼠創(chuàng)面外涂重組人粒細胞巨噬細胞刺激因子(rhGM-CSF)凝膠，對照組創(chuàng)面涂抹不舍任何藥物的凝膠基質，分籠飼養(yǎng)，每日給藥1次，直至創(chuàng)面完全封閉。

(三)觀察指標。

觀察傷后創(chuàng)面愈合率，使用數碼相機對創(chuàng)面進行拍照并用Image J圖像分析軟件進行分析，創(chuàng)面愈合率=(原始創(chuàng)面面積-各時相點創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積x100%，采用ELISA法測定GM-CSF含量，采用蛋白質印跡法檢測JNK信號通路中蛋白表達量。

(四)統(tǒng)計學分析。

所得數據用SPSS軟件13．0分析，組間比較采用t檢驗，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

二、結果

大鼠創(chuàng)面愈合率結果如下(見表1)。

創(chuàng)面組織GM-CSF含量檢測與JNK信號通路蛋白表達量果如下(見表2)。

表1 兩組大鼠創(chuàng)面愈合率比較

表2 創(chuàng)面組織GM-CSF含量比較

三、討論

粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)是一種多功能的造血生長因子，研究表明GM-CSF能作用于成纖維細胞、角質細胞和內皮細胞等，具有促進細胞增殖、分化和遷移等作用［3］。同時多種參與創(chuàng)面修復過程的細胞如角質細胞、內皮細胞等合成分泌GM-CSF，其中角質細胞是產生GM-CSF的主要細胞。參與了創(chuàng)面愈合過程并發(fā)揮了重要作用，但GM-CSF促進創(chuàng)面愈合的具體作用機制目前尚未清楚。MAPK因其調控多條信號通路而倍受學者們普遍關注，對細胞增殖、形態(tài)發(fā)生、細胞分化和凋亡的調節(jié)等方面均發(fā)揮著重要作用，其中JNK是其重要成員之一，JNK的激活能抑制角朊細胞的分化從而促進傷口的愈合，JNK通路的激活被認為在果蠅和鼠類傷口愈合細胞遷移過程中是必要的［4］。我們研究結果顯示，治療組傷后不同時間的創(chuàng)面愈合率均明顯高于對照組，治療組GM-CSF含量在不同的時相點均明顯高于對照組。蛋白印跡結果表明治療組大鼠創(chuàng)面p-JNK表達量顯著升高，并且各時相點均高于對照組，說明JNK通路的激活可能在創(chuàng)面愈合過程中發(fā)揮重要作用。總之，我們的研究證實粒細胞巨噬細胞集落刺激因子可以顯著促進創(chuàng)面的愈合，其機制可能與JNK信號通路激活有關。

［1］El-Saghir N，Otrock Z，Mufarrij A，etal．Dexrazoxane for anthracycline extravasation and GM-CSF for skin ulceration and wound healing．Lancet Oncol2004，5:320-321．

［2］Hafner C，Meyer S，Hagen I，et al．Ephrin-B reverse signaling induces expression ofwound healing associated genes in IEC-6 intestinal epithelial cells．World JGastroenterol 2006，11:4511-4518．

［3］Nishihara T，Ochi M，Sugimoto K，et al．Subcutaneous injection containing IL-3 and GM-CSF ameliorates stab wound-inducedbrain injury in rats［J］．Exp Neurol，2011，229:507-516．

［4］Bosch M，Serras F and Martin-Blanco E．JNK signaling pathway required for wound healing in regenerating Drosophila wingimaginal discs．Dev Biol 2005，280:73-86．

R644

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1002-1701(2015)01-0129-02

2014-01

郭明鋒，男，本科，主任醫(yī)師，研究方向:燒傷科。

10．3969/j．issn．1002-1701．2015．01．069